ＨＰＬＣ法測(cè)定印度蛇根木提取物中利血平含量

蔣明廉

摘 要 目的：建立HPLC法測(cè)定印度蛇根木提取物中利血平含量的方法。方法：采用Hypersil ODS C18色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-50 mmol/L磷酸氫二鈉(用磷酸調(diào)pH值為3.0左右)(45∶55)（V/V），流速為0.7 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)268 nm。結(jié)果：利血平對(duì)照品線性范圍8.0～50.0 μg,r=0.999 9,加樣回收率為97.58%,RSD為0.62%(n=5)。結(jié)論：本方法準(zhǔn)確、可靠，可以用作印度蛇根木提取物中利血平的定量分析方法。

關(guān)鍵詞 高效液相色譜 印度蛇根木 利血平

中圖分類號(hào)：R97 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1006-1533(2008)05-0222-02

印度蛇根木來源于夾竹桃科植物蛇根木的根，利血平是其有效成分（Reserpine）。利血平主要作為降壓藥的原料，在臨床上已得到驗(yàn)證［1］，并且被《中國(guó)藥典》收載［2］。利血平主要功能是降低血壓、減慢心率，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有持久性的安定及抗抑郁作用［3］，是目前臨床應(yīng)用較廣泛的一種抗高血壓藥。為了有效控制提取物的質(zhì)量，本研究建立了HPLC法測(cè)定印度蛇根木提取物中利血平的含量方法。お

1 儀器與試藥

1.1 儀器

HP1100系列高效液相色譜儀；SB2200型超聲波清洗器(上海必能信超聲有限公司)；BP211D型電子天平(德國(guó)賽多利斯公司)。

1.2 試劑

提取物粉末:桂林萊茵生物制品有限公司提供；利血平對(duì)照品從中國(guó)藥品生物制品檢定所購(gòu)買；乙腈為色譜純，水為重蒸水，其它試劑均為分析純。お

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Hypersil ODS C18 （250mm×40mm，5μm），流動(dòng)相：乙腈-50 mmol/L磷酸氫二鈉溶液（用磷酸調(diào)pH值至3.0）（45∶55）（V/V）；流速：0.7 mL/min；柱溫：25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：268 nm；進(jìn)樣量：5 μL。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取利血平對(duì)照品4 mg，用0.1 mol/L磷酸水溶液溶解，定容至50 mL，取1.0、2.0、4.0、8.0 mL分別置于10 mL容量瓶中，用磷酸水溶液定容至刻度，分別精密吸取

5 μL，注入液相色譜儀中，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，以利血平濃度為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。其回歸方程如下：Y=265.430 5X－99.490 5 , r=0.999 9,利血平在8.0～50.0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。利血平對(duì)照品在所采用的色譜條件下，無雜峰干擾，峰形良好。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取印度蛇根木提取物粉末適量（相當(dāng)于利血平5 mg），置于50 mL容量瓶中，加0.1 mol/L磷酸水溶液，于超聲波水浴中超聲15 min，取出，放冷至室溫，定容至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過濾，即為供試品溶液。取5 μL注入高效液相色譜儀。利血平樣品峰形對(duì)稱，無干擾。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取上述對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次。RSD為1.22％，表明方法具有良好的精密度。

2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批印度蛇根木提取物樣品分別稱取5份，依法測(cè)定利血平的含量，RSD為1.17％，表明方法具有良好的重現(xiàn)性。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

將樣品溶液在24 h內(nèi)每隔2～3 h測(cè)定1次，其RSD為0.97％，表明樣品溶液中利血平在24 h內(nèi)測(cè)定保持穩(wěn)定。

2.7 加樣回收試驗(yàn)

采用加樣回收法，取已知含量的印度蛇根木提取物適量分別添加利血平對(duì)照品，按“供試品溶液制備”項(xiàng)下的方法操作，測(cè)得回收率為97.58％，RSD為0.62％（n＝5）。

2.8樣品測(cè)定

取不同批號(hào)的印度蛇根木提取物粉末，按2.3項(xiàng)下方法進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見表1。

3 討論

關(guān)于HPLC法測(cè)定印度蛇根木提取物中利血平含量的報(bào)道作者尚未見過。本研究采用乙腈-50 mmol/L磷酸氫二鈉溶液（用磷酸調(diào)pH值至3.0）（45∶55）（V/V）為流動(dòng)相，利血平能與其它組分達(dá)到基線分離。

在提取利血平時(shí)，作者對(duì)比了0.1 mol/L磷酸水、水、甲醇、乙醇等溶劑，結(jié)果采用0.1 mol/L磷酸水提取溶媒，其它色譜條件同前，測(cè)得利血平含量最高，雜峰較少。

另外，本研究考察了不同超聲提取時(shí)間(15、30、45 min)所得利血平含量，結(jié)果基本一致，故選用超聲提取15 min的方法。

本方法準(zhǔn)確、可靠、可以用作印度蛇根木提取物中利血平的定量分析方法。

參考文獻(xiàn)

1 張?zhí)m.高血壓危象救治中利血平的應(yīng)用問題［J］.云南醫(yī)藥，1994，15(3)168-170.

2 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(2000年版二部).304.

3 金光亮,周東豐.慢性利血平抑郁模型大鼠腦內(nèi)游離鈣離子、鈣調(diào)素和環(huán)核苷酸含量的變化［J］.中華精神科學(xué)，1997，30（2）：67-69.

(收稿日期：2008-01-31)