• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    水稻白條紋突變體st13的表型分析及基因定位

    2017-07-31 15:52:09孫立亭林添資王云龍牛梅胡婷婷劉世家王益華萬建民
    中國水稻科學 2017年4期
    關(guān)鍵詞:葉色葉綠體突變體

    孫立亭 林添資 王云龍 牛梅 胡婷婷 劉世家 王益華 萬建民, 2,*

    ?

    水稻白條紋突變體的表型分析及基因定位

    孫立亭1, 3林添資1, 3王云龍1牛梅1胡婷婷1劉世家1王益華1萬建民1, 2,*

    (1南京農(nóng)業(yè)大學作物遺傳與種質(zhì)創(chuàng)新國家重點實驗室/農(nóng)業(yè)部長江中下游粳稻生物學與遺傳育種重點實驗室/長江流域雜交水稻協(xié)同創(chuàng)新中心/江蘇省現(xiàn)代作物生產(chǎn)中心,南京 210095;2中國農(nóng)業(yè)科學院作物科學研究所,北京100081;3江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學研究所,江蘇句容 212400;*通訊聯(lián)系人,E-mail: wanjm@njau.edu.cn, wanjianmin@caas.cn)

    【目的】葉色突變相關(guān)基因鑒定和克隆有助于研究光合作用,補充并完善葉綠體發(fā)育機理和色素合成代謝途徑,為開展水稻的高光效育種提供理論依據(jù)?!痉椒ā繌木酒贩NDongjin的組培后代中分離出一個白條紋突變體,成熟期測定野生型和的主要農(nóng)藝性狀,苗期測定色素含量并觀察葉綠體的超微結(jié)構(gòu);將和Dongjin進行正反交,觀察F1植株表型,并對F2表型分離進行卡方檢驗,對進行遺傳分析;利用×南京11(秈稻品種)的F2和F2:3群體,對突變基因定位;采用qPCR分析葉綠體發(fā)育和葉綠素合成相關(guān)基因在與野生型相對表達量?!窘Y(jié)果】與野生型Dongjin相比,該突變體的株高、單株有效穗數(shù)、穗長、結(jié)實率和千粒重等主要農(nóng)藝性狀顯著下降。苗期的色素含量降低,分蘗期無差異。突變體的葉綠體中既有含豐富的類囊體膜結(jié)構(gòu)的正常葉綠體,也存在無類囊體結(jié)構(gòu)的葉綠體。遺傳分析和基因定位結(jié)果表明,的突變表型受1對隱性核基因控制,突變基因位于第3條染色體長臂InDel(Insertion-Deletion)標記I3-21和I3-22之間。進一步在這兩個標記之間設(shè)計了6對InDel標記,最終將基因定位在94 kb區(qū)間內(nèi),此區(qū)間共有8個候選基因?!窘Y(jié)論】這8個候選基因中,有5個假定的蛋白,其他三個都是有功能注釋的蛋白,而這三個蛋白在水稻中均未見報道,因此,突變是由一個新的葉色基因突變引起的;同時中葉綠體發(fā)育、葉綠素合成和光合系統(tǒng)相關(guān)基因的表達也發(fā)生了顯著改變,推測可能是調(diào)控葉綠體發(fā)育的關(guān)鍵基因。

    水稻;白條紋突變體;葉綠體;精細定位

    水稻葉色突變是指葉片顏色發(fā)生變異,可通過直接觀察表型進行區(qū)分。通常葉色變異發(fā)生在苗期或分蘗期之前,易于鑒別、相對容易獲得。由于大多數(shù)葉色突變表現(xiàn)出光合速率下降、作物減產(chǎn),過去常被認為是無意義的突變。隨著功能基因組學的發(fā)展,眾多研究結(jié)果都顯示葉色突變與植物光合作用[1]、激素生理[2]、光形態(tài)建成[3]等密切相關(guān),因此,克隆和鑒定葉色突變相關(guān)基因有助于研究光合作用,補充和完善葉綠體發(fā)育機理和色素合成代謝途徑,為開展水稻的高光效育種提供理論基礎(chǔ)。

    葉色突變體的發(fā)生機制主要有以下兩類: 一是葉綠素的生物合成及分解代謝途徑受阻。高等植物中葉綠素的生物合成途徑已基本明確[4-6]。葉綠素的合成從谷氨酰-tRNA開始到最終合成葉綠素a和葉綠素b共有15步,分別由15種酶催化,其中任何一步發(fā)生突變,都會導致葉色變異。這15種酶在水稻中克隆報道的有CHLD(鎂離子螯合酶D亞基)、CHLI(鎂離子螯合酶I亞基)[7]、CHLH(鎂離子螯合酶H亞基)[8]、YGL8(鎂離子原卟啉Ⅸ單酯環(huán)化酶)[9]、DVR(脫酯基葉綠素酸酯a乙烯基還原酶)[10]、POR(NADPH-原葉綠素酸酯氧化還原酶)[11]、CHLG (葉綠素合成酶)[12]和CAO(葉綠素a氧化酶)[5,13]。葉綠素的降解過程對葉色的變異也有著重要的影響,NOL和NYC1都編碼短鏈脫氫酶/還原酶,可形成葉綠素b還原酶復合體,行使葉綠素b還原酶的功能,在葉片衰老過程中調(diào)節(jié)葉綠素b和捕光復合體Ⅱ的降解,功能缺失后表現(xiàn)出滯綠表型[14]。二是葉綠體發(fā)育途徑受阻。編碼質(zhì)體RNA聚合酶(PEP)的一個必需的非核心亞基,PEP是成熟葉綠體中一種主要的RNA聚合酶,通過與PEP復合體亞基互作調(diào)控葉綠體發(fā)育;編碼Val-tRNA合成酶,調(diào)控葉綠體中核糖體的合成。和在早期葉綠體的發(fā)育中發(fā)揮重要的作用[15-16]。葉綠體的發(fā)育受核基因、葉綠體基因、光照和器官特異性的共同調(diào)節(jié)[17-18],例如編碼光系統(tǒng)Ⅱ和Ⅰ蛋白復合物的和基因家族、、,影響葉綠體內(nèi)光系統(tǒng)的形成[19-20];編碼轉(zhuǎn)運RNA 聚合酶的族的、和。此類基因缺失后,植株色素合成量降低[21];編碼NADH脫氫酶的基因家族中的和,參與光合作用的等,這些基因調(diào)控葉綠體內(nèi)的能量代謝[22-23]。目前已分離和鑒定的葉色突變體超過180個,其中成功克隆的達80多個,但水稻葉色變化過程和調(diào)控機制并未闡明,因此需要挖掘、鑒定新的葉色突變相關(guān)基因。本研究對白條紋突變體進行了主要農(nóng)藝性狀、色素含量和葉綠體超微結(jié)構(gòu)等表型分析,同時利用×南京11(秈稻品種)的F2和F2:3群體進行定位,將基因定位在第3條染色體長臂87.4 cM和91.1 cM之間,兩者相距3.7 cM。進一步設(shè)計InDel標記,最終將基因定位在94 kb區(qū)間內(nèi),共有8個候選基因,為基因的克隆和功能研究及育種應用奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料與田間試驗

    是從粳稻品種Dongjin的組培后代中分離出的一個白條紋突變體。野生型和突變體正季種植于南京農(nóng)業(yè)大學牌樓實驗基地,在苗期和分蘗期進行表型觀察和色素含量測定。成熟期調(diào)查突變體和野生型的株高、單株有效穗數(shù)、劍葉長、穗長、結(jié)實率和千粒重等主要農(nóng)藝性狀。每個樣品重復5次。

    1.2 色素含量測定

    取苗期(3葉期)完全展開葉,參照Wu等[12]測定葉片單位鮮質(zhì)量的葉綠素a(Chl a)、葉綠素b(Chl b)和類胡蘿卜素(Car)的含量。

    1.3 葉綠體超微結(jié)構(gòu)觀察

    取3葉期的野生型和突變體相同部位葉片,去掉中間葉脈,固定于2.5%的戊二醛溶液中(2.5%的戊二醛用0.1 mol/L磷酸緩沖液配制,pH 7.2),4 h后沖洗,再在1%鋨酸中固定4 h,之后用乙醇(30%、50%、70%、80%、90%、100%)梯度脫水,最后用環(huán)氧樹脂SPURR包埋、聚合、修塊,經(jīng)醋酸鈾染色后在日立JEM-1230透射電子顯微鏡下觀察、拍照。

    1.4 水稻總RNA的提取及實時熒光定量PCR

    選取3葉期野生型和突變體相同部位葉片提取總RNA。RNA的提取采用天根公司的植物RNA小量提取試劑盒,提取步驟詳見說明書。反轉(zhuǎn)錄步驟參照TaKaRa公司的說明書,基因為內(nèi)參。實時PCR 20 μL反應體系如下: 反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物2 μL,10 μmol/L的正、反向引物各0.4 μL,SYBRGreen混合物(TaKaRa)10 μL,最后補水至20 μL。反應在7500實時PCR儀(Applied Biosystems)上進行,反應程序參照操作手冊,按2–ΔΔCt方法分析基因的相對表達量[24],每個樣本重復3次。

    A-3葉期幼苗;B-A圖中的第2片真葉;C-分蘗期植株。

    Fig. 1. Phenotype of the wild-type and mutantat the seedling and tillering stages.

    1.5 遺傳分析及定位群體構(gòu)建

    用突變體和野生型Dongjin進行正反交,同年冬季在海南陵水加代獲得F2,第二年正季在南京農(nóng)業(yè)大學牌樓實驗基地種植,苗期統(tǒng)計F2群體中正常表型和白條紋表型單株數(shù),計算分離比,并進行χ2測驗。

    用與南京11雜交,獲得Fl種子,自交獲得F2種子,將F2種子種植于南京農(nóng)業(yè)大學牌樓基地,苗期鑒定植株白條紋分離比例,并選取白條紋表型的單株進行基因初定位。同時部分F2種子在海南陵水基地繁種。正季播種 F2:3群體種子,苗期分株系選取白條紋植株,進行基因的精細定位。

    1.6 基因定位

    基因組DNA提取采用SDS法[25],用實驗室均勻分布于水稻12條染色體上的InDel標記(Insertion-Deletion)(由南京金斯瑞生物科技有限公司合成)對和南京11進行多態(tài)性分析,采用篩得的有多態(tài)的引物對/南京11的F2中235份白條紋單株和F2:3中2000個白條紋單株進行連鎖分析和基因定位。PCR擴增體系參照Shi等[26],擴增產(chǎn)物用8%聚丙烯酰胺凝膠電泳進行檢測,銀染顯色。將具有的帶型記作“1”,具有南京11的帶型記作“2”,雜合帶型記作“3”,計算遺傳距離,構(gòu)建分子標記連鎖圖譜。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 突變體的表型分析

    是從粳稻品種Dongjin的組培后代中分離出的一個白條紋突變體(圖1)。與野生型相比,突變體在3葉期表現(xiàn)出白條紋癥狀(圖1-A、B),分蘗期轉(zhuǎn)綠,但株高比野生型降低(圖1-C)。主要農(nóng)藝性狀調(diào)查結(jié)果表明,突變體的株高、穗長、有效穗、結(jié)實率和千粒重與Dongjin相比均顯著下降(表1),這表明該基因?qū)χ仓晟L發(fā)育十分重要。

    2.2 野生型Dongjin和突變體的色素含量測定

    為了確定突變體的白條紋表型是否由色素含量變化引起,我們分別測定了Dongjin和在苗期和分蘗期的色素含量。結(jié)果表明,苗期突變體的葉綠素a、葉綠素b和類胡蘿卜素的含量均比野生型Dongjin顯著降低(圖2-A);當幼苗生長至分蘗期時,的葉片轉(zhuǎn)綠(圖1-C),此時其葉綠素a、葉綠素b和類胡蘿卜素含量與野生型無顯著差異(圖2-B)。這表明的突變癥狀是由色素含量變化引起的。

    表1 野生型Dongjin與突變體st13的主要農(nóng)藝性狀比較

    **表示經(jīng)測驗后,野生型與突變體在0.01水平下差異顯著。

    **Difference between the wild type and themutant was significant at 0.01 level by Student’s-test.

    平均值±標準差, n=3。**P<0.01,*P<0.05 (t測驗)。

    Fig. 2. Pigment contents of Dongjin andat the seedling and tillering stages.

    A, D-野生型的葉綠體超微結(jié)構(gòu); B, C, E, F-突變體st13中同時含有具正常結(jié)構(gòu)的葉綠體(B, E)和具不正常結(jié)構(gòu)的葉綠體(C, F)。 A, B, C圖標尺為10 μm,D, E圖標尺為1 μm,F(xiàn)圖標尺為1 μm。Cp-葉綠體; Thy-類囊體; OB-嗜鋨體。

    Fig. 3. Transmission electron microscopy (TEM) analysis of Dongjin andleaves at the seedling stage.

    2.3 葉綠體的超微結(jié)構(gòu)觀察

    為進一步探究葉片白條紋形成的原因,我們利用透射電鏡觀察了Dongjin和苗期葉綠體的超微結(jié)構(gòu),突變體中,少數(shù)細胞中的葉綠體與野生型無顯著差異(圖3-A、B),但大部分葉肉細胞觀察不到葉綠體(圖3-C),表現(xiàn)出空泡狀結(jié)構(gòu),而突變體的葉綠體結(jié)構(gòu)也觀察到兩種類型(圖3-E、F),一種含有豐富的類囊體片層結(jié)構(gòu),與野生型相比無明顯差異(圖3-D、E),另一種葉綠體細胞中無類囊體片層結(jié)構(gòu)(圖3-F); 這一結(jié)果與白條紋突變性狀(白綠相間)一致。

    平均值±標準差, n=3。**P<0.01(t測驗)。

    Fig. 4. Quantitative RT-PCR analyses of genes associated with chloroplast development and photosynthetic system in wild-type Dongjin andmutant at the seedling stage.

    平均值±標準差, n=3。**P<0.01(t測驗)。

    Fig. 5. Quantitative RT-PCR analyses of genes associated with chlorophyll biogenesis in wild-type Dongjin andmutant at the seedling stage.

    2.4 突變體中葉綠體發(fā)育及光合系統(tǒng)相關(guān)基因的表達分析

    葉綠體是植物進行光合作用的場所,為明確的白條紋癥狀是否影響葉綠體發(fā)育及光合系統(tǒng)相關(guān)基因的表達,我們進行了qRT-PCR分析(圖4)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)突變體中,編碼轉(zhuǎn)運RNA聚合酶的族基因和的表達顯著上調(diào);編碼1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶的基因表達下調(diào);同時編碼NADH脫氫酶的基因家族和均顯著下調(diào),而編碼光系統(tǒng)Ⅱ和Ⅰ蛋白復合物的、和表達量下調(diào)。這表明白條紋這一突變性狀影響了葉綠體發(fā)育,同時抑制了光合系統(tǒng)相關(guān)基因的表達,這與透射電鏡觀察結(jié)果一致。

    表2 野生型Dongjin與st13突變體正反交組合的F2分離比

    2.5 突變體中葉綠素合成相關(guān)基因的表達分析

    為探究葉綠體發(fā)育缺陷是否影響葉綠素合成,我們分析了葉綠素合成相關(guān)基因的表達(圖5)。與野生型相比,葉綠素合成途徑中的(編碼谷氨酸-tRNA還原酶)、(編碼谷氨酸-1-半縮醛氨基轉(zhuǎn)移酶)、(編碼原脫氨酶)、(編碼尿卟啉原Ⅲ脫羧酶)、(編碼糞卟啉Ⅲ氧化酶)、(編碼螯合酶I亞基)、(編碼鎂離子原卟啉Ⅸ甲基轉(zhuǎn)移酶)、(NADPH-原葉綠素酸酯氧化還原酶)、(編碼葉綠素合成酶)和(編碼葉綠素a氧化酶)表達量均顯著上調(diào)。這表明突變體的葉綠素合成受到影響。

    A-基因位點初定位到第3條染色體長臂的InDel標記I3-21和I3-22之間;B-基因位點精細定位到標記P3-14和S-24之間;C-定位區(qū)間位于BAC克隆OJ1519_A12、OSJNBa0004G03和OSJNBa0091E13之間94 kb的物理區(qū)間。

    Fig. 6. Fine mapping of.

    2.6 遺傳分析

    為了確定突變性狀的遺傳特性,我們配制了野生型和突變體的正反交雜交組合,無論突變體用作母本還是父本,相應的F1植株葉片顏色均表現(xiàn)為正常綠色,其自交后代F2群體表型出現(xiàn)明顯分離,且正常綠色與突變體植株數(shù)比值符合3∶1(表2)。這說明該性狀是由一對隱性核基因控制的。

    表3 目標區(qū)域內(nèi)有多態(tài)的InDel標記

    表4 94 kb區(qū)間內(nèi)的預測基因及其可能的功能

    2.7 突變性狀的基因定位及候選基因

    將突變體與秈稻品種南京11進行雜交,挑取其F2群體分離出的白條紋單株235株及F2:3群體分離的白條紋單株2000株作為定位群體,利用本實驗室均勻分布在12條染色體上的InDel標記將基因初定位在第3染色體長臂的I3-21標記(87.4 cM)與I3-22標記(91.1 cM)之間(圖6-A)。為進行精細定位,利用Primer premier 5.0軟件,開發(fā)出兩親本之間有多態(tài)的引物6對(表3),最終將基因定位在標記P3-14與標記S-24之間,位于BAC OSJNBa0004G03和OSJNBa0091E13上,兩者相距94 kb(圖6-B、C)。利用水稻表達譜數(shù)據(jù)庫(http:// ricexpro.dna.affrc.go.jp/index.html)預測此區(qū)間內(nèi)含有8個開放閱讀框(ORF),其功能預測見表4。

    3 討論

    葉綠體的發(fā)育是在細胞核和細胞質(zhì)基因的協(xié)同調(diào)控下完成的,這個過程分為3個步驟: 第一步是葉原基分化為分生組織,激活質(zhì)體復制和質(zhì)體DNA的合成;第二步是葉綠體遺傳系統(tǒng)建立,分生細胞增大,葉綠體翻譯和轉(zhuǎn)錄活性大大增加;第三步是葉綠體分化形成,開始轉(zhuǎn)錄光合作用元件[27]。光反應相關(guān)蛋白對葉綠體的結(jié)構(gòu)和功能的完整起著重要的作用,和編碼PSⅠ合成相關(guān)亞基,編碼PSⅡ核心復合物[28-29],突變體中,這三個基因的表達下調(diào)。光系統(tǒng)復合物形成過程中,類囊體也在形成,突變體的葉綠體細胞中存在大量無類囊體的空泡狀結(jié)構(gòu),類囊體膜無法正常形成,葉綠體的分化階段受到影響,葉綠體發(fā)育不良。編碼轉(zhuǎn)運RNA聚合酶的族基因功能缺失后,植株色素含量減少,質(zhì)體內(nèi)膜系統(tǒng)發(fā)育不完整[21],而突變體中,表達量與野生型比無顯著差異,和表達量上升,可能tRNA編碼產(chǎn)物大量積累,導致tRNA聚合酶消耗量減少,其編碼基因表達上調(diào)。突變體中,,和均顯著下調(diào),從而導致葉綠體內(nèi)能量代謝失衡。突變體的葉綠體發(fā)育受損,導致色素含量降低。突變體中編碼Mg-原卟啉Ⅸ螯合酶的Ⅰ亞基的基因發(fā)生突變,導致出現(xiàn)淺黃綠葉的表型[7],在突變體中,此基因表達上調(diào),同時突變體中編碼葉綠素a加氧酶的基因[13]在突變體中表達上調(diào),其他葉綠素生物合成途徑中的基因、、、、、、和表達上調(diào),推測可能是調(diào)控葉綠體發(fā)育的關(guān)鍵基因。

    水稻中已克隆14個白條紋或白化基因,有的表現(xiàn)出白化致死,如[30]、[31]、[32]、[16]、[33],有的屬于溫度依賴型,如[6]、、[34]、[35]、[15]等,有的表現(xiàn)出白化轉(zhuǎn)綠,如[36]等。本研究中,突變體在苗期表現(xiàn)為葉片白條紋,分蘗期轉(zhuǎn)綠,與以往報道的水稻白化轉(zhuǎn)綠突變體相比具有相似的表型,但該突變體主要農(nóng)藝性狀如株高、單株有效穗數(shù)、穗長、千粒重和結(jié)實率都顯著降低,說明基因具有一因多效。通過對×南京11(秈稻品種)的F2和F2:3群體進行定位,最終將基因定位在第3條染色體長臂94 kb區(qū)間內(nèi),此區(qū)間內(nèi)預測到8個候選基因,突變體可能是由一個新的葉色基因突變引起的。在該區(qū)間內(nèi),有5個假定的蛋白,其他三個都是有功能注釋的蛋白。Os03g0604200編碼尿苷二磷酸葡萄糖脫氫酶,在擬南芥中,此酶催化細胞壁中UDP-葡萄糖不可逆的氧化為UDP-葡萄醛酸[37],在水稻中此基因未見報道。Os03g0603700基因編碼A22A肽酶,在植物中報道較少。Os03g0603600編碼甘油磷酸二酯酶,在哺乳動物中涉及信號轉(zhuǎn)導、神經(jīng)分化及發(fā)育和細胞骨架調(diào)控等[38],植物中未見報道。因此,需要進一步研究開展測序、表達分析及轉(zhuǎn)基因互補等研究以確定的候選基因,為闡明基因的功能奠定基礎(chǔ)。

    [1] Fambrini M, Castagna A, Dalla V F, Degl’Innocenti E, Ranieri A, Vernieri P, Pardossi A, Guidi L, Rascio N, Pugliesi C. Characterization of a pigment-deficient mutant of sunflower (L.) with abnormal chloroplast biogenesis, reduced PSII activity and low endogenous level of abscisic acid., 2004, 6: 645-650.

    [2] Agrawal G K, Yamazaki M, Kobayashi M, Hirochika R, Miyao A, Hirochika H. Screening of the rice viviparous mutants generated by endogenous retrotransposoninsertion: Tagging of a zeaxanthin epoxidase gene and a novel ostatc gene., 2001, 125(3): 1248-1257.

    [3] Parks B M, Quail P H. Phytochrome-deficientandlong hypocotyl mutants ofare defective in phytochrome chromophore biosynthesis., 1991, 3(11): 1177-1186.

    [4] Kusumi K, Sakata C, Nakamura T,Kawasaki S, Yoshimura A, Iba K. A plastid protein NUS1 is essential for build-up of the genetic system for early chloroplast development under cold stress conditions., 2011, 68(6): 1039-1050.

    [5] Lee S, Kim J H, Yoo E S,Lee C H, Hirochika H, An G. Differential regulation of chlorophyll a oxygenase genes in rice., 2005 57: 805-818.

    [6] Sugimoto H, Kusumi K, Noguchi K, Yano M, Yoshimura A, Iba K. The rice nuclear gene,, is essential for chloroplast development and encodes a novel type of guanylate kinase targeted to plastids and mitochondria., 2007, 52: 512-527.

    [7] Zhang H, Li J, Yoo J, Yoo S, Cho S, Koh H, Seo H S, Paek N. Riceandencode ChlD and ChlI subunits of Mg-chelatase, a key enzyme for chlorophyll synthesis and chloroplast development., 2006, 62: 325-337.

    [8] Jung K H, Hur J, Ryu C H, Choi Y, Chung Y Y, Miyao A, Hirochika H, An G. Characterization of a rice chlorophyll- deficient mutant using the T-DNA gene-trap system., 2003, 44: 463-472.

    [9] Kong W, Yu X, Chen H, Liu L, Xiao Y, Wang Y, Wang C, Lin Y, Yu Y, Wang C, Jiang L, Zhai H, Zhao Z, Wan J. The catalytic subunit of magnesium-protoporphyrin IX monomethyl ester cyclase forms a chloroplast complex to regulate chlorophyll biosynthesis in rice., 2016, 92(1-2): 177-191.

    [10] Wang P, Gao J, Wan C, Zhang F, Xu Z, Huang X, Sun X, Deng X. Divinyl chlorophyll (ide) a can be converted to monovinyl chlorophyll (ide) a by a divinyl reductase in rice.2010, 153: 994-1003.

    [11] Sakuraba Y, Rahman M L, Cho S H, Kim Y S, Koh H J, Yoo S C, Paek N C. The rice faded green leaf locus encodes protochlorophyllide oxidoreductase B and is essential for chlorophyll synthesis under high light conditions., 2013, 74: 122-133.

    [12] Wu Z M, Zhang X, He B, Diao L, Sheng S, Wang J, Guo X, Su N, Wang L, Jiang L, Wang C, Zhai H, Wan J. A chlorophyll-deficient rice mutant with impaired chlorophyllide esterification in chlorophyll biosynthesis., 2007, 145: 29-40.

    [13] Yang Y, Xu J, Huang L, Leng Y, Dai L, Rao Y, Chen L, Wang Y, Tu Z, Hu J, Ren D, Zhang G, Zhu L, Guo L, Qian Q, Zeng D., encoding chlorophyllide a oxygenase 1, impacts leaf senescence and indirectly affects grain yield and quality in rice., 2016, 67(5): 1297-1310.

    [14] Sato Y, Morita R, Katsuma S, Nishimura M, Tanaka A, Kusaba M. Two short-chain dehydrogenase/reductases, NON-YELLOW COLORING 1 and NYC1-LIKE, are required for chlorophyll b and light-harvesting complex II degradation during senescence in rice., 2009, 57: 120-131.

    [15] Wang L, Wang C, Wang Y, Niu M, Ren Y, Zhou K, Zhang H, Lin Q, Wu F, Cheng Z, Wang J, Zhang X, Guo X, Jiang L, Lei C, Wang J, Zhu S, Zhao Z, Wan J. WSL3, a component of the plastid-encoded plastid RNA polymerase, is essential for early chloroplast development in rice., 2016, 92(4-5): 581-595.

    [16] Wang Y, Wang C , Zheng M, Lyu J, Xu Y, Li X, Niu M, Long W, Wang D, Wang H Y, William T, Wang Y, Wan J. WHITE PANICLE1, a Val-tRNA synthetase regulating chloroplast ribosome biogenesis in rice, is essential for early chloroplast development., 2016, 170(4): 2110-2123.

    [17] Lopez-Juez E. Plastid biogenesis between light and shadows., 2007, 58: 11-26.

    [18] Sakamoto W, Miyagishima S Y, Jarvis P. Chloroplast biogenesis: Control of plastid development, protein import, division and inheritance., 2008, 6: e110.

    [19] Webber A N, Malkin R. Photosystem I reaction-centre proteins contain leucine zipper motifs. A proposed role in dimer formation., 1990, 264: 1-4.

    [20] Rutherford A W, Faller P. Photosystem II: evolutionary perspectives.. 2003, 358:245-253.

    [21] Santis-Maciossek G D, Kofer W, Bock A, Schoch S, Maier R M, Wanner G, Rüdiger W, Koop Hans-Ulrich, Herrmann R G. Targeted disruption of the plastid RNA polymerase genes,and: molecular biology biochemistry and ultrastructure., 1999,18: 477-489.

    [22] Peng L W, Yamamoto H, Shikanai T. Structure and biogenesis of the chloroplast NAD(P)H dehydrogenase complex., 2011, 1807: 945-953.

    [23] Andersson I, Backlund A. Structure and function of Rubisco., 2008, 46: 275-291.

    [24] Livak K J, Schmittgen T D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2 [Delta Delta C(T)] method., 2001, 25: 402-408.

    [25] McCouch S R, Kochert G, Yu Z H, Wang Z Y, Khush G S, Coffman W R, Tanksley S D. Molecular mapping of rice chromosome., 1998, 76: 815-829.

    [26] Shi Y F, Chen J, Liu W Q, Huang Q N, Shen B, Leung H, Wu J L. Genetic analysis and gene mapping of a new rolled-leaf mutant in rice (L.).:, 2009, 52: 885-890.

    [27] Kusumi K, Chono Y, Shimada H, Shimada H, Gotoh E, Tsuyama M, Iba K. Chloroplast biogenesis during the early stage of leaf development in rice., 2010, 27: 85-90.

    [28] Allen J F, Wilson B M, Puthiyaveetil S, Nield J. A structural phylogenetic map for chloroplast photosynthesis., 2011, 16: 645-655.

    [29] Pakrasi H B. Genetic analysis of the form, function of photosystem I and photosystem II., 1995, 29: 755-776.

    [30] 王興春, 王敏, 季芝娟, 陳釗, 劉文真, 韓淵懷, 楊長登. 水稻糖苷水解酶基因在葉綠體發(fā)育中的功能. 作物學報, 2014, 40(12): 2090-2097.

    Wang X C, Wang M, Ji Z J, Chen Z, Liu W Z, Han Y H, Yang C D. Functional characterization of the glycoside hydrolase encoding geneduring chloroplast development in., 2014, 40(12): 2090-2097.(in Chinese with English abstract)

    [31] Gothandam K M, Kim E S, Cho H, Chung Y Y. OsPPR1, a pentatricopeptide repeat protein of rice is essential for the chloroplast biogenesis., 2005, 58(3): 421-433.

    [32] Lin D, Jiang Q, Zheng K, Chen S, Zhou H, Gong X, Xu J, Teng S, Dong Y. Mutation of the ricegene encoding plastid ribosomal protein L21 causes chloroplast developmental defects and seedling death., 2015, 17(3): 599-607.

    [33] Zhang Z, Tan J, Shi Z, Xie Q, Xing Y, Liu C, Chen Q, Zhu H, Wang J, Zhang J, Zhang G. Albino Leaf1 that encodes the sole octotricopeptide repeat protein is responsible for chloroplast development., 2016, 171(2): 1182-1191.

    [34] Yoo S C, Cho S H, Sugimoto H, Li J, Kusumi K, Koh H J, Iba K, Paek N C. Rice virescent3 and stripe1 encoding the large and small subunits of ribonucleotide reductase are required for chloroplast biogenesis during early leaf development., 2009, 150(1): 388-401.

    [35] Wang Y, Zhang J, Shi X, Peng Y, Li P, Lin D, Dong Y, Teng S. Temperature-sensitive albino gene, encoding a monooxygenase, affects chloroplast development at low temperatures., 2016, 67(17): 5187-5202.

    [36] Su N, Hu M L, Wu D X, Wu F Q, Fei G L, Lan Y, Chen X L, Shu X L, Zhang X, Guo X P, Cheng Z J, Lei C L, Qi C K, Jiang L, Wang H, Wan J M. Disruption of a rice pentatricopeptide repeat protein causes a seedling- specific albino phenotype and its utilization to enhance seed purity in hybrid rice production., 2012, 159(1): 227-238.

    [37] Klinghammer M, Tenhaken R. Genome-wide analysis of the UDP-glucose dehydrogenase gene family in, a key enzyme for matrix polysaccharides in cell walls., 2007, 58(13): 3609-3621.

    [38] 孫蘭茜, 常平安, 曾鑫, 韓麗萍, 冉鳳, 王超穎, 王玲, 黃飛飛. 甘油磷酸二酯酶家族蛋白的分子進化. 基因組學與應用生物學, 2015, 34(27): 172-178.

    Sun L X, Chang P A, Zeng X, Han L P, Ran F, Wang C Y, Wang L, Huang F F. Molecular evolution of the glycerophospho- diesterase family proteins., 2015, 34(27): 172-178. (in Chinese with English abstract)

    Phenotypic Analysis and Gene Mapping of a White Stripe Mutantin Rice

    SUN Liting1,3, LIN Tianzi1,3, WANG Yunlong1, NIU Mei1, HU Tingting1, LIU Shijia1, WANG Yihua1, WAN Jianmin1,2,*

    (1State Key Laboratory of Crop Genetics and Germplasm Enhancement, Nanjing Agricultural University/Key Laboratory of Biology, Genetics and Breeding of japonica Rice in Mid-lower Yangtze River, Ministry of Agriculture/The Yangtze River Valley Hybrid Rice Collaboration Innovation Center/Jiangsu Collaboration Innovation Center for Modern Crop Production, Nanjing 210095, China;2Institute of Crop Science, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China;3Zhenjiang Agricultural Research Institute, Jurong 212400, China;*Corresponding author, E-mail:wanjm@njau.edu.cn, wanjianmin@caas.cn)

    【Objective】Rice leaf color mutation identification and cloning of related genes is helpful to research photosynthesis and further understand the mechanism of chloroplast development and pigment synthesis pathway, providing theoretical basis for the breeding of rice with high photosynthetic efficiency.【Method】A somaclonal mutant (designated as,) was isolated from tissue-cultured progenies of arice variety Dongjin. The main agronomic traits of wild type andwere determined at maturity, and the pigment contents and ultrastructure of chloroplast were observed at the seedling stage. Dongjin andwere reciprocally crossed to observe the phenotype of F1and genetic analysis was carried out. An F2population and F2:3population derived from the cross× Nanjing11 (anrice variety) were used for gene mapping of. Quantitative RT-PCR was carried out to analyze the relative expression of genes associated with chloroplast development and chlorophyll biogenesis in the wild-type Dongjin andmutant. 【Result】Compared to the wild type, the plant height, number of effective panicles, panicle length, seed-setting rate, and 1000-grain weight were all significantly reduced in the mutant. In agreement with leaf color, the pigment content ofmutant was reduced at the seedling stage but rose to almost the same level as the wild type at the tillering stage. With a transmission electron microscopy, defective chloroplasts with no thylakoid were observed in themutant. Genetic analysis indicated the mutant phenotype was controlled by a single recessive nuclear gene.was restricted to an interval between the InDel (insertion/deletion) markers I3-21 and I3-22 on chromosome 3. Six InDel markers were further developed and thegene was narrowed down to a 94-kb region, containing eight putative open reading frames. 【Conclusion】These eight candidate genes encode three putative proteins and five functional proteins respectively, while none of them have been reported in rice. Thus,was an unreported gene in rice. Relative to wild type, the expression levels of genes associated with chloroplast development, chlorophyll biosynthesis, and photosynthetic system were significantly altered in the mutant. So we hypothesized thatmight be the key gene for regulating chloroplast development.

    rice; white stripe mutant; chloroplast; fine mapping

    10.16819/j.1001-7216.2017.6165

    Q343.5; S511.01

    A

    1001-7216(2017)04-0355-09

    2016-12-20;

    國家重點研發(fā)項目七大農(nóng)作物育種專項(2016YFD0100101-08); 國家863計劃資助項目(2014AA10A603-15); 江蘇省科技支撐計劃資助項目(BE2014394, BE2015363); 江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金資助課題[CX(16)1029]。

    修改稿收到日期:2017-02-07。

    猜你喜歡
    葉色葉綠體突變體
    兩種葉色血葉蘭的轉(zhuǎn)錄組分析
    東南園藝(2024年4期)2024-01-01 00:00:00
    夏 荷
    基于Lab模型的4種日本彩葉楓的葉色分析及其色彩應用
    不同葉色紫蘇花青素含量與成分研究
    CLIC1及其點突變體與Sedlin蛋白的共定位研究
    擬南芥干旱敏感突變體篩選及其干旱脅迫響應機制探究
    南方紅豆杉葉綠體非編碼序列PCR體系優(yōu)化及引物篩選
    Survivin D53A突變體對宮頸癌細胞增殖和凋亡的影響
    磷酸三酯酶突變體H23A的真核表達及性質(zhì)表征
    食品科學(2013年23期)2013-03-11 18:30:11
    茶樹葉綠體DNA的PCR-RFLP反應體系優(yōu)化
    食品科學(2013年6期)2013-03-11 18:20:13
    国产不卡av网站在线观看| 99香蕉大伊视频| 大陆偷拍与自拍| 波野结衣二区三区在线| 在线精品无人区一区二区三| 欧美日本中文国产一区发布| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 中文字幕亚洲精品专区| 午夜日韩欧美国产| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产精品一区二区在线不卡| 午夜久久久在线观看| 在线观看三级黄色| 亚洲欧洲日产国产| 性少妇av在线| 欧美bdsm另类| 中文字幕人妻丝袜制服| 黄色一级大片看看| 十八禁高潮呻吟视频| 妹子高潮喷水视频| 嫩草影院入口| 日日爽夜夜爽网站| 男女国产视频网站| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲av男天堂| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 波多野结衣一区麻豆| 国产有黄有色有爽视频| a级片在线免费高清观看视频| 精品一区二区三卡| 新久久久久国产一级毛片| 久久精品久久久久久久性| 日韩 亚洲 欧美在线| 欧美 亚洲 国产 日韩一| av国产久精品久网站免费入址| 免费观看无遮挡的男女| 精品少妇久久久久久888优播| 在线观看三级黄色| 精品人妻偷拍中文字幕| 在线观看一区二区三区激情| 在线精品无人区一区二区三| 大香蕉久久网| 99久久人妻综合| 高清在线视频一区二区三区| 久久久久久免费高清国产稀缺| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 男人爽女人下面视频在线观看| 国产精品久久久久成人av| 美国免费a级毛片| 在现免费观看毛片| 亚洲国产精品成人久久小说| 欧美日韩精品网址| 婷婷色av中文字幕| 亚洲伊人色综图| 韩国精品一区二区三区| 天天影视国产精品| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | av在线老鸭窝| 新久久久久国产一级毛片| www.自偷自拍.com| 少妇精品久久久久久久| 欧美精品高潮呻吟av久久| 波多野结衣av一区二区av| 天天影视国产精品| av视频免费观看在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 1024香蕉在线观看| 九草在线视频观看| 国产免费现黄频在线看| 久久久国产精品麻豆| 国产av精品麻豆| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 成人毛片60女人毛片免费| a级毛片在线看网站| 超色免费av| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲国产av新网站| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产精品人妻久久久影院| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 夫妻午夜视频| 男女国产视频网站| 亚洲,一卡二卡三卡| av卡一久久| 99久国产av精品国产电影| 99久国产av精品国产电影| 久久精品久久久久久久性| 香蕉精品网在线| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 极品少妇高潮喷水抽搐| 日本欧美视频一区| 亚洲视频免费观看视频| 十八禁网站网址无遮挡| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 日日啪夜夜爽| 日本欧美国产在线视频| 久久午夜福利片| 婷婷色综合www| 色婷婷久久久亚洲欧美| 欧美成人午夜精品| 黄色 视频免费看| 自线自在国产av| 激情视频va一区二区三区| 日韩欧美精品免费久久| av电影中文网址| 2021少妇久久久久久久久久久| 成年人午夜在线观看视频| 久久人人爽人人片av| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 日日啪夜夜爽| 精品一品国产午夜福利视频| 免费看不卡的av| 久久久久国产网址| 国产精品av久久久久免费| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产av码专区亚洲av| 国产成人精品久久久久久| 国产极品天堂在线| 免费在线观看黄色视频的| 看非洲黑人一级黄片| 十分钟在线观看高清视频www| 在线观看三级黄色| www.精华液| 看免费av毛片| www.熟女人妻精品国产| 在线观看国产h片| 日本爱情动作片www.在线观看| 午夜日韩欧美国产| 婷婷色综合www| 97精品久久久久久久久久精品| 欧美成人精品欧美一级黄| 老女人水多毛片| 亚洲视频免费观看视频| 亚洲人成77777在线视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 男人操女人黄网站| 色吧在线观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲国产最新在线播放| 日本欧美国产在线视频| 国产成人欧美| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 人妻 亚洲 视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 久久久久久久久久人人人人人人| 午夜福利网站1000一区二区三区| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲国产欧美网| 日韩一区二区三区影片| 男女午夜视频在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲国产日韩一区二区| 一级片免费观看大全| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 成人影院久久| 热re99久久国产66热| 日韩免费高清中文字幕av| 最近的中文字幕免费完整| av线在线观看网站| 精品一区二区三卡| 国产一区二区激情短视频 | 国产极品天堂在线| 桃花免费在线播放| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 最近中文字幕高清免费大全6| 不卡av一区二区三区| 美女视频免费永久观看网站| 美女午夜性视频免费| 亚洲第一青青草原| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 1024视频免费在线观看| 日日撸夜夜添| 黄片播放在线免费| 我要看黄色一级片免费的| 国产精品一二三区在线看| 日本91视频免费播放| 在线精品无人区一区二区三| 国产男女超爽视频在线观看| 久久久亚洲精品成人影院| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲成人手机| a 毛片基地| 国产在线一区二区三区精| 午夜福利一区二区在线看| av有码第一页| 一级片免费观看大全| 国产一区二区在线观看av| 久久午夜综合久久蜜桃| 日日摸夜夜添夜夜爱| a级毛片黄视频| 国产精品久久久久久久久免| 国产淫语在线视频| 亚洲视频免费观看视频| 国产免费现黄频在线看| 最新的欧美精品一区二区| 日韩大片免费观看网站| 成人漫画全彩无遮挡| 色婷婷久久久亚洲欧美| 午夜精品国产一区二区电影| 久久久精品免费免费高清| 在线精品无人区一区二区三| 女性生殖器流出的白浆| 日韩av不卡免费在线播放| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 一级片免费观看大全| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲av.av天堂| 欧美国产精品一级二级三级| 性色avwww在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 午夜免费观看性视频| 国产av精品麻豆| 中文字幕人妻熟女乱码| 国产男女内射视频| 一区二区三区四区激情视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲国产看品久久| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 精品一区二区免费观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 嫩草影院入口| 成人二区视频| 日韩视频在线欧美| 九草在线视频观看| 麻豆av在线久日| 各种免费的搞黄视频| 久久97久久精品| 韩国av在线不卡| 午夜福利乱码中文字幕| 国产高清不卡午夜福利| 日韩中字成人| 黑人欧美特级aaaaaa片| 人妻少妇偷人精品九色| av在线老鸭窝| 女性生殖器流出的白浆| 免费高清在线观看视频在线观看| 777米奇影视久久| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 香蕉精品网在线| 久久久欧美国产精品| 日本-黄色视频高清免费观看| 性少妇av在线| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 麻豆乱淫一区二区| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲成人av在线免费| 免费在线观看黄色视频的| 天美传媒精品一区二区| 国产乱来视频区| 一区二区日韩欧美中文字幕| 最近中文字幕2019免费版| 看非洲黑人一级黄片| 一边亲一边摸免费视频| av卡一久久| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲视频免费观看视频| 制服丝袜香蕉在线| 大片电影免费在线观看免费| 丝袜美足系列| 国产精品久久久久久精品古装| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 香蕉丝袜av| 日本wwww免费看| 精品第一国产精品| 在线免费观看不下载黄p国产| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 香蕉丝袜av| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 高清欧美精品videossex| 香蕉精品网在线| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 天堂8中文在线网| 久久久久精品性色| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲av电影在线进入| 五月伊人婷婷丁香| 久久热在线av| 少妇熟女欧美另类| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 中文字幕人妻丝袜制服| 日韩制服骚丝袜av| 午夜91福利影院| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产高清不卡午夜福利| 婷婷色综合大香蕉| 成人漫画全彩无遮挡| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲国产看品久久| 男女啪啪激烈高潮av片| 欧美精品国产亚洲| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 色网站视频免费| 精品国产一区二区久久| 久久97久久精品| 国产一级毛片在线| 国产精品二区激情视频| 久久精品亚洲av国产电影网| 青春草亚洲视频在线观看| 少妇熟女欧美另类| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲美女黄色视频免费看| 观看美女的网站| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 日韩不卡一区二区三区视频在线| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产免费现黄频在线看| 99热网站在线观看| 中文字幕精品免费在线观看视频| 国产精品久久久av美女十八| 成人毛片a级毛片在线播放| 午夜久久久在线观看| 97人妻天天添夜夜摸| h视频一区二区三区| 日韩一本色道免费dvd| 久久久久久久精品精品| www.自偷自拍.com| 波野结衣二区三区在线| 色婷婷av一区二区三区视频| 午夜91福利影院| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 日韩一本色道免费dvd| 色哟哟·www| 亚洲欧美一区二区三区国产| 宅男免费午夜| 亚洲天堂av无毛| 啦啦啦在线免费观看视频4| 欧美av亚洲av综合av国产av | 成人毛片60女人毛片免费| 中文字幕最新亚洲高清| 国产精品久久久久久久久免| 伦精品一区二区三区| 中文字幕人妻熟女乱码| 一二三四中文在线观看免费高清| 欧美成人精品欧美一级黄| 叶爱在线成人免费视频播放| 男女国产视频网站| 国产爽快片一区二区三区| 国产成人精品在线电影| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 中文字幕精品免费在线观看视频| 久久久精品免费免费高清| 大香蕉久久成人网| 校园人妻丝袜中文字幕| 韩国精品一区二区三区| 免费高清在线观看日韩| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | tube8黄色片| 熟女电影av网| 夫妻午夜视频| 国产精品久久久久久久久免| 大香蕉久久网| 十分钟在线观看高清视频www| 在现免费观看毛片| 尾随美女入室| 看非洲黑人一级黄片| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 秋霞伦理黄片| 免费人妻精品一区二区三区视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 久久狼人影院| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 黄色怎么调成土黄色| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 永久网站在线| 伦理电影免费视频| 999精品在线视频| 最近中文字幕2019免费版| 午夜久久久在线观看| 性色av一级| 在线天堂最新版资源| 一级毛片电影观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲人成77777在线视频| 欧美精品国产亚洲| 性色av一级| 90打野战视频偷拍视频| av网站在线播放免费| 国产乱来视频区| 成人免费观看视频高清| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 一区二区三区激情视频| 国产男女超爽视频在线观看| 丰满乱子伦码专区| 如何舔出高潮| 久久人妻熟女aⅴ| 丰满乱子伦码专区| 亚洲国产成人一精品久久久| videosex国产| 少妇人妻久久综合中文| 亚洲欧美一区二区三区国产| 女人久久www免费人成看片| 欧美少妇被猛烈插入视频| 香蕉精品网在线| 波野结衣二区三区在线| 国产男人的电影天堂91| 久久人人爽人人片av| 女性生殖器流出的白浆| 有码 亚洲区| 九九爱精品视频在线观看| 电影成人av| 色播在线永久视频| 两个人免费观看高清视频| 五月伊人婷婷丁香| www日本在线高清视频| 在线精品无人区一区二区三| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 久久韩国三级中文字幕| 高清欧美精品videossex| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 热re99久久国产66热| 国产精品嫩草影院av在线观看| 午夜激情av网站| 丝袜在线中文字幕| 亚洲国产成人一精品久久久| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 精品国产乱码久久久久久小说| 在现免费观看毛片| 久久久久国产网址| 欧美中文综合在线视频| 国产深夜福利视频在线观看| 婷婷色麻豆天堂久久| 大片免费播放器 马上看| 另类亚洲欧美激情| 性少妇av在线| 性色av一级| 国产福利在线免费观看视频| 久久99热这里只频精品6学生| 日本91视频免费播放| 国产一区二区三区av在线| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲精品一二三| 日韩大片免费观看网站| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产av码专区亚洲av| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 久久久久久久亚洲中文字幕| 欧美日韩精品成人综合77777| 春色校园在线视频观看| 91精品三级在线观看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 天堂俺去俺来也www色官网| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产人伦9x9x在线观看 | 成人黄色视频免费在线看| 久久久久网色| 黄色配什么色好看| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 婷婷色麻豆天堂久久| 春色校园在线视频观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 大片电影免费在线观看免费| 三上悠亚av全集在线观看| 母亲3免费完整高清在线观看 | 黄色 视频免费看| 精品福利永久在线观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 又大又黄又爽视频免费| 99香蕉大伊视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲色图综合在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 自线自在国产av| 日本色播在线视频| 免费黄色在线免费观看| 在线看a的网站| 9191精品国产免费久久| 久久久国产精品麻豆| 久久久久久久久免费视频了| 国产免费又黄又爽又色| 日韩制服骚丝袜av| 熟妇人妻不卡中文字幕| 两性夫妻黄色片| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲一码二码三码区别大吗| 99久久综合免费| 久久久久精品人妻al黑| 亚洲情色 制服丝袜| 在线观看免费视频网站a站| 美女国产视频在线观看| 亚洲精品国产av蜜桃| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 亚洲国产欧美网| av有码第一页| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲精品一二三| 国产精品欧美亚洲77777| 一级爰片在线观看| 桃花免费在线播放| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产精品久久久久久精品古装| 两性夫妻黄色片| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 超碰97精品在线观看| 久久99蜜桃精品久久| 婷婷色av中文字幕| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲精品国产av成人精品| 久久久久久久久久人人人人人人| 亚洲国产欧美网| 女性生殖器流出的白浆| 99久久综合免费| 老司机影院毛片| 日日爽夜夜爽网站| 看免费成人av毛片| 亚洲精品久久午夜乱码| 熟女av电影| 91久久精品国产一区二区三区| 久久这里有精品视频免费| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产精品久久久av美女十八| 成人国产麻豆网| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产 一区精品| 飞空精品影院首页| 26uuu在线亚洲综合色| 中文字幕亚洲精品专区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产成人精品福利久久| 色视频在线一区二区三区| 亚洲欧美成人精品一区二区| 久久久久人妻精品一区果冻| 久久久欧美国产精品| 制服人妻中文乱码| 少妇的逼水好多| 国产一区二区 视频在线| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产免费又黄又爽又色| 精品午夜福利在线看| 欧美97在线视频| 欧美精品国产亚洲| 亚洲第一av免费看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲国产欧美在线一区| 国产亚洲精品第一综合不卡| 少妇的丰满在线观看| 国产日韩欧美亚洲二区| 精品久久蜜臀av无| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 秋霞伦理黄片| 国产精品人妻久久久影院| 男女无遮挡免费网站观看| 一边亲一边摸免费视频| h视频一区二区三区| 一级毛片电影观看| 尾随美女入室| 啦啦啦在线免费观看视频4| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 精品少妇内射三级| 99国产综合亚洲精品| 中文字幕精品免费在线观看视频| 寂寞人妻少妇视频99o| 免费日韩欧美在线观看| av网站免费在线观看视频| 午夜激情av网站| 久久99精品国语久久久| 蜜桃国产av成人99| 欧美日韩视频精品一区| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲天堂av无毛| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲美女视频黄频| 亚洲图色成人| 大码成人一级视频| 久久狼人影院| 精品一区在线观看国产| 免费在线观看完整版高清| 91在线精品国自产拍蜜月| 美女高潮到喷水免费观看| 色播在线永久视频| 人体艺术视频欧美日本| 国产老妇伦熟女老妇高清| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产亚洲一区二区精品| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲av在线观看美女高潮| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 欧美97在线视频| 搡老乐熟女国产| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲国产欧美网| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 免费观看av网站的网址| 9热在线视频观看99| 免费高清在线观看视频在线观看| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲美女视频黄频| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产精品三级大全| 老汉色av国产亚洲站长工具| 好男人视频免费观看在线|