天麻共生菌簡易培養(yǎng)技術(shù)

謝學(xué)強(qiáng)

摘要介紹了利用居室一角、蒸煮食品用壓力鍋等家用設(shè)施設(shè)備,進(jìn)行天麻共生萌發(fā)菌和共生蜜環(huán)菌的簡易培養(yǎng)技術(shù),以期為天麻的栽培提供參考。

關(guān)鍵詞天麻;萌發(fā)菌;蜜環(huán)菌;簡易培養(yǎng)技術(shù)

中圖分類號Q93-335文獻(xiàn)標(biāo)識碼B文章編號 1007-5739(2009)21-0104-02

天麻(Gastrodia elata Bl.)人工栽培有無性繁殖和有性繁殖2種方法。無性繁殖栽培是播種米麻、白麻生產(chǎn)天麻的方法,有性繁殖栽培是播種天麻種子生產(chǎn)天麻的方法。前者需要蜜環(huán)菌(Armillariella mellea)作為共生菌為天麻提供營養(yǎng),后者先要萌發(fā)菌后要蜜環(huán)菌作為共生菌為天麻提供營養(yǎng)。培養(yǎng)這2種共生菌,常需要一些能保證無雜菌感染的專用設(shè)施設(shè)備,如高壓蒸汽滅菌鍋、接種室、超凈工作臺或接種箱等。現(xiàn)將天麻共生菌簡易培養(yǎng)技術(shù)總結(jié)如下。

1袋裝或瓶裝共生菌培養(yǎng)

1.1培養(yǎng)基配制

1.1.1萌發(fā)菌培養(yǎng)基配制。主要配方為闊葉樹樹葉78%、麥麩20%、石膏1%、白糖1%。樹葉以殼斗科的為好,如板栗、麻櫟、青岡等。首先將樹葉用水預(yù)濕,再將石膏、白糖溶于水中,加入麥麩攪拌均勻后澆入預(yù)濕的樹葉中,充分拌勻,并調(diào)節(jié)含水量至60%~65%(用手抓一把并用力握捏,指縫有水溢出但不滴水即可)。培養(yǎng)基配制好以后,分裝到菌袋或罐頭瓶中。菌袋用耐高溫的聚丙烯或低壓聚乙烯塑料袋。裝料時,用大拇指稍加按壓,使培養(yǎng)基松緊適度,并用木錐從袋口或瓶口向里打一孔,扎緊袋口或用耐高溫薄膜封瓶口。培養(yǎng)基裝填不宜過少和過多,袋裝以封口后料袋長15cm為宜,瓶裝以裝至瓶頸為宜。

1.1.2蜜環(huán)菌培養(yǎng)基配制。枝段準(zhǔn)備:選用闊葉樹尚未萌發(fā)的樹枝,尤其是殼斗科、樺木科植物的樹枝,如麻櫟、槲櫟、青岡、樺木等,其他如野櫻桃、樗樹等,這些植物呈灌叢樣生長的,可進(jìn)行擇伐,喬木類可進(jìn)行修剪,利用擇伐株或修剪枝做枝段,可做到資源的永續(xù)利用。將直徑1~2cm的樹枝,斜砍成3cm長的小段,放入0.25%硝酸銨溶液中浸泡20min后,撈出裝入罐頭瓶,裝填緊實(shí)。培養(yǎng)基主要配方:1號為去皮去芽眼馬鈴薯200g、白糖20g、黃豆粉5g、磷酸二氫鉀1g、瓊脂16g,加水定容至1 000mL,pH值自然;2號為玉米粉20g代替馬鈴薯,其他成分同1號。培養(yǎng)基配制方法:對1號而言,先將馬鈴薯切成1cm3的小塊,銻鍋中加水煮沸20min后,用雙層紗布過濾,取其濾液,加入瓊脂,加熱使瓊脂溶化后再加入其他成分,充分?jǐn)噭蚨ㄈ莺髠溆?。?號而言,將瓊脂加入1 000mL水中熬煮溶化后,加入其他成分,充分?jǐn)噭蚝髠溆?。將配制好的培養(yǎng)基趁熱分裝到枝段瓶中,使液面高出枝段1cm左右,用耐高溫薄膜封口。

1.2培養(yǎng)基簡易滅菌

用家庭用24cm或26cm壓力鍋來滅菌,每次可對6~7袋(瓶)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。在鍋內(nèi)加入5~6cm深的水,將需要滅菌的袋(瓶)料放在鍋內(nèi)蒸屜上,加蓋后加熱至出蒸汽,5~6min后蓋上壓閥,直至閥門冒出蒸汽時開始計時,再維持閥門冒出少量蒸汽的狀態(tài)達(dá)1.0~1.5h,之后將鍋搬離火爐,自然冷卻后打開鍋蓋,取出袋(瓶)裝培養(yǎng)基。也可用土蒸鍋來滅菌。由于鍋內(nèi)溫度最高為100℃,所以需維持8h以上才能達(dá)到滅菌目的。

1.3接種培養(yǎng)

1.3.1簡易接種室準(zhǔn)備。選干凈房間一隅,用粗鐵絲或木條搭成框架,四周及頂部套上塑料薄膜,注意讓膜邊相接處和膜邊與地面相接處盡量不漏氣,構(gòu)成一個“密閉室”?！懊荛]室”長、寬、高均為2m左右。將需要接種的培養(yǎng)基及其他用具和材料搬入“密閉室”后,用甲醛熏蒸消毒。甲醛用量為10mL/m3,這個“密閉室”共用80mL甲醛。將甲醛倒入耐高溫的容器如搪瓷碗中,放在酒精燈上加熱熏蒸即可。

1.3.2菌種準(zhǔn)備與接種。共生菌菌種可在市場上購買,可以購買試管母種或袋(瓶)料原種。萌發(fā)菌主要有小菇屬(Mycena)的石斛小菇(M.dendrobii)、蘭小菇(M.orchicola)、開唇蘭小菇(M.anoectochila)、紫箕小菇(M.osmundicola)等,以石斛小菇最好。蜜環(huán)菌有許多菌株,各地出售的幾乎都有差異。如果能自己分離純化或提純復(fù)壯2種共生菌更好。消毒后次日,換上干凈衣服,戴上口罩,進(jìn)入“密閉室”接種。將試管母種或袋(瓶)料原種用接種鏟等工具挑起,迅速放入滅菌袋料上剛打出的孔中或放入剛揭開封口膜的瓶中,立即用透明膠封住孔口或用原封口膜封住瓶口。試管母種,1管可轉(zhuǎn)接3~5袋(瓶)料;袋(瓶)料原種,1袋(瓶)可轉(zhuǎn)接50~60袋(瓶)料。接種鏟等工具可用粗鋼絲打制而成。接種前及每隔一段時間,用75%酒精將雙手消毒,并將接種工具在酒精燈火焰上灼燒消毒。最好2個人1組互相配合進(jìn)行接種,一人打孔或揭封口膜和封口,一人挑菌和接種。打孔先用75%酒精涂抹打孔處消毒。全部操作應(yīng)盡量在酒精燈邊進(jìn)行。

1.3.3培養(yǎng)。接種完畢后,將袋(瓶)料放在潔凈、干燥、光線暗淡、溫度穩(wěn)定在20~25℃的房間中培養(yǎng)。要保持溫度,可用電爐或電熱絲通電加溫,也可在安裝了煙囪、火道及火墻的房間外燃燒炭、秸稈等燃料來加溫。萌發(fā)菌接種培養(yǎng)1~2個月后,菌絲即可長滿整袋(瓶)的樹葉,看上去好象是樹葉長滿了白色霉層一樣,此即菌葉。天麻有性繁殖栽培時,即用菌葉來伴播天麻種子(將粉塵樣的天麻種子均勻撒播在菌葉上),借以提高天麻種子的發(fā)芽率。天麻種子在4~8月播種,萌發(fā)菌需在2~6月接種培養(yǎng)。蜜環(huán)菌接種培養(yǎng)20~45d后,菌索即長滿菌瓶,看上去像每條枝段上長出了許多棕色或淺棕色根系一樣。瓶裝菌枝可用于無性繁殖時伴播米麻、白麻,也可用于有性繁殖時與萌發(fā)菌一起伴播天麻種子,還可用于進(jìn)一步培養(yǎng)菌棒。為了保證米麻、白麻、天麻種子的適期播種和滿足生產(chǎn)上培養(yǎng)菌棒的需要,瓶裝菌枝應(yīng)在前一年12月至當(dāng)年4月接種培養(yǎng)。

2蜜環(huán)菌土培菌枝的培養(yǎng)

2.1枝段和基礎(chǔ)培養(yǎng)料制備

2.1.1枝段制備。與瓶裝菌枝的基本相同,但直徑可以大些,兩端斜砍成10cm長,并斜砍3~4個魚鱗口。

2.1.2基礎(chǔ)培養(yǎng)料制備。一是山林中的天然腐殖土,揀去粗石塊和活草根即可。二是半腐熟落葉加砂,晚秋收集闊葉樹落葉,堆放在坑中,加水濕透,蓋膜使之腐熟,翌年春天,用腐葉5份加高粱粒大小的砂子1份,拌合均勻即成。三是闊葉樹粗鋸末2份或3份加高粱粒大小的沙子1份,拌合均勻即成。調(diào)節(jié)各種基礎(chǔ)培養(yǎng)料含水量至60%~65%后備用。

2.2培養(yǎng)方法

2.2.1地下坑培法。挖一土坑,長、寬各60cm,深30cm,挖松坑底,整平后鋪1層闊葉樹濕樹葉(壓實(shí)后厚1.5cm即可,下同)。樹葉上擺1層枝段,各枝段相互平行靠緊。在枝段層上前后左右每隔10cm擺一枝瓶裝菌枝。接著再擺1層枝段。最后,撒上1層基礎(chǔ)培養(yǎng)料,不宜過厚,以填滿枝段縫隙并蓋住枝段為度。如此,便做完了第1層菌枝。照此法,在第1層菌枝上還可依次往上再做5~6層。最頂1層,蓋基礎(chǔ)培養(yǎng)料后再蓋砂土5~6cm厚,并鋪上1層樹葉保溫保濕。培養(yǎng)50d左右,蜜環(huán)菌長滿枝段,即可用于伴播米麻、白麻、天麻種子或用于培養(yǎng)菌棒。

2.2.2箱培法。是用紙箱、木箱或竹筐等透氣透水容器來代替土坑培養(yǎng)菌枝的方法。在箱底鉆若干通氣排水小孔,鋪1層小石頭,小石頭上撒砂土2~3cm厚,再按地下坑培法的樣子進(jìn)行菌枝培養(yǎng)即可。

3蜜環(huán)菌菌棒的培養(yǎng)

菌棒是長有蜜環(huán)菌菌索的粗樹棒,也叫菌材。它可用于天麻有性繁殖栽培,但更主要的是用于天麻無性繁殖栽培和生產(chǎn)蜜環(huán)菌菇體(出菇),因此菌棒生產(chǎn)的意義很重要。培養(yǎng)菌棒,所用的樹種和基礎(chǔ)培養(yǎng)料均與土培菌枝的相同,培養(yǎng)方法也與之大同小異。但應(yīng)注意以下幾點(diǎn)。

3.1場地選擇和準(zhǔn)備

菌棒生產(chǎn)場地要靠近樹林或天麻栽培地,最好選在天麻栽培地的中心;場地坡度不得大于30°;高海拔地區(qū)選陽山,低海拔地區(qū)選陰山;場地土壤土層深厚,上層砂土下層黏土,土質(zhì)弱酸性;不選熟地或荒地而選荒山或樹林。場地選好后,應(yīng)除草、平地或改成小梯田。

3.2菌種準(zhǔn)備

選用無雜菌感染,表面有菌索,菌索細(xì)嫩、棕紅色且有白色生長點(diǎn)的土培菌枝作菌種,也可用瓶裝菌枝作菌種。

3.3培養(yǎng)方法

與土培菌枝的基本相同,但有以下區(qū)別:生產(chǎn)菌棒的土坑應(yīng)長些,長為90cm;所用樹棒同樣要新鮮,要砍好魚鱗口,但與枝段相比應(yīng)粗些和長些,長為30cm;每層菌枝實(shí)際上包含2層枝段,每坑可培育12~13層菌枝,而每層菌棒只有1層樹棒,每坑可培育5~6層菌棒。

3.4培養(yǎng)時間

菌棒培養(yǎng)需1~2個月才成,因此當(dāng)米麻、白麻、天麻種子在4~8月播種時,菌棒應(yīng)在2~6月接種培養(yǎng)。

3.5蜜環(huán)菌更新或更換

同一菌株的蜜環(huán)菌,連續(xù)使用4~5代后就出現(xiàn)退化現(xiàn)象,引起2種栽培方式的天麻產(chǎn)量降低,品質(zhì)變劣,因此應(yīng)及時用新菌株或用老菌株提純復(fù)壯的菌株進(jìn)行蜜環(huán)菌的更新或更換。要求每隔4~5年,從母種的分離純化開始,重新生產(chǎn)蜜環(huán)菌的各級菌種。萌發(fā)菌也有同樣的現(xiàn)象發(fā)生。

4參考文獻(xiàn)

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