氣血康口服液質(zhì)量標準研究

康紹建　陳陽友　杜利云　楊文芬

摘要：目的：建立氣血康口服液質(zhì)量標準。方法：定性鑒別采用薄層色譜法；含量測定采用高效液相色譜法。結(jié)果：薄層色譜鑒別(1)：原標準為人參皂苷Rg₁的鑒別，新標準增加人參皂苷Rb₁、三七皂苷R₁及黃芪甲苷的鑒別，經(jīng)驗證未見干擾；薄層色譜鑒別(2)為新增項目，粉葛薄層色譜鑒別以葛根素為對照，經(jīng)驗證未見干擾；含量測定色譜條件：采用漢邦(4.6×250mm，5μm)G8色譜柱，流動相：乙腈—水(19:81)；檢測波長為203nm；柱溫30℃流速1mL／min。人參皂苷Rg₁進樣量在0.678μg～10.17μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系；回歸方程y＝279.47x—27.716(r=1.000)，人參皂苷Rg₁的平均回收率為97.54％，RSD=2.37％。結(jié)論：薄層色譜鑒別和含量測定方法操作簡便，準確，重現(xiàn)性好，可用于控制氣血康口服液質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：氣血康口服液；薄層色譜鑒別；HPLC，

中圖分類號：R286.0文獻標識碼：A

文章編號：1007—2349(2009)09—0061—03

氣血康口服液(原名為復(fù)方三七口服液)具有抗衰老，扶正培本，益氣強心，健脾固本，滋陰潤燥，生津止咳；并有提高機體免疫力，升高白細胞和血色素的作用。原為提高國家藥品標準行動計劃品種，后確認為2010年版《中國藥典》收載品種。根據(jù)國家藥品標準提高行動計劃任務(wù)表要求：鑒別：增加葛根、黃芪、人參、三七的TLC鑒別；含量測定：增加三七的含量測定；本次標準修訂的薄層色譜鑒別、新增薄層色譜鑒別項及新增含量測定均符合要求，可作為質(zhì)量控制指標。

1儀器與試藥

高效液相色譜儀：島津2010A，色譜柱：漢邦(4.6×250mm，5μm)C₁₈色譜柱；液相溶劑用水為純凈水經(jīng)0.45／μm微孔濾膜濾過，乙腈為色譜純，其他均為分析純；人參皂苷Rg₁對照品(110703—200726)含量測定用，按97.7％計、人參皂苷Rb₁對照品(110704—200420)、三七皂苷R₁對照品(110745—200415))、黃芪甲苷對照品(0781—200109)、葛根素對照品(752—200108)均購于中國藥品生物制品檢定所；氣血康口服液：由云南白藥集團文山七花有限責(zé)任公司提供(批號：20080701、20080702、20080703)；氣血康口服液薄層色譜鑒別空白陰性試樣(缺三七、人參；缺黃芪；缺葛根)和含量測定空白陰性試樣(缺三七、人參)：均由云南白藥集團文山七花有限責(zé)任公司提供。

2實驗方法及結(jié)果

2，1薄層色譜鑒別取本品20mL，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸至近干，加乙醇25mL溫浸，濾過，濾液蒸干，殘渣加水25mL使溶解，移入分液漏斗中，用正丁醇提取3次，每次10mL(勿劇烈振搖以免乳化)，合并正丁醇液，用水洗2次，每次10mL，棄去水液，加氨試液25mL振搖提取，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。同法制得缺三七、人參和缺黃芪的陰性對照樣品；另取人參皂苷Rg₁、人參皂苷Rb₁、三七皂苷R₁及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗，吸取上述溶液各1～3μL，分別點于同一高效硅膠H薄層板上，以三氯甲烷—甲醇—水(13:7:2)10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。色譜圖見圖1～圖2。

2，2薄層色譜鑒別取本品20mL，用乙酸乙酯提取3次，每次20mL，合并乙酸乙酯提取液置蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。同法制得缺葛根的陰性對照樣品；另取葛根素對照品，加甲醇制成1mL含1，5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗，吸取上述溶液各1μL～3μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷—甲醇—水(7:2.5:0.25)為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。色譜圖見圖3。

2，2氣血康口服液的含量測定2，2，1系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相：乙腈—水(19:81)；檢測波長：203nm；理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg₁峰計算，應(yīng)不低于3000。2，2，2對照品溶液及供試品溶液的制備對照品溶液制備取人參皂苷Rg₁對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含人參皂苷Rg₁對照品0.7mg溶液，搖勻，即得。

供試品溶液制備取本品約30mL，混勻，濾過，精密量取10mL于分液漏斗中，用水飽和正丁醇10mL、10mL、10mL提取3次，合并正丁醇液，用氨試液5mL、5mL洗滌2次，收集正丁醇液水浴蒸干，殘渣用適量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。2，2，3測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，測定，即得。色譜圖見圖4和圖5。2，2，3陰性對照試驗陰性對照樣品溶液的制備取處方中除三七、人參外的其他藥味，按處方劑量及制法和工藝要求制備缺三七、人參陰性對照樣品溶液。照試驗所得方法進行測定，結(jié)果表明，在與人參皂苷Rg₁對照品相同的保留時間位置，未見干擾峰出現(xiàn)，表明處方中其他藥材和輔料對人參皂苷Rg₁的測定無干擾。與供試品溶液對照，未見明顯峰缺失。見液相色譜圖6。2，2，4線性關(guān)系考察

精密稱取人參皂苷Ra對照品6，78mg，置10mL量瓶中，加流動相溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，吸取對照品溶液1、2、5、10、15μl進樣按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積積分值(mAuXs)為縱坐標，進樣量(μg)為橫坐標繪制標準曲線，計算回歸方程：y＝279.47x一27.716，r＝1。結(jié)果表明人參皂苷Rg₁進樣量在0.678μg～10.17μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。符合要求。2，2，5精密度試驗精密吸取人參皂苷Rg₁對照品溶液(0.6829mg／mL)各10μL，按試驗所得方法重復(fù)進樣5次，測

定峰面積值。各次測得的峰面積值分別是2683159、2682968、2686880、2641316、2639333，平均值為2666731，RSD為0.91％，符合要求。2，2，6重復(fù)性試驗取批號為20080701的氣血康口服液6份，按試驗所得方法試驗，測得樣品峰面積并計算含量，試驗結(jié)果表明：RSD為0.72％，符合要求。2，2，7穩(wěn)定性試驗取對照品溶液及供試品溶液，分別于0、1、2、4、6、8h測定6次，以峰面積計算RSD值，對照品溶液峰面積RSD為1.81％，供試品溶液峰面積RSD為1.82％；結(jié)果表明對照品及供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。2，2，8加樣回收率試驗采取全程加樣法。取已知含量的供試品(批號：20080701，人參皂苷Ra含量0.6267mg／mL)6份，每份5mL,精密加入人參皂苷Rg₁對照品溶液(0.5082mg／mL)各5mL，按試驗所得方法試驗，試驗結(jié)果表明，本方法回收率在95％～105％之間，平均回收率為97.54％，RSD為2.37％，符合要求。2，2，9樣品含量測定取氣血康口服液3批樣品，按試驗所得方法試驗，測定人參皂苷Rg₁含量，每批3次。結(jié)果見表1。

3討論

原部頒標準中藥成方制劑第十三冊WS3--B--2573--97中無[含量測定]項，根據(jù)氣血康口服液的處方，選擇方中的三七、人參中的有效成分人參皂苷Rg₁為含量測定指標。最初擬選擇三七皂苷R₁、人參皂苷Rg₁、Re、Rb₁作為含量測定指標成分，通過試驗發(fā)現(xiàn)，在15cm C₁₈柱上，用乙腈一水的不同梯度洗脫均難以使這幾種成分完全分離；在25cm C₁₈柱上，用乙腈—水(0--35min，19：81；35—55min，29:71；55--70min，29:71；70—100min，40:60)梯度洗脫可以將幾種成分分開，但人參皂Rb₁：出峰時間在80min右左，這樣不適用大生產(chǎn)中--產(chǎn)品質(zhì)量控制，且處方中三七、人參、黃芪均含類似物質(zhì)，測定時相互干擾大，供試品溶液中三七皂苷R₁、人參皂苷Re含量低，若作控制產(chǎn)品質(zhì)量的指標也起不了太大的現(xiàn)實意義。因此結(jié)合以上這些實際情況，最終放棄進行多組分測定，選擇耗時短、分離較好的人參皂苷Rg,為氣血康口服液含量測定指標性成分。對氣血康口服液中人參皂苷Rg₁含量測定的分析方法驗證結(jié)果表明，該測定方法簡便、準確、可行。