甜瓜枯萎病接種方法比較試驗初報

王登明　張學(xué)軍　馮炯鑫　王葉筠　伊鴻平

摘要：分別采用灌根法、米飯粒接種法、蘸根法及胚根接種法對甜瓜枯萎病進(jìn)行接種試驗，擬為甜瓜抗病育種提供依據(jù)。結(jié)果表明：米飯粒接種法發(fā)病率最高，達(dá)到99％；胚根接種法最低，為10％；灌根法發(fā)病率為66.7％；蘸根法發(fā)病率為91％，且操作簡單、精確，最適合進(jìn)行甜瓜枯萎病抗病鑒定研究。

關(guān)鍵詞：甜瓜；枯萎?。唤臃N；蘸根法

甜瓜枯萎病是甜瓜生產(chǎn)中的主要病害之一，近年來隨著溫室、大棚等設(shè)施瓜菜生產(chǎn)的發(fā)展。該病的發(fā)生日益嚴(yán)重。并有蔓延趨勢，嚴(yán)重影響了甜瓜產(chǎn)量和品質(zhì)，使瓜農(nóng)遭受巨大經(jīng)濟損失。因該病為土傳病害，藥劑防治相對困難，并且由于長期用藥，病原菌逐漸產(chǎn)生抗藥性，防治效果日益降低，所以選育抗病品種被認(rèn)為是最經(jīng)濟、最有效的措施。為此，國內(nèi)外相繼開展了甜瓜抗枯萎病育種研究。本文初步研究了甜瓜枯萎病苗期抗性鑒定接種的幾種方法，選出了最佳的接種方法。擬為甜瓜抗枯萎病育種奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

試驗于2008年12月在海南三亞新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈密瓜研究中心科技示范園進(jìn)行。

1.1供試材料

1.1.1供試菌種甜瓜枯萎病病原菌為尖孢鐮刀菌甜瓜?；?Fusarium oxysporurrt f.sp.melonis)，在海南三亞新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技示范園分離獲得。供試甜瓜品種：金鳳凰，新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈密瓜研究中心提供。

1.1.2培養(yǎng)基(1)PDA培養(yǎng)基：200g馬鈴薯，20g葡萄糖，20g瓊脂，1000mL水；(2)米飯培養(yǎng)基：取大米10g，倒入50mL三角瓶中，加20～30mL水于121℃下滅菌25min；(3)PD培養(yǎng)液：200g馬鈴薯，20g葡萄糖，1000mL水；(4)玉米粒培養(yǎng)基：取干玉米粒若干。倒入100mL三角瓶中，加30mL水于121℃下滅菌25min。

1.2接種方法

1.2.1供試材料準(zhǔn)備將種子放置在電恒溫烘箱中，38～68℃干熱消毒2～5d。再將消毒后的干種子直接播于已消毒以椰糠和黃砂(8:1)混合物為基質(zhì)的12孔育苗盤，每孔10粒。放在28℃左右溫室大棚內(nèi)正常管理備用。

1.2.2接種體準(zhǔn)備將病原菌分別接種于盛有100mL PDA培養(yǎng)液的三角瓶、PDA平板、裝有米飯粒和玉米粒的三角瓶中，25℃下培養(yǎng)7～10d備用。

1.2.3接種方法本試驗共設(shè)3個處理，3次重復(fù)，每個重復(fù)30株。

1.2.3.1灌根接種法病原菌于PD培養(yǎng)液中振蕩培養(yǎng)7～10d，培養(yǎng)溫度25℃，培養(yǎng)液經(jīng)4層紗布過濾配成稀釋液，用血球記數(shù)板鏡檢記數(shù)孢子濃度，制備成濃度為1×10⁶個/mL孢子懸浮液用于接種。該稀釋液含有病原菌產(chǎn)生的毒素，在幼苗子葉期輕輕拔起植株并用清水沖洗根部，栽種于盛有營養(yǎng)土的育苗缽內(nèi)，每缽注入10mL稀釋液，架拱22～25℃的溫室中保濕48 h。然后在溫室內(nèi)正常管理，觀察幼苗發(fā)病情況，接種后自發(fā)病之日起，每天觀察幼苗的發(fā)病情況，共調(diào)查7d，統(tǒng)計總發(fā)病株數(shù)。

1.2.3.2米飯粒接種法在三角瓶中加少許大米粒，加水浸泡1～2min，將水倒出，121℃滅菌25min，接菌培養(yǎng)7～10d后，以1％的劑量拌入椰糠基質(zhì)中。在幼苗子葉期，輕輕拔起植株并用清水沖洗根部，栽種于盛有接菌營養(yǎng)土的育苗缽內(nèi)。架拱22～25℃的溫室中保濕48 h，然后在溫室內(nèi)正常管理，觀察病情同上。

1.2.3.3蘸根接種法用2L無菌蒸餾水洗培養(yǎng)皿上的孢子，血球記數(shù)板鏡檢記數(shù)，達(dá)到5×10⁶個/mL，幼苗子葉期輕輕拔起植株用清水沖洗根部，輕輕微傷根后在菌懸液中蘸根15min，然后定植在營養(yǎng)杯內(nèi)。架拱22～25℃的溫室中保濕48 h，然后在溫室內(nèi)正常管理，觀察病情同上。

1.2.3.4胚根接種法在三角瓶中加少許玉米粒，加水浸泡1～2min，將水倒出，121℃滅菌25min，接菌培養(yǎng)7-10d后，用無菌蒸餾水沖洗玉米粒，用血球記數(shù)板鏡檢記數(shù)孢子濃度，制備成濃度為5×10⁶個/mL孢子懸浮液，再將催好芽的種子浸泡在菌液中30min后立即播種。然后在溫室內(nèi)正常管理，觀察病情同上。

2結(jié)果與分析

試驗結(jié)果表明：4種接種方法中，采用米飯粒接種法接種發(fā)病率最高，達(dá)到99％；蘸根法接種發(fā)病率次之，為91％；灌根法接種發(fā)病率低，僅66.7％，與米飯粒接種法發(fā)病率相差32.3個百分點：而胚根接種法發(fā)病率僅為10％。4種接種方法中，米飯粒接種法潛育期最短，為3.3d，但其發(fā)病率最高；蘸根法為6.3d；灌根法為8d；胚根接種法潛育期最長，為13.7d，且發(fā)病率最低。從操作上看，胚根接種法最簡單，蘸根法也比較方便。方差分析表明，4種不同接種方法的發(fā)病率差異顯著，且米飯粒接種法、蘸根接種法與灌根接種法和胚根接種法間的差異達(dá)到極顯著水平。見表1。

3結(jié)論

研究者對甜瓜枯萎病接種方法已經(jīng)做了很多工作，本試驗第1次對甜瓜枯萎病4種接種方法進(jìn)行了比較。結(jié)果表明：(1)灌根法操作簡單，病原菌劑量最易把握，但是發(fā)病率太低、發(fā)病慢。(2)米飯粒接種法發(fā)病太快。幾乎百分之百發(fā)病，病原菌劑量不易把握，操作較復(fù)雜，且不易攪拌均勻。(3)胚根接種法基本不發(fā)病，可能是病原菌孢子濃度達(dá)不到發(fā)病的理想濃度，筆者認(rèn)為應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行濃度梯度試驗，從而驗證此方法是否適宜接種甜瓜枯萎病。(4)從試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性、試驗操作的簡便性及接種方法的效果方面綜合考慮，試驗的初步結(jié)論為采用蘸根法接種進(jìn)行甜瓜枯萎病抗病鑒定最合適。