平脈通顆粒對Ｄ－半乳糖所致亞急性衰老模型自由基代謝的影響

潘光輝　陳國華　孟祥鳳　沈守祥

[摘要] 目的 探討平脈通顆粒對D-半乳糖所致亞急性衰老模型自由基代謝的影響。方法 Wistar大鼠60只,隨機分為模型對照組、平脈通組。選用昆明種小鼠60只,隨機分為模型對照組、平脈通組。實驗結束后將大鼠處死,斷頭取腦,制成10%的組織勻漿,測定一氧化氮(NO)、脂褐素(LP)、丙二醛含量(MDA)及超氧化物歧化酶活力(SOD);收集小鼠血液測定SOD、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、MDA含量。結果 平脈通組與模型對照組比較,均有顯著性差異(P<0.05,P<0.01),平脈通組中大鼠腦組織中NO含量顯著增加,LP和MDA顯著減少(P<0.01),小鼠血清中SOD、GSH-Px的含量(P<0.05,P<0.01)明顯提高。結論 平脈通顆粒使D-半乳糖所致亞急性衰老模型NO含量增加,調整自由基代謝,提高抗氧化酶的活力,抑制自由基對機體的損傷,改善機體衰老導致的各種病理變化。

[關鍵詞] 平脈通顆粒; D-半乳糖; 衰老模型; 自由基; 大鼠; 小鼠

[中圖分類號] R285.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2009)27-19-02

Effects of Pingmaitong Granules on Free Radical Metabolism of D-galactose-induced Subacute Aging Model

PAN Guanghui CHEN Guohua MENG Xiangfeng SHEN Shouxiang

Weifang Peoples Hospital,Shandong Provice,Weifang 261041,China

[Abstract] ObjectiveTo investigate the effects of Pingmaitong granules on free radical metabolism of D-galactose-induced subacute aging model. MethodsSixty Wistar rats were randomly divided into model control group and pingmaitong granule group,and 60 Kunming species mice were also randomly divided into model control group and Pingmaitong granule group. After the experiment was finished,Wistar rats were killed,and the brains were taken out to be prepared into 10% tissue homogenate for measuring the levels of NO,LP,MDA and SOD,and the blood from Kunming species mice was collected for measuring the levels of SOD,GSH-Px and MDA. ResultsPingmaitong granule group was significantly different from model control group(P<0.05,P<0.01). In pingmaitong granule group,the NO content of the Wistar rat brain was obviously increased,the levels of LP and MDA were decreased markedly(P<0.01), and the levels of serum SOD and GSH-Px of Kunming species mice were obviously increased(P<0.05,P<0.01). ConclusionPingmaitong granules can increase the NO content of D-galactose-induced subacute aging model,adjustfree radical metabolism,raise the antioxidase activity,inhibit free radical damage to the body,and improve a variety of pathological changes caused by the body aging.

[Key words]Pingmaitong granules; D-galactose; Aging model; Free radical; Rat; Mouse

根據(jù)老年人的生理、病理與臨床特點,我們認為腎虛與血瘀并存是引起老化的重要原因之一,因而確定以補腎益氣活血法為主組成平脈通,應用該方劑,參照《中藥新藥臨床研究指導原則》[1]及第二次全國中醫(yī)、中西醫(yī)結合老年醫(yī)學研究協(xié)作組會議通過的《延緩衰老中藥的篩選規(guī)程和臨床觀察規(guī)范》[2],對衰老的動物模型進行了一系列的觀察研究,報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 Wistar大鼠,體重選用200~260g,60只雌雄各半。昆明種小鼠,3月齡,體重20~25g,60只雌雄各半。

1.1.2 實驗試劑 NO測試盒、SOD測試盒、GSH-Px、MDA試劑盒、脂褐素測定試劑盒等均由南京建成生物工程研究所提供。

1.2 藥品制備

平脈通顆粒12g/袋(含生藥量為24g),方劑組成:何首烏、肉蓯蓉、炙黃芪、川芎、當歸、丹參。由濰坊市中藥廠加工,批號12980,做一般實驗時臨時配制成0.10g/mL、0.30g/mL 濃度的混懸液(含生藥量分別為0.2g、0.6g),置4℃冰箱保存。

1.3 造模方法

參照《實驗動物和動物實驗技術》及中國人民解放軍總醫(yī)院老年醫(yī)學研究所李文彬教授等人的方法進行。各組大鼠頸背部皮下注射20%D-半乳糖生理鹽水0.5mL/d,連續(xù)42d;各組小鼠頸背部皮下注射20%D-半乳糖生理鹽水0.5mL/d,連續(xù)30d,可造成亞急性衰老模型,出現(xiàn)神經功能、免疫功能及機體抗氧化作用降低。

1.4 動物分組及給藥方法

選用Wistar大鼠60只,雄雌各半,分籠飼養(yǎng)隨機分為兩組,每組30只。(1)模型對照組:灌胃生理鹽水5mL/d;(2)平脈通組:灌胃平脈通顆粒劑混懸液5mL/d(32.4 g/kg)。均分兩次灌胃,連續(xù)12周。

選用昆明種小鼠60只,雄雌各半,分籠飼養(yǎng)隨機分為兩組,每組30只,(1)模型對照組:灌胃生理鹽水5mL/d;(2)平脈通組:灌胃平脈通顆粒劑混懸液5mL/d(32.4 g/kg)。均分兩次灌胃,連續(xù)12周。

1.5 統(tǒng)計學處理

分類資料采用構成比檢驗,等級資料采用Ridit分析,兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗。

2 結果

將實驗鼠處死,斷頭取腦,用生理鹽水洗凈血液及其他污物,濾紙吸干。取右半腦海馬區(qū)腦組織(小鼠取全腦),電子天平稱重,加10倍體積pH7.4磷酸鹽緩沖液制備10%的組織勻漿,按試劑盒說明書操作,測定NO、LP、MDA、GSH-Px含量,用光化學擴增法測定SOD活力。用t檢驗法統(tǒng)計,結果見表1～3。

3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學認為,衰老的機制之一是由于自由基體內反應水平增高時,作用于機體細胞的生物大分子,使分子受害,從而引起疾病和衰老。人體內有許多捕捉自由基的酶,如SOD等。人在中老年以后,此酶隨著年齡的增長而減少[3]。近來的研究還發(fā)現(xiàn),NO含量與衰老之間有相關關系,在衰老過程中發(fā)揮一定作用。因此在各種衰老理論中,衰老的自由基理論可能是最重要的一個。衰老的自由基理論認為,衰老和與衰老關聯(lián)的退化性疾病基本上可歸因于自由基對細胞成分和連接組織的有害進攻[4,5]。給實驗動物連續(xù)注射D-半乳糖,因糖代謝紊亂發(fā)生衰老時的退行性變化,具有與自然衰老相類似的自由基代謝紊亂及抗氧化功能降低的特征。

中醫(yī)學認為腎虛精虧、氣虛血瘀是衰老的主要病因病機,延緩衰老在用補腎法的同時,同樣強調補氣養(yǎng)血活血。平脈通中以何首烏為主補腎固精;黃芪補氣健脾;肉蓯蓉補腎氣,益精血;當歸補血活血;川芎活血行氣;丹參活血祛瘀通經。諸藥合用,平補陰陽,調養(yǎng)五臟,溫而不燥,補而不膩,性味平和,無陰陽偏盛之弊,全方共奏補腎填精養(yǎng)血活血之功效。

本實驗結果表明,D-半乳糖致衰老模型大鼠和(或)小鼠血清和(或)腦組織SOD、GSH-Px、NO水平明顯下降,LP、MDA水平明顯升高,反映了衰老的病理特征。結果顯示平脈通顆粒通過補腎益氣活血可顯著提高D-半乳糖致衰老模型大鼠和(或)小鼠血清和(或)腦組織SOD、GSH-Px、NO水平,顯著降低LP、MDA。充分表明平脈通能增強機體抗氧化能力,具有提高機體清除自由基、減少自由基過氧化損傷的作用,顯著降低隨增齡而活性增高的LP、MDA,產生延緩組織器官老化的作用,為今后進行臨床試驗提供了參考依據(jù)。

[參考文獻]

[1] 鄭筱萸. 中藥新藥臨床研究指導原則[M]. 北京:中國科學技術出版社,2002:361-390.

[2] 中國中西醫(yī)學會老年醫(yī)學研究會. 延緩衰老中藥的篩選規(guī)程和臨床觀察規(guī)范[S]. 中西醫(yī)結合雜志,1986,6(11):683.

[3] Egashira K,Inou T,Hirooka Y,et al. Effects of age on endothelium-dependent vasodilation of resistance coronary artery by acetylcholine in humans[J]. Circulation,1993,88:77-81.

[4] Harman D. Free radicals in aging[J]. Mol Cell Biochem,1988,84(2):155-161.

[5] Biesalski HK. Free radicals theory of aging[J]. Curr Opin Clin Nutr Metab Care,2002,5(1):5-10.

(收稿日期:2009-06-24)