消痤寧乳膏的藥效學研究

陳　穎

（上海市普陀區(qū)人民醫(yī)院，上海 200060）お

摘 要：痤瘡為常見的慢性毛囊皮脂腺炎癥性皮膚病，發(fā)病率達15％以上。青春期男女，可有不同程度的皮損，其臨床表現(xiàn)為黑頭、粉刺、丘疹、膿疤、囊腫、結節(jié)，并可見癱痕形成。病情較重者需要治療，然而迄今尚無理想的治療藥物，尋找治療痤瘡的有效藥物，成為皮膚美容方面的熱門課題之一。筆者采用高效液相色譜法（HPLC）測定消痤寧乳膏中主要有效成分克林霉素和甲硝哇的含量，并擬定其質(zhì)量標準草案，進行藥效學研究。

關鍵詞：消痤寧乳膏；痤瘡；藥效

中圖分類號：R969文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2009）01-0019-02オ

1 材料

1.1 動物

昆明小鼠（KM），體重18～22g，雌雄各半；新西蘭大白兔，體重1.5～2.0kg，均由廣西醫(yī)科大學實驗動物中心提供。

1.2 儀器

電子分析天平、普通培養(yǎng)箱、厭養(yǎng)發(fā)生袋、厭養(yǎng)發(fā)生罐、病理圖像分析儀、玻璃涂棒。

1.3 試劑

氧氣指示劑、營養(yǎng)肉湯、厭養(yǎng)肉湯、金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、痤瘡丙酸桿菌、消痤寧乳膏、巴豆油、瓊脂粉、營養(yǎng)瓊脂、濃媒焦油溶液、維胺酷維E乳膏。

2 方法

2.1 消痤寧乳膏的體外抗菌實驗

2.1.1 藥物的配制 取適量的消痤寧乳膏，精密稱量，吐溫-80溶解，滅菌的營養(yǎng)肉湯稀釋，經(jīng)無菌的0.22 μm過濾器過濾除菌后，無菌的營養(yǎng)肉湯進行對倍稀釋法，配制成濃度為0.003～6.25mg含藥培養(yǎng)液。

2.2.2 對金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌的抑菌和殺菌實驗 將金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌分別從斜面培養(yǎng)基接種到肉湯培養(yǎng)液中，置于普通的培養(yǎng)箱35℃培養(yǎng)16～18h；用麥氏標準比濁管調(diào)整菌液濃度為1.5×10⁸gCFU/mL，無菌的生理鹽水稀釋成1×10⁶CFU/mL備用。分別取上述濃度的金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌0.1mL分別加至1mL，含不同濃度藥液的試管中于培養(yǎng)箱35℃培養(yǎng)24h后觀察有無渾濁，以不出現(xiàn)渾濁的最低濃度為觀察最小抑菌濃度（MIC），再依次取未渾濁的各管培養(yǎng)物0.1mL分別加入無菌的培養(yǎng)皿中，用玻璃涂棒均勻地涂布，倒置于培養(yǎng)箱35℃培養(yǎng)24h，菌落數(shù)小于5個的平板中所含最低藥物濃度為最小殺菌濃度（MBC），共做3次平行實驗。

2.2.3 對痤瘡丙酸桿菌（P.Acne）作用的研究 用上述方法將藥物配成 4.9～625μg/mL含藥濃度培養(yǎng)液。將P.Acne在35℃厭氧發(fā)生罐中進行厭氧培養(yǎng)48h，用無菌的生理鹽水稀釋到所需的濃度，取菌液0.1mL加入到體積為1mL的不同濃度的無菌藥液的試管中。置厭氧罐中35℃培養(yǎng)48h，用氧氣指示劑來指示厭氧罐內(nèi)的氧氣含量（當氧氣的濃度大于0.5％時，氧氣指示劑由紫色或紫紅色變成藍色）。觀察有無渾濁，以不出現(xiàn)渾濁的最低濃度為觀察最小抑菌濃度（MIC），再依次取未見渾濁的試管的培養(yǎng)液0.1mL分別加入到含有6％羊血的厭氧培養(yǎng)基中，用玻璃涂棒將液體均勻地涂布在平皿表面，倒置厭氧罐中，在35℃進行培養(yǎng)48h，平板上菌落數(shù)小于5個的平板中所含最小藥物濃度為最小殺菌濃度（MBC）。

2.1.4 對照管 配成含1％吐溫-80的培養(yǎng)液、含菌液的吐溫-80培養(yǎng)液，含基質(zhì)的培養(yǎng)液、含菌液的基質(zhì)培養(yǎng)液，含藥的培養(yǎng)液以及含菌液的培養(yǎng)液對照管，觀察各對照管是否有細菌生長。

2.2 對巴豆油致小鼠耳廓炎癥的影響

將昆明小鼠40只，雌雄各半，體重為18～22g，隨機分為4組，每組10只，分別為：基質(zhì)組、維胺酷維E乳膏（1次/d）、消痤寧乳膏高劑量組（2次/d）、消痤寧乳膏低劑量組（1次/d）。將藥物涂于小鼠右耳廓，左耳作對照，連續(xù)給藥7d，末次給藥后1h，用溫水洗去藥膏，將2％巴豆油混合致炎劑（2％巴豆油、20％無水乙醇、5％蒸餾水和73％乙醚）0.05mL涂在各組小鼠右耳廓以引起炎癥。致炎4h后將小鼠頸椎脫臼處死，沿耳廓基線剪下左右兩耳，6mm打孔器將雙耳相同的部位等面積打下圓耳片，用電子天平稱重，以右耳片重-左耳片重之差為腫脹度，比較組間差異，來評價藥物對巴豆油混合致炎劑所致耳廓炎癥的影響，用下面公式并計算用藥組腫脹抑制率。

抑制率=基質(zhì)空白組腫脹度-實驗組腫脹度基質(zhì)空白組腫脹度×100%

2.3 對兔耳實驗性痤瘡模型的治療作用

取新西蘭白兔30只，第一組6只為正常組，不涂任何藥物；余下24只家兔，在左右耳內(nèi)側面耳管開口處ZcmXZcm范圍，每日涂煤焦油1次，每次0.5mL，連續(xù)2周。將24只大白兔隨機分為4組，分別為：模型對照組（局部外涂賦形劑，2次/d），消痤寧乳膏高劑量組（局部外涂消痤寧乳膏，2次/d）、消痤寧乳膏低劑量組（局部外涂消痤寧乳膏，1次/d），陽性對照組（維胺酷維E乳膏，2次/d），連續(xù)用藥2周。每日除給藥外，應肉眼觀察局部給藥處皮膚的變化：耳厚薄、硬度、粗燥程度、毛囊口有無黑角栓等。末次給藥后24h，用溫水洗去藥膏，取下每只兔耳基本相同的部位皮膚（全層），10％福爾馬林溶液固定后，HE染色后，光鏡下觀察病理組織學改變，并進行顯微照相觀察組織學變化。

組織學判定標準：“0”為無粉刺；“＋”為毛囊漏斗部可見少量致密角化物質(zhì)；“＋＋”為毛囊漏斗部可見中等量致密角化物質(zhì)，并向皮脂腺延伸；“＋＋＋”為擴張毛囊內(nèi)有廣泛的角化物質(zhì)，與人類開放性粉刺相似。

2.4 統(tǒng)計方法

實驗數(shù)據(jù)用±s表示，SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，P＜0.05表示有顯著性意義，P＜0.01表示差異有明顯的顯著性差異。

3 結果

3.1 消痤寧乳膏體外抗菌作用

（1）對照管細菌生長情況結果見表1。

注：-：無細菌生長；＋：有細菌生長

說明吐溫-80、培養(yǎng)基液和含藥的培養(yǎng)液都沒有被細菌污染，細菌分別能在培養(yǎng)液和含吐溫-80培養(yǎng)液中正常繁殖。

（2）抗菌作用。

表2 消痤寧乳膏的體外抗菌作用

菌種MIC（mg/mL）MBC（mg/mL）

含黃色葡萄球菌0.0240.048

白色葡萄球菌0.0060.098

痤瘡丙酸桿菌0.0200.156

結果表明，消痤寧乳膏對痤瘡的主要致病菌金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌和痤瘡丙酸桿菌均有一定的抑制和殺滅作用。

3.2 消痤寧乳膏對小鼠耳廓炎癥的抑制作用

實驗結果見表3所示，低劑量組可明顯抑制巴豆油誘發(fā)小鼠耳片的腫脹；高劑量組對小鼠耳片腫脹抑制率達41.18％；陽性對照組對小鼠耳片腫脹抑制率為23.53％。

表3消痤寧乳膏對小鼠耳廓炎癥的抗炎作用

菌種腫脹度（mg）抑制率（%）

基質(zhì)空白組18.1±2.70

維胺酯維E乳膏14.4±1.2*15.29

消痤寧乳膏低劑量13.0±2.7*23.53

消痤寧乳膏高劑量10.1±0.6*41.18

注：與基質(zhì)空白組比較：*P＜0.01。

3.3 對兔耳實驗性痤瘡模型的治療作用

（1）正常組。肉眼所見：正常兔耳菲薄、柔軟，有良好的透光度，可見清晰的毛細血管網(wǎng)，兔耳管開口處可見整齊排列的毛囊和纖細的毛發(fā)；組織學：正常兔耳表皮較薄，一層顆粒層，約2～4層棘細胞層，可見毛囊，真皮、表皮交界清楚，由于毛管較小，切面中常見不到。

（2）模型組。肉眼所見：在涂煤焦油過程中，局部組織明顯增厚、變硬，毛囊口有黑色角拴，成黑頭粉刺狀，揭開涂厚的煤焦油痂時，可見附著其上毛囊角栓，其下可見開放增大的毛囊口，隆起呈丘疹狀；組織學：表皮增厚，出現(xiàn)角化過度，棘細胞層肥厚，毛囊皮脂腺增大明顯，可見角化物質(zhì)，毛囊漏斗部充滿角化物質(zhì)并擴大成壺狀，真皮上層明顯毛細血管擴張，彌漫散在炎性細胞浸潤，另有游離的炎癥細胞。

（3）基質(zhì)組。不管是肉眼還是組織學，與模型組相似，皮膚病變也無明顯改善，局部組織明顯增厚、變硬，毛囊口有黑色角拴，表皮增厚，毛囊口擴張，毛囊有大量角化物。

（4）給藥組。肉眼所見：整個皮片厚度可見變薄，柔軟度有所增加，局部毛囊口角栓及粉刺減少，丘疹變平減少，且改善程度呈劑量依賴性。

（5）胺醋維E乳膏陽性對照組。與給藥組在肉眼和組織學上大部分相似，毛囊口縮小，有疏松角化物質(zhì)充填，真皮炎癥細胞浸潤也有所減少。

3.4 在整個兔耳痤瘡造模過程中組織學改變

表4和表5結果表明消痤寧乳膏涂搽兔耳角化部位的皮膚，可減輕皮膚毛囊皮脂腺導管的過度角化和表皮層的增厚，組織病理學改善呈劑量依賴性。

4 結論

經(jīng)過藥效學試驗驗證，表明消痤寧乳膏可抑制兔耳實驗性痤瘡模型的毛囊上皮角化過度和皮脂腺增生；可抑制引起痤瘡的白色葡萄球菌、金黃色葡萄球菌和痤瘡丙酸桿菌等主要致病菌；也可抑制巴豆油混合致炎物質(zhì)引起的小鼠耳廓炎癥反應。

參考文獻：

［1］ 陳新謙，金有豫.新編藥物學［M］.北京：人民出版社，2007.

［2］ 徐叔云，陳修.藥理實驗方法學［M］.北京：人民出版社，2007.

［3］ 張均田.藥理實驗方法學［M］.北京：北京醫(yī)科大學/中國協(xié)和醫(yī)科大學聯(lián)合出版社，2007.

［4］ 薛春宵，李士佐.痤瘡清對實驗性兔耳痤瘡模型的治療作用［J］.中華勞動衛(wèi)生職業(yè)病雜志，2007（11）.

［5］ 柴寶，黃敗.中藥痤瘡沖劑對兔耳實驗模型抗角化作用的研究［J］.中華皮膚科雜志，2007（9）.

（責任編輯：姜付平）