黃花補(bǔ)血草組織培養(yǎng)試驗(yàn)研究

常黎民　張文蓮

摘要通過對(duì)野生黃花補(bǔ)血草組織培養(yǎng)與快速繁殖的研究,得出:叢生芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L;叢生芽增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L;在1/2 MS+NAA 0.5mg/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)健壯單芽4周內(nèi)生根率達(dá)63%;瓶苗常規(guī)馴化后選用國產(chǎn)泥炭土煉苗成活率最高,為46%。

關(guān)鍵詞黃花補(bǔ)血草;組織培養(yǎng);叢生芽;增殖培養(yǎng);生根率;煉苗

中圖分類號(hào) S567.23+9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 1007-5739(2009)15-0080-02

黃花補(bǔ)血草(Limoniumaureum),白花丹科補(bǔ)血草屬植物,多年生草本,株高9～40cm,葉基生,灰綠色,矩圓狀匙形至倒披針形,傘房狀圓錐花序,花萼金黃色,漏斗狀,膜質(zhì),因其金黃色膜質(zhì)花萼長時(shí)間不落,在干旱、植物稀少的荒漠地區(qū)極為醒目,且具有補(bǔ)血作用,故又稱金色補(bǔ)血草、金匙葉草。多生于灘地、湖盆、戈壁、石質(zhì)山坡、流動(dòng)沙丘等干旱荒漠生境下。該植物耐鹽堿、耐貧瘠、耐干旱,是一種耐鹽性很強(qiáng)的旱生泌鹽植物,在年降雨量300mm以上的地區(qū)不需澆水可正常生長,是草坪用水量的1/10;在氣溫-36℃以內(nèi)可安全越冬;土壤pH值9以下、含鹽量0.4%以內(nèi)可正常生長開花。尤為奇特的是其膜質(zhì)花萼在6～9月無風(fēng)季節(jié),保持不落,如一團(tuán)團(tuán)金色火焰傲立于荒漠戈壁甚至流動(dòng)沙丘上。是干旱荒漠地區(qū)為數(shù)不多的野生花卉之一,花色艷美,繁密華貴,保持時(shí)間極長,可作插花中的配材和襯花,也可用來制作干花,其韻味獨(dú)特,是插花藝術(shù)中不可多得的花材,又是防風(fēng)固沙的優(yōu)良植物。其開發(fā)利用前景廣泛。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

外植體材料是2003年9月從西寧市火燒溝野生植株上采收的種子。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1外植體的清洗、滅菌。種子流水沖洗30min→超凈臺(tái)上無菌水沖洗2次→75%的酒精浸泡30s→無菌水沖洗4次→0.1%升汞浸泡10min→無菌水沖洗8次→無菌濾紙吸干水分→接到預(yù)備好的培養(yǎng)基中。

1.2.2基本培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。以MS為基本培養(yǎng)基,分別附加激素6-BA(0mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L)和NAA(0mg/L、0.02mg/L、0.04mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L、0.50mg/L)進(jìn)行叢生芽的誘導(dǎo)及增殖培養(yǎng);以MS為基本培養(yǎng)基,選擇1/2無機(jī)鹽濃度和NAA(0mg/L、0.1 mg/L、0.2mg/L、0.3mg/L)、IBA(0mg/L、0.1mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、 1.0mg/L)進(jìn)行不定根的培養(yǎng)。以上培養(yǎng)基中均附加食用白糖30g/L、瓊脂5.3g/L,pH值5.8。培養(yǎng)條件:溫度(20±2)℃;光照強(qiáng)度2 000～2 500Lx;光照時(shí)數(shù)12h/d。

2結(jié)果與分析

2.1不同激素濃度及配比對(duì)叢生芽誘導(dǎo)的影響

接種3d后種子開始萌發(fā);5d時(shí)30%展葉,芽苗葉片大部分呈紅色,少數(shù)呈綠色;15d時(shí)展葉芽苗基部腫大生長愈傷組織;29d時(shí)發(fā)現(xiàn)明顯的叢生芽生長(見表1)。

從表1可看出,黃花補(bǔ)血草種子在添加或不添加激素的培養(yǎng)基中均能發(fā)芽,含有激素的培養(yǎng)基發(fā)芽率較高,其中6-BA/NAA為5.0mg/L的培養(yǎng)基最高。與不加任何激素的對(duì)照培養(yǎng)基對(duì)比,發(fā)現(xiàn)含有激素的培養(yǎng)基均能誘導(dǎo)出愈傷組織和叢生芽,且6-BA/NAA為5.0mg/L的培養(yǎng)基其愈傷組織和叢生芽誘導(dǎo)率最高且相等。因此,綜合激素濃度對(duì)芽苗生長的影響,在黃花補(bǔ)血草種子無菌播種誘導(dǎo)培養(yǎng)中選擇MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L培養(yǎng)基比較理想。

2.2不同激素濃度及配比對(duì)增殖培養(yǎng)的影響

根據(jù)誘導(dǎo)培養(yǎng)中6-BA/NAA為5.0mg/L時(shí)叢生芽過于茂盛的試驗(yàn)結(jié)果,在增殖培養(yǎng)基設(shè)置中,以盡量降低單項(xiàng)激素濃度為原則進(jìn)行設(shè)置,篩選最佳增殖培養(yǎng)基。接種后30d統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表2。

從表2可看出,在不含任何激素的增殖培養(yǎng)基中黃花補(bǔ)血草表現(xiàn)出良好的生長狀態(tài),但增殖系數(shù)太低;激素總含量較大時(shí),增生的叢生芽較多、較密,且長勢表現(xiàn)不好;在激素總含量較低的培養(yǎng)基中,叢生芽生長表現(xiàn)良好,且增殖系數(shù)較高。因此,在黃花補(bǔ)血草的增殖培養(yǎng)中,選擇MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.10mg/L比較經(jīng)濟(jì)、快速、保質(zhì)保量。

2.3不同的激素濃度及配比對(duì)生根培養(yǎng)的影響

在黃花補(bǔ)血草增殖培養(yǎng)不含激素的培養(yǎng)基中,個(gè)別植株有根系生長現(xiàn)象,說明黃花補(bǔ)血草生根,在沒有外源生長素存在的情況下也能生根,但生根率很低。因此,在黃花補(bǔ)血草的生根培養(yǎng)中采用了常規(guī)的1/2 MS附加一定濃度的NAA或IBA進(jìn)行生根培養(yǎng),并篩選最佳生根培養(yǎng)基。25d觀察結(jié)果見表3。

從表3可看出,生長素IBA和NAA對(duì)黃花補(bǔ)血草的生根均有影響。就生根率進(jìn)行比較,在濃度相同的情況下,含有NAA的培養(yǎng)基比含有IBA的培養(yǎng)基生根率高,且根系健壯。通過生根培養(yǎng)發(fā)現(xiàn),黃花補(bǔ)血草生根較慢,生根時(shí)間不一致。從試驗(yàn)結(jié)果可看出,NAA在0.5mg/L與1.0mg/L的濃度下生根率及根系長勢無明顯的區(qū)別,故在黃花補(bǔ)血草的生根培養(yǎng)中選擇1/2 MS+NAA 0.5mg/L為生根培養(yǎng)基。

2.4不同煉苗基質(zhì)對(duì)生根苗煉苗移栽的影響

黃花補(bǔ)血草生根時(shí)間不一致,給煉苗移栽帶來了一定的難度。在煉苗試驗(yàn)時(shí),選擇平均根長達(dá)5cm左右的瓶苗,在溫室閉瓶煉苗3d,開瓶煉苗2d后,將根部培養(yǎng)基沖洗干凈,用1 000IU農(nóng)用鏈霉素和多菌靈浸根后栽入經(jīng)消毒處理過的不同基質(zhì)設(shè)置中。栽植后土壤濕度不宜過大,保持空氣濕度不低于80%,種植后前7d用50%遮蔭網(wǎng)進(jìn)行遮蓋,20d后調(diào)查其成活率,以植株直立、萌發(fā)新葉為幼苗成活的標(biāo)準(zhǔn)(見表4)。

由表4可知,黃花補(bǔ)血草組培瓶苗經(jīng)過常規(guī)馴化后移栽,國產(chǎn)泥炭生長情況比黑土和園土好,但成活率依然小于50%。要最終達(dá)到快速繁殖進(jìn)行大批量開發(fā)應(yīng)用的目的,還有許多問題有待于進(jìn)一步研究和探討。

3結(jié)論與討論

采用種子無菌播種誘導(dǎo)進(jìn)行快速繁殖黃花補(bǔ)血草,從根本上解決了黃花補(bǔ)血草因結(jié)種量少、采收困難等原因造成的常規(guī)繁殖慢、需求多的難題,在短期內(nèi)可為苗木市場提供大量的優(yōu)質(zhì)種苗。試驗(yàn)研究表明:選用MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L培養(yǎng)基,其外植體誘導(dǎo)率達(dá)28.6%,叢生芽誘導(dǎo)率達(dá)28.6%;選用MS+6-BA0.5mg/L +NAA0.1mg/L培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽增殖培養(yǎng),可得到健壯的黃花補(bǔ)血草無菌叢生芽,增殖系數(shù)達(dá)10;在1/2MS+NAA0.5mg/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)健壯單芽4周內(nèi)生根率達(dá)63%;瓶苗常規(guī)馴化后選用國產(chǎn)泥炭土煉苗,成活率為46%。

4參考文獻(xiàn)

[1] 西寧市植物志編輯委員會(huì).西寧植物志[M].青海:中國藏學(xué)出版社,1999.

[2] 郝玉蘭,徐杰,閆瑞霞.黃花補(bǔ)血草的組織培養(yǎng)及快速繁殖[J].內(nèi)蒙古師范大學(xué)學(xué)報(bào),2006(4):482-483.