結(jié)直腸癌中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)研究進(jìn)展

賈棟，陳順，解有成，康殷楠，趙寶銀，仵朝暉，王俊科，于曉輝

（1.中國人民解放軍聯(lián)勤保障部隊第九四〇醫(yī)院 消化內(nèi)科，甘肅 蘭州 730050；2.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000）

中性粒細(xì)胞作為固有免疫中最重要的免疫細(xì)胞之一，同時也是機體抵御外界微生物的第一道防線，可通過吞噬及脫顆粒作用介導(dǎo)抗菌活性，從而進(jìn)行免疫防御，殺滅病原體。此外，活化的中性粒細(xì)胞還可向胞外釋放一種由解聚的DNA 染色質(zhì)和多種顆粒蛋白構(gòu)成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物，即中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)（neutrophil extracellular traps，NETs），可捕獲病原微生物并分泌抗菌蛋白對其殺滅，是一種先天性免疫胞外防御機制，但過度激活的NETs 可進(jìn)一步級聯(lián)炎癥反應(yīng)。近年來已證實NETs 與自身免疫性疾病、糖尿病、心血管疾病、癌癥等多種非感染性疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。大量動物模型和腫瘤患者研究表明，NETs 形成參與結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）進(jìn)展和轉(zhuǎn)移。筆者就CRC 的NETs 相關(guān)研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，旨在為深入理解CRC 發(fā)生發(fā)展過程提供新依據(jù)。

1 NETs的基本結(jié)構(gòu)及形成機制

1996年，Takei 等[1]首次發(fā)現(xiàn)中性粒細(xì)胞在佛波酯（phorbol myristate acetate，PMA） 的刺激下，出現(xiàn)分葉核解聚，核膜及細(xì)胞膜破裂等特殊的死亡形態(tài)變化。隨后Brinkmann 等[2]通過進(jìn)一步的驗證，將這種不同于細(xì)胞凋亡和壞死的新型特異性細(xì)胞死亡方式定義為NETs，NETs 由去聚化的染色質(zhì)DNA 為骨架，其中鑲嵌多種活性蛋白，包括組蛋白、組織蛋白酶G（cathepsin G，CG）、中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶（neutrophil elastase，NE）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9，MMP-9）、髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）、防御素、抗菌肽LL-37 等30 多種蛋白和酶，可以固定病原體并將其暴露于局部高致死性濃度的效應(yīng)蛋白。在高分辨率掃描電鏡觀察下，NETs 表現(xiàn)為一種獨特的超微機構(gòu)，由直徑約為15～17 nm 的平滑的核染色質(zhì)纖維和直徑為25～50 nm 的球形結(jié)構(gòu)域組成。

中性粒細(xì)胞產(chǎn)生NETs 的過程被稱為NETosis，其過程受到多種通路和機制的調(diào)節(jié)，可由多種刺激物激活產(chǎn)生，如病毒、真菌、細(xì)菌及其細(xì)胞壁成分、免疫復(fù)合物、細(xì)胞因子和趨化因子等。如圖1 所示，NETosis 主要有兩種形成方式：細(xì)胞溶解性NETs 和活性NETs，前者過程發(fā)生較慢，一般需要2～6 h，具體為中性粒細(xì)胞在受到PMA 等炎癥或化學(xué)刺激后，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的鈣離子釋放進(jìn)入胞漿，激活并通過PKC/Raf-MERK-ERK 信號通路活化非煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH） 氧化酶[3]，從而引起活性氧（reactive oxygen species，ROS）的釋放[4]，隨后胞漿內(nèi)的NE 和MPO 轉(zhuǎn)運入核，降解組蛋白并促進(jìn)染色質(zhì)去濃縮。另外，活化的肽?；彼崦搧啺泵? （peptidyl arginine deaminase 4，PAD4）對組蛋白起到翻譯后修飾的作用，介導(dǎo)組蛋白H3瓜氨酸化，減少組蛋白與DNA 之間的靜電引力[5]，進(jìn)一步導(dǎo)致染色質(zhì)解聚，胞內(nèi)容物釋放到胞外形成NETs。后者又稱為活體式NETs[6]，NETs 可自發(fā)產(chǎn)生，一般只耗時5～60 min，不依賴NADPH 氧化酶及誘導(dǎo)產(chǎn)生的ROS，但需要Toll 樣受體（Tolllike receptor，TLR）或補體受體對相關(guān)感染性刺激的識別，同樣被激活的PAD4 觸發(fā)組蛋白瓜氨酸化，致使染色質(zhì)解聚，被包裹的染色質(zhì)DNA 以囊泡出芽的方式排出胞外，過程中細(xì)胞核膜和細(xì)胞膜保持完整，中性粒細(xì)胞存活時間及吞噬、趨化等功能均未受影響。

2 NETs參與CRC的發(fā)生發(fā)展

CRC 是一類高危惡性腫瘤，每年約有190 萬新發(fā)病例和超過93 萬的死亡病例，是全球癌癥相關(guān)死亡的第二大原因[7]，具有高復(fù)發(fā)、高轉(zhuǎn)移等特性。盡管目前在CRC 的診治方面已有較大突破，尤其是新輔助放化療及免疫治療領(lǐng)域的快速發(fā)展，然而仍有近一半的CRC 患者最終會出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，晚期患者5年相對生存率僅為14%[8-9]。故進(jìn)一步了解CRC 惡化機制，發(fā)掘更為有效的潛在治療靶點是目前亟待解決的問題。近年來研究發(fā)現(xiàn)NETs 在胃、肺、肝、乳腺、胰腺等多種惡性腫瘤中異常高表達(dá)[10-13]，且NETs 異常程度與腫瘤進(jìn)展、患者預(yù)后密切相關(guān)。大量研究結(jié)果提示，NETs 及其組分可通過系列途徑促進(jìn)CRC 的發(fā)生和發(fā)展。

2013年，Berger-Achituv 等[14]首次在尤文肉瘤中檢測發(fā)現(xiàn)NETs，并發(fā)現(xiàn)NETs 在腫瘤組織中高表達(dá)并與患者的不良預(yù)后有關(guān)，Yang 等[15]通過與健康個體對比發(fā)現(xiàn)CRC 患者體內(nèi)NETs 水平也呈顯著性升高，且NETs 水平與腫瘤復(fù)發(fā)及術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生呈正相關(guān)。Yazdani 等[16]對27 例CRC 肝轉(zhuǎn)移患者行組織病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中性粒細(xì)胞和NETs 水平顯著增加，且瓜氨酸化組蛋白3（citrullinated histone 3，CitH3） 和MPO DNA 水平也呈一致性升高，而NETs 與其組分的升高也被證實和患者預(yù)后不良相關(guān)。除此之外，中性粒細(xì)胞及其NETs 在腫瘤組織上的密度和分布也存在顯著差異，Arelaki 等[17]分析10 例CRC 患者的腫瘤組織和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織發(fā)現(xiàn)NETs 數(shù)量從腫瘤中心到邊緣組織逐漸減少，這反映了腫瘤病變引發(fā)并逐漸擴散到周圍組織的炎癥梯度，可為外科醫(yī)師對手術(shù)切緣的選擇提供一定的幫助。NETs 可參與腫瘤誘導(dǎo)的全身效應(yīng)，同時腫瘤細(xì)胞及腫瘤相關(guān)微環(huán)境（tumor microenvironment，TME）也可以通過多種方式促進(jìn)NETs 的形成。在CRC 組織和腺瘤、增生性息肉等癌前病變組織中，檢測到共表達(dá)多聚磷酸鹽（polyphosphate，polyP） 和CD68+的肥大細(xì)胞和NETs 的形成，polyP 主要由血小板釋放，可介導(dǎo)炎癥反應(yīng)促進(jìn)血栓的形成，而在本研究中表達(dá)CD68+的肥大細(xì)胞可以通過polyP 與中性粒細(xì)胞發(fā)生相互作用，進(jìn)而誘導(dǎo)NETs 的產(chǎn)生[18]。另外，腫瘤細(xì)胞還可產(chǎn)生大量的趨化因子IL-8 誘發(fā)NETs 的形成并促進(jìn)癌癥的進(jìn)展[19]，其中CXC 趨化因子受體（CXC chemokine receptor，CXCR）是其形成過程中的重要媒介[20]，在CRC 的不同階段中也觀察到血清IL-8 及CXCR2 的表達(dá)水平均較正常組顯著升高[15]。另有研究人員[21]在彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤中證實，IL-8 與中性粒細(xì)胞上的CXCR2 相結(jié)合，通過激活Src、p38 及ERK 信號通路而加速NETs 的產(chǎn)生。Shang 等[22]發(fā)現(xiàn)CRC 中突變的致癌基因KRAS可通過外泌體將其轉(zhuǎn)移至中性粒細(xì)胞，進(jìn)而觸發(fā)IL-8 的上調(diào)而引起NETs 的形成。此外，Wang 等[23]在經(jīng)脂多糖（lipopolysaccharide，LPS） 刺激后的CRC 小鼠模型中發(fā)現(xiàn)，CRC 細(xì)胞可通過Toll 樣受體9 （Toll-like receptor 9，TLR9） 和絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信號通路介導(dǎo)NETs 的形成。以上可見，NETs 在CRC中高表達(dá)，且CRC 細(xì)胞及其微環(huán)境可通過多種途徑調(diào)節(jié)NETs 的形成。

Yazdani 等[16]證實活化的CRC 細(xì)胞能夠釋放損傷相關(guān)分子模式 （damage associated molecular pattern，DAMP） 蛋白，可將中性粒細(xì)胞募集到TME 中并誘導(dǎo)NETs 形成，NETs 則可通過增強線粒體的生物合成，加速CRC 細(xì)胞的生長和增殖，其具體機制為NETs 釋放NE 激活癌細(xì)胞上的Toll 樣受體4（Toll-like receptor 4，TLR4），通過p38 通路引起與能量代謝相關(guān)的轉(zhuǎn)錄共激活因子PGC-1α 的表達(dá)增加，進(jìn)而調(diào)控線粒體的生物合成，增加能量產(chǎn)生而加速腫瘤的生長。在小鼠模型中阻止NETs的形成可觀察到CRC 的生長速度明顯減緩。此外，有研究[24]發(fā)現(xiàn)NETs 來源的DNA 可與晚期糖基化終末產(chǎn)物受體RAGE 相結(jié)合，通過激活胰腺星狀細(xì)胞使纖維化基質(zhì)形成增加，促進(jìn)胰腺腫瘤的生長和增殖。Albrengues 等[25]還發(fā)現(xiàn)機體炎癥狀態(tài)誘導(dǎo)產(chǎn)生的NETs 可激活休眠期的乳腺癌細(xì)胞，使其進(jìn)入G1期并開始增殖。研究人員在小鼠乳腺癌[26]及胰腺癌[24]模型中通過敲除PAD4 而抑制NETs 形成后，發(fā)現(xiàn)其腫瘤生長速度明顯降低。以上可見，NETs的產(chǎn)生與腫瘤的生長和增殖密切相關(guān)，除此之外，NETs 亦可通過捕獲循環(huán)腫瘤細(xì)胞（circulating tumor cell，CTC）、誘導(dǎo)侵襲、促進(jìn)血管生成、逃避免疫等系列途徑引起CRC 的轉(zhuǎn)移和擴散。

對CRC 患者的組織樣本的免疫染色顯示，原發(fā)腫瘤組織及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中均存在NETs[17]。Yang等[15]還發(fā)現(xiàn)無論CRC 是否發(fā)生轉(zhuǎn)移，其原發(fā)灶的NETs 水平并沒有顯著差異，而通過對CRC 的肝轉(zhuǎn)移灶和原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織對比發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)移性肝腫瘤中的NETs 數(shù)量明顯高于原發(fā)性肝腫瘤，表明NETs 與CRC 患者肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生密切相關(guān)，NETs 可能在即將轉(zhuǎn)移的靶器官中發(fā)揮更重要的作用以促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)生。在CRC 中廣泛形成的NETs 可捕獲CTC，并使其黏附于肺和肝臟等相應(yīng)靶器官而促成轉(zhuǎn)移，通過多種措施消耗或抑制NETs 的形成，可發(fā)現(xiàn)其侵襲轉(zhuǎn)移能力明顯下降，證實靶向治療NETs 可有效限制腫瘤轉(zhuǎn)移。肝臟是CRC 發(fā)生轉(zhuǎn)移最主要的靶器官，目前手術(shù)切除肝轉(zhuǎn)移灶仍是CRC 轉(zhuǎn)移患者有效且可能獲得長期生存的唯一治療方法[27]，但患者極易在術(shù)后出現(xiàn)復(fù)發(fā)[28]。Tohme 等[29]報道肝切除術(shù)可能會導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞脫落，使CTC 水平升高，另外，手術(shù)應(yīng)激可誘導(dǎo)肝臟發(fā)生缺血再灌注損傷，使NETs 在肝臟內(nèi)大量沉積，NETs 通過加強CTC 的黏附能力來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞 的 播 散 ，使 用 脫 氧 核 糖 核 酸 酶 I（deoxyribonuclease I，DNase I）或PAD4 抑制劑抑制NETs 的形成可有效減緩這一進(jìn)程，進(jìn)一步在體外研究中發(fā)現(xiàn)NETs 是通過釋放高遷移率族蛋白B1（high mobility group protein B1，HMGB1），從而激活癌細(xì)胞中的TLR9 信號通路發(fā)揮其促瘤作用。Carroll 等[30]也證明CRC 術(shù)后相關(guān)的全身性炎癥反應(yīng)或膿毒癥可誘導(dǎo)釋放NETs 而增加腫瘤復(fù)發(fā)的風(fēng)險。另外Rayes 等[31]發(fā)現(xiàn)在非炎癥和感染情況下，原發(fā)性的CRC 細(xì)胞也可誘發(fā)NETs 捕獲CTC 并促進(jìn)其黏附和轉(zhuǎn)移。最新研究[32]表明細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK）是NETs 誘導(dǎo)CRC 細(xì)胞遷移的重要調(diào)節(jié)因子，NETosis 過程中釋放的NE 通過激活ERK 發(fā)揮促瘤作用，在小鼠模型中使用西維來司他抑制NE 可有效減少CRC 轉(zhuǎn)移灶的形成。Rayes 等[33]發(fā)現(xiàn)NETs 上的癌胚抗原細(xì)胞黏附分子1（carcino-embryonic antigen related cellular adhesion molecule 1，CEACAM1）也是介導(dǎo)CRC 細(xì)胞與NETs 相互作用的重要黏附分子，并在小鼠CRC 細(xì)胞與肝臟的黏附中起關(guān)鍵作用。此外，NETs 并非隨機捕獲CTC，而是可能與癌細(xì)胞表面的某種蛋白產(chǎn)生了特異性結(jié)合，且這種結(jié)合對于NETs 促進(jìn)CRC 轉(zhuǎn)移至關(guān)重要，Yang 等[34]通過研究證明癌細(xì)胞表面存在一種跨膜蛋白CCDC25，可有效感知NETs DNA 并通過CCDC25 胞外的AA21-25 區(qū)域與NETs DNA 高特異性結(jié)合，進(jìn)而觸發(fā)ILK-β-parvin-RAC1-CDC42 級聯(lián)反應(yīng)，以誘導(dǎo)CRC 腫瘤細(xì)胞的骨架重排和定向遷移，因此，靶向CCDC25 也為早期癌癥轉(zhuǎn)移提供治療策略。

上皮- 間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial to mesenchymal transition，EMT）是上皮細(xì)胞來源的惡性腫瘤細(xì)胞獲得遷移和侵襲能力的重要生物學(xué)過程，最新研究[35]發(fā)現(xiàn)用NETs 處理CRC 細(xì)胞可誘導(dǎo)形成絲狀偽足和重組細(xì)胞骨架等EMT 表型，并可觀察到上皮細(xì)胞標(biāo)志物cytokeratins 和E-cadherin 缺失，間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物波形蛋白、纖連蛋白、ZEB1 和Slug 的表達(dá)上調(diào)，以上表明NETs 激活了CRC 細(xì)胞的EMT過程，進(jìn)而促進(jìn)CRC 細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。血管生成也是惡性腫瘤完成生長和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟和必備條件，而NETs 上的CG、MMP-9 等多種成分可激活血管內(nèi)皮生長因子 （vascular endothelial growth factor，VEGF）或通過產(chǎn)生IL-8、IL-6 等直接刺激來調(diào)節(jié)腫瘤組織的血管生成[36-37]，為腫瘤的轉(zhuǎn)移過程提供豐富的血供。除此之外，腫瘤細(xì)胞在轉(zhuǎn)移過程還會不斷受到免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和攻擊，促使腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸同樣是腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴散的關(guān)鍵，研究[20]發(fā)現(xiàn)NETs 在TME 中具有免疫抑制作用，可排斥細(xì)胞毒性細(xì)胞并吸引調(diào)節(jié)T 細(xì)胞及骨髓細(xì)胞等免疫抑制細(xì)胞。NETs 還可包裹腫瘤細(xì)胞，作為免疫細(xì)胞和周圍靶細(xì)胞之間的物理屏障，使其免受CD8+T 細(xì)胞和自然殺傷（natural killer，NK）細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性損害。

3 NETs參與CRC相關(guān)性血栓形成

腫瘤相關(guān)性血栓形成是腫瘤患者的第二大直接死亡原因[38]，僅次于腫瘤本身，是腫瘤患者的預(yù)后不良的關(guān)鍵。腫瘤相關(guān)性血栓栓塞包括靜脈血栓栓塞（venous thromboembolism，VTE） 和動脈血栓栓塞（arterial thromboembolism，ATE），其中惡性腫瘤患者的VTE 發(fā)生率是普通人群的9 倍[39]，CRC 患者更是罹患靜脈血栓的高危人群[40]，然而其確切機制仍不清晰。研究發(fā)現(xiàn)NETs 可以通過多種途徑誘導(dǎo)腫瘤患者血管內(nèi)血栓前狀態(tài)以及血栓形成[41-42]，一方面，NETs 作為大分子復(fù)合物，其網(wǎng)狀支架結(jié)構(gòu)可為血小板及纖維蛋白的黏附和沉積提供良好的附著點。另一方面，NETs 中的NE 和CG 等成分可激活內(nèi)源性凝血途徑進(jìn)而促進(jìn)凝血及血栓形成[43]。最重要的是，NETs 可通過捕捉和激活血小板，促使其發(fā)展為促凝血表型，加速血栓的形成[44]。Zhang 等[45]對60 例CRC 患者和20 名健康人對照發(fā)現(xiàn)，CRC 患者更易產(chǎn)生NETs，并與癌癥進(jìn)展相關(guān)，經(jīng)PMA 刺激后，NETs 還可顯著增加其促凝血活性（procoagulant activity，PCA），表現(xiàn)為凝血時間縮短，凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物和纖維蛋白原顯著增加，NETs 可誘導(dǎo)血小板和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 （human umbilical vein endothelial cells，HUVECs） 膜 上 的 磷 脂 酰 絲 氨 酸（phosphatidylserine，PS）位點暴露，這種具有促凝活性的負(fù)電磷脂為凝血因子提供了促凝表面，使得凝血因子易于互相接觸和組裝，有效提升PCA。此外，活化的血小板也能誘導(dǎo)NETs 的產(chǎn)生，從而與中性粒細(xì)胞形成正反饋的環(huán)路。上述研究揭示了中性粒細(xì)胞、血小板和內(nèi)皮細(xì)胞之間的復(fù)雜關(guān)系，以及它們在CRC 高凝狀態(tài)中的潛在作用。相信隨著對NETs 臨床研究的不斷深入，NETs 可能成為防治CRC 相關(guān)血栓形成的一個新靶點。

4 NETs是CRC治療潛在靶標(biāo)

NETs 在CRC 中高表達(dá)對其疾病的發(fā)生和發(fā)展有重要的推動作用，故能否將NETs 作為CRC 中潛在的生物標(biāo)記物和治療靶點也逐漸成為目前的研究熱點。Zhang 等[46]對比不同患者的NETs 水平發(fā)現(xiàn)NETs 比癌胚抗原CEA 和碳水化合物抗原19-9 更具診斷價值，此外，多項臨床預(yù)后評估證明NETs 可作為一項獨立的腫瘤相關(guān)預(yù)后指標(biāo)[47-48]，NETs 高表達(dá)與總生存率（overall survival，OS）和無復(fù)發(fā)生存率（relapse-free survival，RFS） 降低相關(guān)[49]。CitH3 作為NETs 的核心分子，被認(rèn)為是預(yù)測晚期癌癥患者VTE 風(fēng)險和病死率的潛在診斷和預(yù)后生物標(biāo)志物[50-52]。最近一項研究[53]采用多重免疫熒光法，將CitH3 與中性粒細(xì)胞標(biāo)記物CD15 和MPO 相聯(lián)合，用于檢測CRC 等實體腫瘤中的NETs。Li等[54]還研發(fā)了一種結(jié)合CitH3 與DNA 的新型NETs定量檢測方法。能夠高效、準(zhǔn)確的識別NETs 對于腫瘤的早期篩查和病情監(jiān)測具有重要意義，但NETs 的檢測尚未標(biāo)準(zhǔn)化，且NETs 可能缺乏用于診斷某一特定腫瘤類型的特異性，故其臨床應(yīng)用還有待進(jìn)一步驗證。

抑制NETs 形成進(jìn)而減緩CRC 進(jìn)展是目前CRC治療領(lǐng)域極具潛力的研究方向。DNase I 是一種可以消化單鏈或雙鏈DNA 的非特異性核酸內(nèi)切酶，大量研究發(fā)現(xiàn)DNase I 可通過降解NETs 的DNA 骨架破壞其結(jié)構(gòu)完整性，進(jìn)而發(fā)揮抗腫瘤活性，且不影響中性粒細(xì)胞的正常生理功能[55]，目前DNase I已被FDA 批準(zhǔn)用于囊性纖維化患者的治療[56]，但DNase I 蛋白的半衰期相對較短，往往需要長期重復(fù)給藥，其臨床應(yīng)用也受到限制。Xia 等[57]發(fā)現(xiàn)通過AAV 介導(dǎo)的DNase I 基因轉(zhuǎn)導(dǎo)肝臟可有效抑制CRC 肝轉(zhuǎn)移小鼠模型中中性粒細(xì)胞的浸潤和NETs的形成，還可招募CD8+T 細(xì)胞并調(diào)節(jié)固有和適應(yīng)性免疫應(yīng)答機制誘導(dǎo)抗腫瘤免疫，有效抑制CRC 肝轉(zhuǎn)移。Zhang 等[58]報道DNase I 還可與免疫檢查點抑制劑PD-1 聯(lián)合應(yīng)用，通過改善腫瘤微環(huán)境有效提升PD-1 對CRC 的治療效果。因此，針對NETs 形成的任一重要環(huán)節(jié)都可能成為其潛在的CRC 治療靶點，PAD4 是NETosis 的關(guān)鍵酶，也是阻斷NETs 病理作用的重要靶點[59]。目前較為典型的PAD 抑制劑包括不可逆性抑制劑Cl-amidine 和可逆性抑制劑GSK-484[60-61]，并在相關(guān)臨床研究前研究中表現(xiàn)出和敲除PAD4 基因相似的抗腫瘤效應(yīng)。此外，通過抑制Ne[62]、ROS[63]、NO/NOS[64]等基因或蛋白表達(dá)都可抑制NETs 形成。針對各類靶向NETs 藥物的研究正在如火如荼的開展，有研究[65]發(fā)現(xiàn)茶多酚中重要的活性成分表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate，EGCG） 可通過調(diào)控STAT3/CXCL8 信號通路抑制NETs 的形成，進(jìn)而抑制CRC 的侵襲與遷移。Zhu 等[66]證明姜黃素可通過下調(diào)MEK/ERK 信號通路抑制NETs 而緩解肝臟缺血再灌注損傷，將姜黃素與DNase 1 聯(lián)合使用可有效提升其藥物療效。Zeng 等[67]研究表明山奈酚通過影響ROS-PAD4 途徑靶向抑制NETs 減少腫瘤的轉(zhuǎn)移。此外，NETs 相關(guān)的CEACAM1 和癌細(xì)胞表面的跨膜蛋白CCDC25 作為CRC 腫瘤轉(zhuǎn)移潛在的治療靶標(biāo)，有希望帶來一種全新的抗癌療法。

5 展 望

在相關(guān)臨床試驗中應(yīng)用DNase I 或PAD4 抑制劑等藥物，能夠有效阻止NETs 的形成進(jìn)而抑制癌細(xì)胞進(jìn)展，提示靶向抑制NETs 有望為CRC 的防治和聯(lián)合用藥提供新的思路和選擇。NETs 作為免疫系統(tǒng)的一部分，抑制NETs 的同時應(yīng)避免損害其正常的生理功能。基于此，腫瘤NETs 臨床與基礎(chǔ)研究還有待開展深入的研究。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：賈棟和陳順負(fù)責(zé)收集文獻(xiàn)資料和撰寫論文；解有成、康殷楠、趙寶銀負(fù)責(zé)文章寫作思路；仵朝暉、王俊科、于曉輝指導(dǎo)寫作和定稿。