金標(biāo)法快速檢測ＨＢｓＡｇ漏檢分析

胡曉靜

[摘要] 目的:早期發(fā)現(xiàn)健康人群乙型肝炎感染狀況,對(duì)疑似病例進(jìn)行乙型肝炎病毒抗體檢測,為能夠更好更快地檢測HBsAg作出診斷。方法:金標(biāo)法檢測后ELISA 法初、復(fù)檢檢測確認(rèn)的陽性血液標(biāo)本,并確定金標(biāo)法漏檢病例。結(jié)果:對(duì)36例初、復(fù)檢HBsAg都為陽性。金標(biāo)試紙條檢測出陽性34份,漏檢率為5.56%。而ELISA 法檢測出陽性36份,陽性率為100%。結(jié)論:從HBsAg金標(biāo)法試紙的靈敏度看,HBsAg試紙只能作為初篩試劑,初檢和復(fù)檢試劑采用ELISA 法,以防止HBsAg 漏檢的發(fā)生,保證檢測結(jié)果的真實(shí)性,避免輸血與HBsAg攜帶者傳播疾病的發(fā)生。

[關(guān)鍵詞] 金標(biāo)法;快速檢測HBsAg;漏檢分析;乙型肝炎病毒

[中圖分類號(hào)]R446.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B[文章編號(hào)] 1673-7210(2009)08(b)-069-02

目前檢測HBsAg一般采用ELISA法,其實(shí)驗(yàn)條件要求較為嚴(yán)格, 操作程序較為復(fù)雜,費(fèi)時(shí)較長?？焖貶BsAg 全血金標(biāo)試條(簡稱金標(biāo)法)具有較高的靈敏度和較好的特異性,且用血量少,操作簡便快速,結(jié)果便于觀察,是一種較理想的檢測HBsAg 初篩試劑,現(xiàn)發(fā)現(xiàn)金標(biāo)法對(duì)36例患者進(jìn)行HBsAg初篩,發(fā)現(xiàn)存在一定的漏檢。為了解漏檢原因,對(duì)ELISA 法確診的36份血液, 金標(biāo)法進(jìn)行檢測,ELISA 法復(fù)檢,根據(jù)檢測結(jié)果,并檢測HBsAg結(jié)果進(jìn)行比較,觀察反應(yīng)時(shí)間及準(zhǔn)確性,但金標(biāo)法與ELISA 檢測結(jié)果存在不相符現(xiàn)象,現(xiàn)報(bào)道如下:

1材料與方法

1.1研究對(duì)象

對(duì)36例初、復(fù)檢都為陽性,而一種金標(biāo)法試紙檢測均為陰性的標(biāo)本進(jìn)行分析。

1.2試劑

HBsAg 金標(biāo)試紙條,ELISA 試劑,均為廈門新創(chuàng)公司出品;HBsAg系列定值血清,購自衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心。靈敏度分別為1 ng/ml和0.12 ng/ml。復(fù)檢ELISA試劑為北京萬泰藥業(yè)有限公司生產(chǎn), 靈敏度為0.12 ng/ml。

1.3方法

HBsAg 金標(biāo)法,取指尖末梢血60 μl 滴于試紙條箭頭下方的墊片上,觀察結(jié)果嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作。ELISA 法嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作。經(jīng)兩次ELISA 法初、復(fù)檢檢測后確認(rèn)的陽性血液標(biāo)本,最后確系“金標(biāo)法漏檢”確認(rèn)漏檢的原因,進(jìn)行分析。

2結(jié)果

對(duì)36例初、復(fù)檢HBsAg均為陽性病例。ELISA 法檢測出陽性36份,陽性率為100%。金標(biāo)試紙條檢測出陽性34 份, 陽性率為94.44 %。再次用ELISA 法檢測均為陽性。如以ELISA法雙結(jié)果為準(zhǔn),金標(biāo)法初篩HBsAg總漏檢率共2例,漏檢率為5.56%。同時(shí)金標(biāo)法檢測樣本陽性反應(yīng)時(shí)間,與溫度的影響等多方面因素影響,有1例患者被檢測出陽性。金標(biāo)法HBsAg總漏檢率1例,漏檢率為2.78%,外界因素導(dǎo)致漏檢率同樣為1例。

3討論

我國是乙肝病毒的高流行區(qū),約10% 的人群為HBsAg 攜帶者, 廣西則達(dá)到15% 左右。金免疫層析試驗(yàn)的原理是在玻璃纖維素膜上預(yù)包被金標(biāo)抗HBsAg 抗體(Au2sAb1) ,硝酸纖維素膜上預(yù)包被金標(biāo)抗HBsAg 抗體(sAb2) 和羊抗鼠IgG。檢測時(shí),樣品血清中HBsAg 可與膠體金2抗體結(jié)合形成復(fù)合物,由于層析作用復(fù)合物沿紙條向前移動(dòng)。如為陽性標(biāo)本,則與檢測線預(yù)包被的抗體結(jié)合形成“Au2sAb12HBsAg2sAb2”夾心物而凝聚顯色。全血金標(biāo)試紙?jiān)谠嚰垪l上加過濾膜以阻止血細(xì)胞的滲透。金標(biāo)法檢測HBsAg,反應(yīng)時(shí)間較短且只需30 μl末梢血,不必做靜脈血分離血清,減少血液離心提取血清的過程。金標(biāo)試紙法與ELISA 法比較, 具有較高的符合率, 較好的特異性,無假陽性現(xiàn)象,且操作簡便快速, 結(jié)果易于觀察, 同時(shí)不受儀器設(shè)備及血樣限制,便于攜帶,出現(xiàn)假陰性率為2.78%,同時(shí)其他原因?qū)е陆饦?biāo)法存漏檢率為2.78%,現(xiàn)分析原因可能是:①試劑的靈敏度。全血金標(biāo)試劑的靈敏度為1 ng/ml ,而ELISA 試劑的靈敏度可達(dá)0.5 ng/ml ,這可能是造成ELISA 法檢測為弱陽性的標(biāo)本而金標(biāo)法檢測為陰性的原因。②操作人員未能按照試劑說明書要求的時(shí)間報(bào)告結(jié)果,人為縮短了檢測時(shí)間,從而造成檢測線不明顯的弱陽性遺漏而誤判。③實(shí)驗(yàn)人員操作不規(guī)范,如加樣過多或過少,未及時(shí)將沒用完的試紙條密封保存而導(dǎo)致潮解。④少數(shù)標(biāo)本可能存在乙型肝炎病毒(HBV) 變異或亞型而不易檢出。⑤高溫、干燥、風(fēng)吹均能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。現(xiàn)報(bào)告其他原因?qū)е陆饦?biāo)法存漏檢率與金標(biāo)法存漏檢率相同。因此, HBsAg 快檢的假陰性也可能由人為因素及環(huán)境因素造成[4],如判斷結(jié)果時(shí)間不夠、反應(yīng)不充分、氣溫低(克服方法是冬天注意保溫或延長反應(yīng)時(shí)間) ;加血量不足或過多;過濾膜破損, 血液滲出過濾膜使檢測線模糊,導(dǎo)致判斷失誤;判斷不仔細(xì),對(duì)那些隱約可見的陽性線誤判為陰性; 缺乏經(jīng)驗(yàn)把強(qiáng)陽性結(jié)果(只有1條陽性線, 無陰性線) 判為陰性等。因此,工作人員應(yīng)規(guī)范操作步驟,避免人為因素造成的假陰性結(jié)果,以減少初篩時(shí)的漏檢,減少血液浪費(fèi), 減少經(jīng)濟(jì)損失。從目前HBsAg金標(biāo)法試紙的靈敏度看,HBsAg 試紙只能作為初篩試劑,初檢和復(fù)檢試劑采用ELISA 法,以防止HBsAg 漏檢的發(fā)生,保證檢測結(jié)果的真實(shí)性,避免輸血與減少HBsAg攜帶者傳播疾病的發(fā)生。

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(收稿日期:2008-12-12)