沙棘對小鼠免疫功能作用的研究

宓　偉　鞠艷華

（1.濱州醫(yī)學(xué)院，山東 濱洲256603；2.煙臺市警備區(qū)第二干休所，山東 煙臺 264000）お

摘 要：目的：觀察沙棘對小鼠抗體形成細(xì)胞的作用。方法：取小鼠24只，隨機(jī)分為對照組和實(shí)驗(yàn)組，分別用生理鹽水和100%濃度沙棘浸出液定期給小鼠灌胃，然后進(jìn)行小鼠抗體產(chǎn)生能力檢測、特異玫瑰花環(huán)結(jié)形成細(xì)胞檢測（SRFC）、血清IgG檢測。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組以上三項(xiàng)免疫學(xué)指標(biāo)均有顯著增高，與對照組相比均有非常顯著性差異。結(jié)論：沙棘有明顯促進(jìn)小鼠免疫功能增強(qiáng)的作用。

關(guān)鍵詞：沙棘；小鼠免疫功能；研究

中圖分類號：R284文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1673-2197（2009）01-0038-02オ

沙棘（Hippophae rhamnoides L）又名醋柳、酸刺子為胡頹子科多年生灌木或小喬木沙棘的成熟果實(shí)和葉。秋、冬二季果實(shí)成熟或凍硬時(shí)采收，除去雜質(zhì)，干燥或蒸后干燥。主產(chǎn)于陜西、四川、甘肅、寧夏、山西、遼寧等省。主要功效：益氣生津，祛痰止咳，消食止瀉，活血散瘀^[1]。其化學(xué)成分主要有黃酮類、萜類、甾體類、蛋白質(zhì)和氨基酸類、油和脂肪酸類、揮發(fā)油類、有機(jī)酸類、糖及微量元素等，是一種營養(yǎng)豐富、藥用價(jià)值極高的植物^[5]。近年來引起國內(nèi)外學(xué)者的極大重視。我們主要進(jìn)行了沙棘對抗體形成細(xì)胞作用的研究，旨在為沙棘的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1儀器與藥物

低溫冷凍離心機(jī)（Beckmen，美國）；美國Multiskan產(chǎn)全自動酶標(biāo)儀；恒溫水浴箱（上海）；電泳儀（上海）；100目不銹鋼網(wǎng)。沙棘（購于附屬醫(yī)院中藥房），取100g加水1000mL，文火煎煮2h，去渣濃縮為100mL（濃度為100%）備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物及分組

取BALB/C純系小鼠24只，體重18~22g，雌雄各半，隨機(jī)分為兩組，每組12只，Ⅰ組為生理鹽水對照組，Ⅱ組為藥物實(shí)驗(yàn)組。

1.3 方法

Ⅰ組用生理鹽水灌胃，1次/d，0.5mL/（次?只），共灌胃10次；Ⅱ組用沙棘液灌胃，1次/d，0.5mL/（次?只），共灌胃10次。

1.4 檢測項(xiàng)目

（1）定量溶血分光光度測定法（QHS）^[2]。本法體外測定B細(xì)胞產(chǎn)生分泌抗體裂解紅細(xì)胞所釋放的血紅蛋白量（以O(shè)D值表示），其結(jié)果可反映機(jī)體體液免疫功能。實(shí)驗(yàn)第5天分別將5%的綿羊紅細(xì)胞0.2mL注入各組小鼠腹腔內(nèi)。第11天頸椎脫臼處死小鼠，常規(guī)取脾臟，制備脾細(xì)胞懸液，然后脾細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度至1×107/mL，將脾細(xì)胞懸液均分，每組每只小鼠設(shè)3支試管，每管依次加入脾細(xì)胞懸液，0.2%綿羊紅細(xì)胞（SRBC），1∶10新鮮豚鼠血清（補(bǔ)體）各1mL混勻。另外分別設(shè)補(bǔ)體、脾細(xì)胞以及SRBC對照管各3支，置37℃水浴1h，2000轉(zhuǎn)/min離心5min。取上清液用96孔細(xì)胞培養(yǎng)板于全自動酶標(biāo)儀450nm波長處測A值，作為QHS反應(yīng)值。

（2）特異玫瑰花環(huán)形成細(xì)胞檢測（SRFC）^[3]。取脾細(xì)胞0.1mL（1×107/mL），1%SRFC 0.1mL，小牛血清0.1mL，試管內(nèi)混勻，4℃放置2h，加結(jié)晶紫溶液20μL，計(jì)數(shù)500個(gè)淋巴細(xì)胞，求出SRFC/10⁶脾細(xì)胞的形成率。

（3）血清IgG檢測^[3]。采用對流免疫電泳實(shí)驗(yàn)，摘除小鼠眼球取血，分離血清，取不同稀釋度血清10μL加入陰極端瓊脂板孔中，將瓊脂板陽極端孔內(nèi)加入羊抗鼠IgG（1∶32）10μL，將對流免疫電泳通電30min后觀察結(jié)果，以血清最高稀釋度仍有明顯沉淀線為準(zhǔn)。結(jié)果以稀釋度表示。

2 結(jié)果

（1）沙棘對抗體形成細(xì)胞的影響。

表1結(jié)果顯示，用藥組可促進(jìn)抗體細(xì)胞形成，與對照組相比有顯著性差異（P< 0.05）。

（2）沙棘對SRFC的影響。

表2結(jié)果顯示，用藥組SRFC產(chǎn)生明顯增強(qiáng)，與對照組相比有非常顯著性差異（P< 0.01）。

（3）沙棘對小鼠IgG的影響。

表3結(jié)果顯示，用藥組可明顯促進(jìn)IgG產(chǎn)生。與對照組相比有顯著性差異（P<0.01）。

3 討論

沙棘是臨床上常用的中藥，用于咳嗽痰多、消化不良、食積腹痛、跌打瘀腫等^[4，5]?，F(xiàn)代研究表明：沙棘能顯著增加小鼠血清溶菌酶的含量，極顯著地提高綿羊紅細(xì)胞的滴度，也能提高巨噬細(xì)胞的吞噬功能，提高淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和自然玫瑰花環(huán)形成率，且能明顯增加血清IgG的含量；并有抗心肌缺氧的作用、保肝的作用和抗炎抗放射的作用^[6，7]。本研究重點(diǎn)從細(xì)胞及分子水平探討沙棘對抗體形成細(xì)胞、IgG分子的影響。實(shí)驗(yàn)證明，沙棘能增強(qiáng)小鼠抗體形成細(xì)胞（B細(xì)胞）活性，促進(jìn)B細(xì)胞分化、增殖為漿細(xì)胞；沙棘組的QHS值增高與對照組相比有顯著性差異（P<0.05），沙棘組SRFC數(shù)目明顯高于對照組，與對照組相比有非常顯著性差異（P<0.01），沙棘組的小鼠血清IgG含量增加，與對照組相比有非常顯著性差異（P<0.01）。結(jié)果提示機(jī)體免疫功能下降者可口服沙棘

以增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，預(yù)防某些疾病。本研究為臨床應(yīng)用沙棘提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 高學(xué)敏.中藥學(xué)［M］.下冊.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000.

［2］ 徐淑云. 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法［M］.第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1992.

［3］ 高美華，馮獻(xiàn)啟，李波清，等. 磁場對SP2/O瘤鼠抗體形成細(xì)胞的作用研究［J］.中華理療雜志，1998，21（4）：225.

［4］ 王本祥.現(xiàn)代中藥藥理與臨床［M］.天津：天津科技翻譯出版公司，2004.

［5］ 肖培根.新編中藥志［M］.第二卷.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002.

［6］ 邱世翠，李宗山，郭毅，等. 枸杞對輻射損傷小鼠造血功能恢復(fù)的影響［J］. 中國中醫(yī)藥科技，2000，7（6）：362.

［7］ 高梅，賈鐳，陳芬，等. 虎尿?qū)π∈罅馨图?xì)胞增殖和IL-2產(chǎn)生的影響［J］. 中國實(shí)驗(yàn)臨床免疫學(xué)雜志，1999，11（3）：39.

（責(zé)任編輯：陳涌濤）