抗氧化片中α－硫辛酸含量測(cè)定方法研究

翁　捷　郭建平

【摘要】 目的 建立一種準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便測(cè)定抗氧化片中α-硫辛酸含量的分析方法。方法 用高效液相色譜儀對(duì)抗氧化片供試液中的α-硫辛酸進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果 該方法線性范圍：3.568 ~107.04 μg；重現(xiàn)性為RSD=2.3%；加樣回收率：98.65% (RSD=0.46%)。結(jié)論 用HPLC法測(cè)定抗氧化片中α-硫辛酸平均含量為4.77%。方法簡(jiǎn)便，重復(fù)性好。

【關(guān)鍵詞】 抗氧化片；α-硫辛酸；HPLC 法

α-硫辛酸是一種內(nèi)源性抗氧化劑，可以去除機(jī)體自由基，既溶于水又溶于脂肪，有良好的配伍性，能促進(jìn)機(jī)體利用葡萄糖合成維生素C，并且促進(jìn)合成谷胱甘肽，能有效祛除黑色素，還可協(xié)助輔酶進(jìn)行有利于機(jī)體免疫力的生理代謝^[1]。α-硫辛酸還具有抗炎作用，可抑制激酶、轉(zhuǎn)化因子、d一腫瘤壞死因子和膠原酶的活性，有抗衰老功效。國(guó)外科學(xué)家的最近研究還發(fā)現(xiàn)，從臨床角度看，α-硫辛酸對(duì)于阿爾茨海默痛有抑制效果。并且α-硫辛酸能保存和再生其他抗氧化劑。人體的保健作用來自機(jī)體產(chǎn)生和外源補(bǔ)給兩部分。由于人體自然生成量受體質(zhì)體能限制，因此外源補(bǔ)給為主要途徑^[2]。目前α-硫辛酸針劑和軟膠囊已進(jìn)入臨床試驗(yàn)。本研究是以α-硫辛酸為主要成分的口服片劑，現(xiàn)對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究?jī)?nèi)容進(jìn)行闡述。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters2487-717高效液相色譜系統(tǒng)； Milli-Q純水器；Mettler電子天平。

1.2 試藥 甲醇（江蘇漢邦科技有限公司）；醋酸（中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司）超純水（自制）；抗氧化片（自制）；α-硫辛酸對(duì)照品（江蘇同和藥業(yè)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Alltima C₁₈柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-0.1％醋酸水（54：46）；流速為1.0 ml/min；柱溫為35℃ ；波長(zhǎng)為332 nm。在此條件下對(duì)照品與樣品的HPLC圖譜見圖1。

2.2 對(duì)照品溶液的制備精密稱取干燥的α-硫辛酸對(duì)照品35.68 mg，用醋酸乙酯溶解并定容至10 ml。

2.3 供試品溶液的制備 取抗氧化片1 g，精密稱定，加醋酸乙酯20 ml，稱重，超聲提取20 min，用醋酸乙酯補(bǔ)充損失的溶劑。過0.45μm濾膜，進(jìn)樣10 μl。由于醋酸乙酯易揮發(fā)，進(jìn)樣器溫度應(yīng)控制在15℃以下，以免影響測(cè)定結(jié)果。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 取2.2項(xiàng)下濃度為3.568 mg/ml的硫辛酸對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣1、3、6、10、20、3μl。折算成統(tǒng)一進(jìn)樣體積（10μl）濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，回歸成良好的線性，方程為：Y=404 343.5X-144 752.3， r2=0.998，α-硫辛酸進(jìn)樣量在3.568 ~107.04 μg間有良好的線性。

2.5 精密度試驗(yàn) 取濃度為3.568 mg/ml的α-硫辛酸對(duì)照品溶液，進(jìn)樣10 μl，連續(xù)進(jìn)6針。RSD=1.3 %。

2.6 穩(wěn)定型試驗(yàn) 按2.3項(xiàng)下制得的供試液，每隔2 h測(cè)一次，測(cè)定12 h。RSD為0.7%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 按2.3項(xiàng)下制備供試液5份，進(jìn)樣10 μl。α-硫辛酸的平均含量為4.97%，RSD=2.3 %。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取0.5 g抗氧化片 6份，加入α-硫辛酸對(duì)照品25 mg，按2.3項(xiàng)下制備供試液，進(jìn)樣10 μl。平均回收率為98.65%。RSD=0.46%。結(jié)果見表1。

2.9 樣品測(cè)定結(jié)果 按2.3項(xiàng)下處理，測(cè)定，結(jié)果見表2。

3 討論

抗氧化片由α-硫辛酸、葡萄籽提取物等組方而成，具有清除自由基和活性氧作用。作為處方中的以α-硫辛酸作為質(zhì)量控制指標(biāo)最合理。以不同比例的甲醇、水為流動(dòng)相時(shí)，α-硫辛酸在C18柱上均不保留，改為0.1％醋酸水和甲醇不同比例洗脫時(shí)，α-硫辛酸出峰時(shí)間為16.649 min。以甲醇為提取溶劑時(shí)，α-硫辛酸色譜峰分離度較差，且用大孔樹脂及聚酰氨柱均不能改善，選用醋酸乙酯為提取溶媒時(shí)，色譜峰分離度好，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確。

參考文獻(xiàn)

［1］ 劉俊棟，劉海霞，李建基，等. 生物抗氧化劑- 硫辛酸的研究.飼料工業(yè)，2005：26（2）：14-17.

［2］ 劉紅林，牛勃，常冰梅，等. 硫辛酸與維生素C和維生素E的抗氧化作用比較.中國(guó)藥物與臨床,2005，1(5):37.