中藥抗真菌研究進展

伍　迪　李　杰

關鍵詞：中藥；抗真菌；作用機制；綜述

中圖分類號：R285.6文獻標識碼：A

文章編號：1007--2349(2009)09--0068--03

近年來，由于許多因素的影響，諸如廣譜抗生素、糖皮質(zhì)類固醇、免疫抑制劑、抗腫瘤藥的大量應用，以及艾滋病患者的劇增等，使真菌病的發(fā)病率日益增大，其中深部真菌感染的發(fā)病率增加了40倍。尋找廣譜、高效、低毒的抗真菌藥物已成為國內(nèi)外研究的熱點。從20世紀20年代開始，我國研究者從中藥中尋找抗真菌藥物，進行了化學及藥理研究，至今已發(fā)現(xiàn)300余種中藥具有抗真菌活性。研究范圍從單味中藥發(fā)展到復方，研究和探索抗真菌中藥的有效成分及作用機理等，為發(fā)現(xiàn)和研制抗真菌藥物提供有利的線索和理論依據(jù)。目前中藥抗真菌有效成分的提取主要有水煎劑，乙醇、乙醚、稀醋酸等的浸出制劑。另外研究中藥對病原菌的體外抑菌活性試驗方法很多，一般采用的方法有管碟法、固體培養(yǎng)基法、紙片抑菌法、平皿稀釋法以及平板打孔擴散法等，它們通常只用于對中藥的抑菌活性作定性研究；定量分析常用二倍稀釋法。本文就近年中藥抗真菌的研究綜述如下。

1單味中藥實驗研究

楊風琴等采用試管藥基稀釋法，測定8種中草藥對8種致性病淺部真菌的最小抑菌濃度(MIC)。結果8種中草藥提取物對石膏樣毛癬菌、石膏樣小孢子菌、紅色毛癬菌等有不同程度的抑菌作用，其中尤以白頭翁、公丁香抗菌作用顯著，其平均MIC為10.10％、10.63％。王理達等采用顯微鏡直接計數(shù)法和MTT法測定了黃柏等13種生藥醇提物的抗真菌研究，結果發(fā)現(xiàn)黃柏、丁香、烏梅等有強烈抑制真菌活性作用。謝水祥等采用菌落計數(shù)法對20種中藥進行實驗，結果發(fā)現(xiàn)知母、地膚予、苦參、黃連等9種藥物，有明顯抑制絮狀表皮癬菌的生長作用。王吳等采用淺部真菌接種菌量的計數(shù)，觀察丹參、苦參、蛇床子等10種中草藥對8種致病性淺部真菌的抑菌實驗及MIC測定，其中茵陳、黃連、胡黃連、白頭翁水提物在5％的濃度即對部分淺部真菌產(chǎn)生抑制作用；在國內(nèi)首次測定了蛇床子、胡黃連、白頭翁的平均MIC，其中白頭翁的平均MIC為9.38％。宮毓靜等發(fā)現(xiàn)牡丹皮、土槿皮等22種中藥對一種或幾種真菌有較強抑制作用?，F(xiàn)從藥典收錄的植物類抗真菌中藥統(tǒng)計寒味藥多，甘昧藥較少，多歸膽經(jīng)。1995年～2004年近10年來，我國學者對187味中草藥進行了抗真菌作用研究。其中具有殺滅真菌作用的77味，有明顯抗真菌作用的44味，抗真菌作用微弱的41味，抗真菌作用不確定的5味，無抗真菌作用的20味。

2復方中藥抗真菌的實驗研究

由于中藥復方組方復雜多樣，有效成分難確定，抗菌研究相對困難，大多數(shù)作用機制尚不清楚，有些方劑中的單味藥無明顯的抗真菌活性，但復方卻呈現(xiàn)一定的療效。如姜欣等m發(fā)現(xiàn)對于免疫功能下降的白色念珠菌感染動物模型，抗真菌藥物與補中益氣湯配伍用的存活率顯著高于單獨使用抗真菌藥物組，復方并無明顯抗真菌作用，而是通過改善機體免疫力而協(xié)助抗真菌。徐洪波對藿黃散洗劑進行了體外及體內(nèi)實驗室研究，結果發(fā)現(xiàn)藿黃散洗劑對須癬毛癬菌、犬小孢子菌、絮狀表皮癬菌和紅色毛癬菌的MIC分別為31.2、15.6、15.6、15.6mg／mL，動物模型實驗有效，顯著改善癥狀。陳華萍等采用試管法對龍風潔身純、易舒特洗劑、膚陰潔、潔爾陰洗液4種中藥洗劑進行體外抑菌實驗，結果表明對白色念珠菌有抑制作用。張尊祥掣選用楮葉、苦參、黃柏、露蜂房、蛇床子等組成“鐵扇癬癢平”；采用對倍液體稀釋法測定該藥對金紅色毛癬菌、紫色毛癬菌、須毛癬菌和石膏樣小孢子菌體外抑制作用，結果該藥對真菌均有抑制作用。楊志波等對枯礬、明礬為主的復方進行體外抑菌實驗，結果復方二礬對石膏樣毛癬菌、石膏樣小孢子菌、紅色毛癬菌的MIC：0.25％、0.5％、0.5％。隋芝芹等以苦參、甘草為主進行了抗真菌試驗，結果表明苦甘洗劑對淺部真菌有抑制作用。范瑞強等以丁香、藿香為主復方，對紅色毛癬菌、白色念珠菌等的抗菌研究，結果該藥有抗菌作用。謝淑霞等報道祛癬洗劑對我國南方常見的9種致病真菌均有抑制作用，其最小抑菌濃度在6.25％～50％之間，對癬菌的抑制作用優(yōu)于對白念珠菌。復方苦槿霜對部分常見皮膚致病真菌(紅色毛癬菌、石膏樣毛癬菌、絮狀表皮癬菌、犬小孢子癬菌)有抑制作用。10％和20％復方苦槿霜抑菌效果與達克寧相當(P<0.05)。曾勇等采用紙砂法造成豚鼠體癬模型，觀察消炎抗癬霜對其局部病變程度、真菌鏡檢和培養(yǎng)轉陰率的影響，研究消炎抗癬霜對石膏樣小孢子菌、石膏樣毛癬菌導致的豚鼠體癬模型的治療作用，結果消炎抗癬霜能夠減輕真菌所致豚鼠皮膚病變程度，提高真菌鏡檢和真菌培養(yǎng)的轉陰率。

3中藥抗真菌有效成分的實驗研究

隨著提取、分離和結構鑒定技術的迅速發(fā)展，在中草藥中尋找有效抗真菌成分近年來取得一定的成就。從研究發(fā)現(xiàn)中藥抗真菌的有效成分主要有萜類、揮發(fā)油、醛類、酮類、皂苷、脂肪類化合物等。王淑芳等從莪術的干燥根莖研究中發(fā)現(xiàn)羥基類廣譜抗真菌成分，在小于50μg／mL的濃度下即可抑制常見皮膚癬菌和某些深部感染真菌的繁殖生長。楊得坡發(fā)現(xiàn)廣藿香揮發(fā)油對12種皮膚癬菌有抑制作用，最低抑制濃度(MIC)50～400μL／L。張廣文等發(fā)現(xiàn)藿香精油等有很強的抗真菌活性，對常見皮膚癬菌及煙曲霉等18種深部致病真菌有抑制作用。付愛華等報道東北刺人參揮發(fā)油(醇類、醛類、酯類和萜類)有很強的抗真菌活性，對紅色毛癬菌、犬小孢子菌、須癬毛癬菌、紫色毛癬菌、斷發(fā)毛癬菌等常見皮膚癬菌有抑菌和殺菌作用，MIC為0.0625％～0.125％，MFC為0.125％～0.25％。江濤等婦采用試管內(nèi)藥基法進行實驗及電鏡觀察，對22種中草藥有效成分進行抗真菌研究，結果發(fā)現(xiàn)β—松油烯、松油烯—4醇、二氫姜黃酮、姜黃醇、桉葉醇、檸檬醛、丁香酚具有強抗真菌作用(MIC10～0.09μg／mL)，小檗堿、黃芩苷、苦參堿、大黃酚、丹皮酚、丹參酮抗真菌作用亦較強(MIC50～10μg／mL)。盧瑞芳等發(fā)現(xiàn)大蒜素具有很好的抑制真菌作用，采用試管稀釋法測定MIC及MBC。

4中藥抗真菌的機理研究

由于中藥成分復雜，所以對抗真菌的機理尚不十分清楚，研究認為中藥對真菌的作用機理主要在于對真菌細胞壁、細胞膜的作用；對真菌細胞核酸、蛋白質(zhì)的作用；對細胞能量代謝及一些其他作用如干擾真菌對物質(zhì)的吸收及攝取等。目前大多數(shù)是通過電鏡觀察或其他方法而間接得知，如江濤等從細胞、亞細胞水平觀察抗真菌機制，經(jīng)過電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，經(jīng)抗真菌有效成分(β—松油烯、松油烯—4醇、二氫姜黃酮、姜黃醇、桉葉醇、檸檬醛、丁香酚)作用后紅色毛癬菌細胞有明顯改變：細胞膜明顯皺縮，細胞器及細胞核消失，細胞漿被電子薄區(qū)占據(jù)。張文娟對肉桂醛的抗黃曲霉作用及超

微結構的研究中發(fā)現(xiàn)，肉桂醛有明顯的抗黃曲霉作用，主要通過破壞真菌細胞壁，使藥物滲入菌細胞內(nèi)，破壞細胞器而起強大的殺菌作用。宋軍等利用電鏡也觀察到，檸檬醛首先通過改變膜的通透性損傷質(zhì)膜進入細胞，進入細胞后，與DNA相互作用，使DNA產(chǎn)生不可逆損傷。透射電鏡下所見也進一步證明，丁香作用部分在細胞膜。羅東輝等通過電鏡觀察到，肉桂醛和茴香醛對糠秕孢子菌損傷發(fā)生在芽孢形成的某一階段，芽孢是最薄弱的靶位。李大寧等用流式細胞儀測定了3種中藥活性成分(小檗堿、黃芩苷、丁香酚)對白念菌DNA合成周期的影響，發(fā)現(xiàn)隨著藥物濃度升高，白念菌處于S～G2～M期的細胞比例呈降低趨勢，即細胞分裂受到抑制，并發(fā)現(xiàn)藥物處理后的細胞熒光強度減弱，表明DNA含量的減少。葉元康認為大蒜可通過氧化蛋白質(zhì)巰基使蛋白質(zhì)滅活，與含巰基的化合物競爭或非競爭地抑制某些酶而影響真菌的代謝。白玫等用3H～TdR滲入法實驗發(fā)現(xiàn)茴香醛對白色念珠菌核酸代謝有顯著的抑制作用，與濃度成正比。羅曼等應用單細胞凝膠電泳與顯微多道分光光度圖象分析系統(tǒng)證明檸橡醛引起黃曲霉DNA斷裂，并使黃曲霉質(zhì)膜和線粒體超微結構和功能改變。由于真菌本身是一復雜的有機體，對中藥活性成分的反應可能是復雜的且多方面的。因此今后對中藥抗真菌機理的研究，不應只停留在電鏡觀察細胞超微結構變化上和對真菌的宏觀影響上，應更加細致地研究中藥活性成分是如何作用于這些細胞結構而使其發(fā)生改變結合現(xiàn)代科學技術，采用一些先進的生物技術分離有關酶基因，來揭示中藥的抗真菌作用機理。

5問題及展望

近年來，中藥復方、單味藥以及有效成分抗菌的研究等都取得了一定的成果，但從整體來看，依然有許多的不足之處，如實驗研究方法未能統(tǒng)一，實驗條件尚無統(tǒng)一標準，使出現(xiàn)的實驗結果差異較大；大多數(shù)抗真菌中藥的實驗研究都是進行體外研究，研究手段多停留于形態(tài)學層面，對體內(nèi)和深部真菌研究較少，抗菌作用機制研究不夠深入等。今后研究的重點應建立中草藥抗真菌作用的篩選標準，使研究更加統(tǒng)一和規(guī)范；隨著深部真菌感染患者的增多，加強抗深部感染真菌中藥研究；抗真菌中藥復方研究及利用動物真菌性疾病模型進行體內(nèi)研究；分離確認中藥有效成分，進而對有效成分進行抗真菌機制研究；充分應用現(xiàn)代先進的科學技術方法進行中藥研究，將有助于開發(fā)抗真菌新藥及指導臨床。