補(bǔ)中益腎丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

徐道華　周修森

[摘要] 目的:制定補(bǔ)中益腎丸質(zhì)量控制方法。方法:采用顯微法鑒別茯苓,薄層色譜法鑒別丹參、黃芪、當(dāng)歸,采用飽和流出式固相萃取(SPE)法制備供試品溶液,高效液相色譜法測(cè)定其中芍藥苷的含量,用ZorbaxSB C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),以甲醇-乙腈-0.025%磷酸溶液(2∶13∶85)為流動(dòng)相,流速為1 ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm。結(jié)果:定性鑒別方法簡(jiǎn)單專屬,定性分析方法準(zhǔn)確可靠,芍藥苷的測(cè)定在0.120～1.200 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,r=0.999 8,平均回收率為99.4%,RSD為1.70%。結(jié)論:所建立的標(biāo)準(zhǔn)可操作性強(qiáng)、質(zhì)量可控。

[關(guān)鍵詞] 補(bǔ)中益腎丸;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);鑒別;含量測(cè)定;芍藥苷

[中圖分類號(hào)]R927.1

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B

[文章編號(hào)]1674-4721(2009)08(a)-092-03

補(bǔ)中益腎丸(水丸)是根據(jù)臨床驗(yàn)方,結(jié)合現(xiàn)代工藝研制的一種醫(yī)院制劑。主要由黃芪、當(dāng)歸、丹參、茯苓、赤芍等十五味中藥組成。具有活血化瘀、補(bǔ)氣健脾之功效,適用于腎病綜合征、慢性腎炎、慢性肝炎等體虛夾瘀,IgA腎病及腎虛腰痛癥。為控制制劑質(zhì)量,保證藥品療效,受該院委托,我們建立了補(bǔ)中益腎丸的質(zhì)量控制

標(biāo)準(zhǔn)[1]52,166。

1 儀器與試藥

Olympus BX41 顯微鏡(日本);WFH-203三用紫外分析儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司);薄層色譜硅膠G預(yù)制板(20 cm×10 cm,上海東方藥品科技實(shí)業(yè)有限公司); Lc-2010c高效液相色譜儀(日本);固相萃取小柱(自制);德國(guó)Sartorius BP 221S(萬分之一)、BT 25S(十萬分之一)電子天平;氧化鋁(100～200目,上海五四化學(xué)試劑廠);丹參酮ⅡA對(duì)照品(批號(hào):110766-200518),黃芪甲苷對(duì)照品(批號(hào):110781-200613),當(dāng)歸對(duì)照藥材(批號(hào):120927-200613),芍藥苷對(duì)照品(批號(hào):110736-2004230),均來源于中國(guó)藥品生物制品檢定所;甲醇、乙腈為色譜純,水為超純水,其余試劑均為分析純。補(bǔ)中益腎丸(水丸,批號(hào):070711,070715,070718,由信陽(yáng)市腎臟病醫(yī)院提供)。

2 方法與結(jié)果

2.1定性鑒別

2.1.1 茯苓取本品,置顯微鏡下觀察,不規(guī)則分枝狀團(tuán)塊,無色,遇水合氯醛液漸溶化;菌絲無色或淡棕色,直徑4～6 μm。

2.1.2 丹參取本品8 g,研細(xì),置具塞錐形瓶中,加乙醚30 ml,超聲處理15 min,在不通風(fēng)環(huán)境下迅速濾過,濾液自然揮干,殘?jiān)右宜嵋阴?.5 ml使溶解,作為供試品溶液。再取丹參酮ⅡA對(duì)照品,加乙酸乙酯制成每1毫升含2 mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn),吸取供試品溶液15 μl、對(duì)照品溶液5 μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以苯-乙酸乙酯(19∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的暗紅色斑點(diǎn),陰性樣品無此斑點(diǎn)。結(jié)果見圖1。

2.1.3 黃芪取本品6 g,研細(xì),加甲醇35 ml,加熱回流1 h,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)铀?5 ml,微熱使溶解,用水飽和的正丁醇提取兩次,每次20 ml,合并正丁醇提取液,用氨試液洗滌2次,每次20 ml,再用水洗滌2次,每次20 ml,正丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状?.5 ml使溶解,作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對(duì)照品,加甲醇制成1 ml含1 mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄VIB)試驗(yàn),吸取供試品溶液10 μl、對(duì)照品溶液5 μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-甲醇-水(13∶6∶1)10 ℃以下放置2 h以上的下層溶液為展開劑,展至12～15 cm,取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇液,在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰,置紫外燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn),陰性樣品無此斑點(diǎn)[2]。結(jié)果見圖2。

2.1.4 當(dāng)歸取“2.2”項(xiàng)下的供試品溶液,揮去乙酸乙酯,殘?jiān)颖?.5 ml作為供試品溶液。取當(dāng)歸對(duì)照藥材1 g,同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(附錄VIB)試驗(yàn),吸取供試品溶液10 μl、對(duì)照藥材溶液5 μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷-乙酸乙酯(10∶2)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外(365 nm)燈下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯同顏色的熒光主斑點(diǎn),陰性樣品無此斑點(diǎn)。結(jié)果見圖3。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱取五氧化二磷干燥至恒重的芍藥苷對(duì)照12.51 mg,置25 ml容量瓶中,加甲醇溶解,并稀釋至刻度為儲(chǔ)備液。精密移取儲(chǔ)備液3 ml置25 ml容量瓶中,加50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得質(zhì)量濃度60.0 μg/ml的對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備取大小適中的空心注射針筒,底部置一塞板,加入2.5 g中性氧化鋁,即得自制的固相萃取小柱,加樣前小柱用3倍柱體積的水預(yù)洗進(jìn)行活化。取補(bǔ)中益腎丸適量,研細(xì),取約2.5 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入50%甲醇50 ml,密塞,放置2 h稱定重量,超聲提取(功率250 W,頻率33 kHz)30 min,放冷,再稱定重量,用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,續(xù)濾液經(jīng)上述小柱,流出速度控制在0.4～0.6 ml/min,收集第8～10毫升流出液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照液的制備按處方比例制備缺赤芍的補(bǔ)中益腎丸劑100 g,研細(xì),取細(xì)粉2.5 g照“3.2項(xiàng)下”制備即得陰性對(duì)照液。

2.2.4 色譜條件色譜柱,Agilent:ZorbaxSB C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm);流動(dòng)相,甲醇-乙腈-0.025 mol/L (2∶13∶85);流速,1 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm;柱溫:室溫。進(jìn)樣量10 μl。在上述色譜條件下,芍藥苷的保留時(shí)間為12.58 min。芍藥苷與其他組分可達(dá)到基線分離,陰性對(duì)照顯示在芍藥苷峰處無干擾。見圖4。

2.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備用自動(dòng)進(jìn)樣器分別吸取對(duì)照品溶液2、4、5、10、15、20 μl進(jìn)樣,按上述色譜條件測(cè)定峰面積,以進(jìn)樣質(zhì)量(μg)對(duì)峰面積(A)進(jìn)行線性回歸,求得回歸方程:Y=72 824X+4 007,r=0.999 8,表明芍藥苷在0.12～1.20 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6 精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液10 μl,連續(xù)進(jìn)樣6次,測(cè)得峰面積響應(yīng)值的RSD=0.4%,表明系統(tǒng)精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品制得的供試品溶液,分別于0、2、4、6、8 h各進(jìn)樣10 μl,記錄色譜圖,測(cè)得峰面積響應(yīng)值的RSD=0.3%,可見供試品在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)同一批樣品,平行精密稱取6份,每份約2.5 g,按“3.2方法”制備供試品溶液,然后分別進(jìn)樣10 μl,測(cè)得平均含量為1.258 8 mg/g,RSD=1.6%,表明該法重復(fù)性好。