花椒根部腐爛病原菌的分離與鑒定

張迎君　陳元平　楊　麗　張義剛　張　龑　周心智　張?jiān)瀑F

摘要：我們?cè)诮虬l(fā)現(xiàn)九葉青花椒根部腐爛后導(dǎo)致果實(shí)脫落。為此，開展了該病原的分離鑒定。結(jié)果表明，該真菌屬于腐皮鐮刀菌[Fusarium solani(Hart.)Sagel，引起九葉青花椒根腐。

關(guān)鍵詞：花椒；病原菌；分離；鑒定

江津九葉青花椒為江津最為重要的經(jīng)濟(jì)作物，2007年全區(qū)種植面積已經(jīng)達(dá)到50萬畝，產(chǎn)量達(dá)15萬噸，產(chǎn)值達(dá)9.2億元。但是生產(chǎn)普遍存在根部腐爛，引起樹體死亡。為此，本文對(duì)引起該現(xiàn)象的病原菌進(jìn)行了分離與鑒定，以期為其防治提供依據(jù)。

1、材料與方法

1．1材料

1．1．1供試花椒根樣由江津區(qū)先鋒鎮(zhèn)陳永江于江津先鋒夾灘社區(qū)3社花椒園采集送樣。

1．1．2供試培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基(PDA)；馬鈴薯(去皮)200g，瓊脂20g，葡萄糖20g，加水定容至1000ml。

1．2試驗(yàn)方法

1．2．1癥狀觀察對(duì)采集的花椒樹根樣本進(jìn)行觀察，記錄病害癥狀。

1．2．2病原菌的分離與純化組織分離：選擇典型發(fā)病病斑切取5mmx5mm的小塊，置于PDA平板上，每皿5片，25℃培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)。待病菌長出菌絲產(chǎn)生分生孢子后在顯微鏡下觀察分生孢子的形態(tài)，再通過劃線培養(yǎng)得到單孢菌落。

單孢分離：選擇典型病斑的部位，放人裝有少量無菌水和玻璃顆粒的滅菌三角瓶中，充分搖動(dòng)，待分生孢子釋放到無菌水中，制成孢懸液，用移液槍將其轉(zhuǎn)到培養(yǎng)皿中，再倒平板后充分混勻，冷凝后置于25℃培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)。待病菌長出菌絲產(chǎn)生分生孢子后在顯微鏡下觀察分生孢子的形態(tài)。

1．2．3病原菌的菌落形態(tài)觀察及鑒定菌落形態(tài)觀察；將單菌蓓的病原菌制片后無需染色直接在顯微鏡下觀察菌絲形態(tài)、孢子形狀，記錄觀察結(jié)果并拍照，按照Saccardo的真菌分類系統(tǒng)進(jìn)行種類鑒定。

2結(jié)果與分析

2．1病害癥狀受害植株根部變色腐爛，根皮與木質(zhì)部易脫離，嚴(yán)重的木質(zhì)部呈黑色，有的根皮上有一些白色絮狀菌落，地上部分葉形變小，葉黃，枝條發(fā)育不全，有的發(fā)黃發(fā)白。

2．2病原菌在PDA上的培養(yǎng)性狀25℃恒溫培養(yǎng)條件下，病菌在PDA上形成的氣生菌絲體茂盛，呈絮狀，無色或淡黃色，培養(yǎng)皿反面無色。

2．3病菌的分生孢子形態(tài)特征及鑒定發(fā)現(xiàn)有大小型分生孢子，小型分生孢子為單胞，少數(shù)有112隔，呈卵狀、梨狀、橢圓狀；大型分生孢子為鐮刀形，1-3分隔，參照有關(guān)資料，確定為腐皮鐮刀菌[Fyusarium solani(Mart.)Sate]，半知菌亞門鐮刀菌屬，結(jié)合癥狀特征，初步確定此病害為花椒根腐病。

3討論

本次實(shí)驗(yàn)通過從枯死花椒根部分離得到的病菌與朱天輝等人的研究結(jié)果相吻合，與李智敏等記載的茄形鐮刀菌相一致，只是同物異名，在PDA上的培養(yǎng)性狀與葉鵬盛等描述的形態(tài)基本一致，由此可以初步斷定其為花椒根腐病。同時(shí)花椒根腐病又是一種土傳病害，有其自身的復(fù)雜性，由于土壤理化性質(zhì)的影響及微生物區(qū)系的龐大，往往在病原鑒定上存在較大的困難，并且F.sotani是一種腐生菌本次實(shí)驗(yàn)采用的是枯死標(biāo)本，所以難以準(zhǔn)確判斷是因?yàn)樗娜肭忠鹆酥仓甑乃劳鲞€是植株死亡之后腐生上去的，對(duì)于這個(gè)問題還有待于進(jìn)一步的研究。