酶抑制法檢測蔬菜有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留試驗(yàn)

王志波

（江蘇如皋市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)測試中心，226500）

酶抑制法檢測蔬菜有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留試驗(yàn)

王志波

（江蘇如皋市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)測試中心，226500）

根據(jù)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《NY/T448-2001》，利用酶抑制法和相關(guān)農(nóng)殘速測儀及配套試劑盒對江蘇如皋市主要批發(fā)市場、農(nóng)貿(mào)市場、超市的蔬菜樣品進(jìn)行了有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留檢測。檢測結(jié)果顯示，蔬菜合格率為97.7%，酶抑制法具有檢測時(shí)間短、成本低、操作簡便等特點(diǎn)，是目前我國控制農(nóng)藥殘留的一種有效的初篩方法。

農(nóng)藥殘留 速測 酶抑制

在人們廣泛關(guān)注食品質(zhì)量安全的今天，作為監(jiān)控農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的最直接有效的手段——蔬菜農(nóng)藥殘留速測技術(shù)得到迅速發(fā)展。蔬菜農(nóng)藥殘留速測法主要有酶抑制法和化學(xué)試劑速測法兩種。它們都具有快速、簡便、靈敏、成本低等特點(diǎn)，在基層監(jiān)督部門、蔬菜生產(chǎn)基地及市場得到廣泛應(yīng)用。本文根據(jù)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《NY/T448-2001》，利用酶抑制法和相關(guān)農(nóng)殘速測儀及配套試劑盒對江蘇如皋市主要批發(fā)市場、農(nóng)貿(mào)市場、超市的蔬菜樣品進(jìn)行了檢測。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

檢測儀器有RP-410速測儀，T-200型電子天平，電熱恒溫培養(yǎng)箱，可調(diào)移液槍（10～100 μL；1～5 mL），配套玻璃儀器及其他配件。

試劑配置了pH值為8的緩沖液，乙酰膽堿酯酶、底物、顯色劑粉末分別加10 mL緩沖液配置成溶液，待用。

1.2 試驗(yàn)方法

①試驗(yàn)原理 根據(jù)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制昆蟲中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酶的活性，造成神經(jīng)傳導(dǎo)乙酰膽堿的積累，影響正常傳導(dǎo)，使昆蟲中毒致死，將這一昆蟲毒理學(xué)原理，用在對農(nóng)藥殘留的檢測中。如蔬菜的提取液中不含有機(jī)磷或氨基甲酸酯類的農(nóng)藥殘留或殘留量較低，酶的活性就不會被抑制，試驗(yàn)中加入的基質(zhì)就被酶全部或部分水解，水解產(chǎn)物與加入的顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色。反之，如果蔬菜的提取液中含有一定量的有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，酶的活性就被抑制，試驗(yàn)中加入的基質(zhì)就不能被酶水解，從而不顯色或顏色變化很小，用分光光度計(jì)來測定反應(yīng)前后吸光度的變化，計(jì)算出抑制率，就可以判斷蔬菜中含有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘毒情況。

②檢測步驟 取2 g樣品（非葉菜類取4 g）切碎，放入提取瓶中，加入20 mL緩沖液，振蕩2～3 min，倒出提取液，靜止5 min，用移液槍移取3 mL提取液上清液于小試管中，加入50 μL酶，50 μL顯色劑，混勻后于37～41℃下培養(yǎng)30 min，再分別加入50 μL底物，混合后倒入比色皿中，于412 nm波長下比色。取3 mL緩沖液，其他步驟同樣品測定，得出空白試驗(yàn)，作對照。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測標(biāo)準(zhǔn)

當(dāng)抑制率＜70%時(shí)，說明基本上不存在農(nóng)藥殘留；當(dāng)抑制率≥70%，說明肯定存在有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥。抑制率一般在-10%～110%之間，一旦檢測結(jié)果超出此范圍，即說明操作過程中有失誤的地方，需要重新檢測。

表1 用酶抑制檢測法檢測青菜等蔬菜農(nóng)藥殘留結(jié)果

2.2 不同種類蔬菜農(nóng)藥殘留情況

分別對取自生產(chǎn)基地和市場的青菜、大白菜、生菜、菠菜、花菜、包菜、刀豆、豇豆、紫茄進(jìn)行檢測。檢測結(jié)果見表1。從檢測結(jié)果來看，大白菜的抑制率為97.7%，大于70%，說明大白菜中肯定存在有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥。其余樣品抑制率均小于70%，均為合格樣品。本次檢測的總體合格率為88.9%，總體情況較好。

3 小結(jié)與討論

測定值與農(nóng)藥殘留呈正相關(guān)，測定值越高，說明農(nóng)藥殘留越高。在比色測定中，酶活性愈高，吸光度值愈低。當(dāng)樣品提取液中有一定量的有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在時(shí)，酶活性受到抑制，吸光度值則較高。據(jù)此可判斷樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留情況。此外，如果樣品提取液用氧化劑氧化，則可提高某些有機(jī)磷農(nóng)藥的抑制率，因而可提高其測定靈敏度，過量的氧化劑再用還原劑還原，以免干擾測定。此方法最關(guān)鍵的試劑是膽堿酯酶，應(yīng)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)選用對甲胺磷較敏感以及活性較高的膽堿酯酶。

4 評價(jià)

酶抑制檢測法操作簡單、快速、靈敏、經(jīng)濟(jì)。該方法的研究和應(yīng)用，對市場上含有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥的蔬菜進(jìn)行初篩選，防止中毒事故發(fā)生，凈化蔬菜市場，加強(qiáng)批發(fā)市場上上市蔬菜的管理，威懾不法商販和菜農(nóng)濫用農(nóng)藥，對大量抽檢樣本快速進(jìn)行初篩，減少實(shí)驗(yàn)室儀器分析的工作量起到了較大作用，同時(shí)該方法在一定程度上可讓老百姓吃上相對安全的蔬菜。為此農(nóng)業(yè)部還專門對蔬菜上農(nóng)藥殘留快速檢測法制定了行標(biāo)，代號為NY/T448-2001，適用于葉菜類（除韭菜）、果菜類、豆菜類、瓜菜類、根菜類（除胡蘿卜、茭白等）中甲胺磷、氧化樂果、對硫磷、甲拌磷、久效磷、殺撲磷、敵敵畏、克百威等近20種高、中毒有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)殘速測。但酶抑制檢測法也有它的局限性，此方法只能檢測有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，不適合其他農(nóng)藥殘毒檢測，且不能定量檢測，所以，當(dāng)用此方法檢測出有殘毒問題的蔬菜時(shí)，如果要作為仲裁處理，應(yīng)送到有關(guān)部門進(jìn)一步用氣相色譜等儀器進(jìn)行定量和定性分析，其結(jié)果方可作為最終結(jié)論性數(shù)據(jù)。

[1]李順，紀(jì)淑娟，孫煥.酶抑制法快速檢測蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的研究現(xiàn)狀及展望[J].食品與藥品，2006，8（7）：29-30.

[2]NY/T448.2001無公害蔬菜、水果農(nóng)藥殘留檢測標(biāo)準(zhǔn)[S].

[3]裘正軍，陸江峰，何勇.基于酶抑制法的農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留快速檢測系統(tǒng)及影響因素分析[J].農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào)，2007，23（9）：229-33

[4]沈體忠，孫光忠.天門市蔬菜農(nóng)藥殘留例行監(jiān)測結(jié)果與對策思考[J].湖北植保，2006（5）：18-19.

[5]藍(lán)妮春.蔬菜農(nóng)藥殘留原因及其控制[J].廣西植保，2006，19（2）：34.

Detection Experimet of Organophosphate and Carbamate Pesticide Residues in Vegetable with Enzyme Inhibition Method

WANG Zhibo

Vegetable samples collected from wholesale markets,farmer markets,supermarkets were detected by enzyme inhibition method using pesticide residues detector coupled with reagent set according to standard (NY/T448-2001).The results showed that the pass-rate was 97.7%.The enzyme inhibition method only needs short time,low cost,simple operation,and it becomes an effective initial method for controlling pesticide residues in China nowadays.

Pesticide residues;Rapid test;Enzyme inhibition

10.3865/j.issn.1001-3547.2009.18.027

王志波（1981-），男，助理農(nóng)藝師，副主任，主要從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)測試工作，電話:13962708462。E-mail:rgwzb@126.com

2009-05-06