芽孢桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ?。螅穑穑┡c甲基硫菌靈混配對茄腐鐮孢菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｏｌａｎｉ）的抑制作用

劉淑娟　陳秀蓉　袁宏波　郭春秀

摘要：芽孢桿菌(Bacillus spp.)B1、B2、B6、B8與低毒化學(xué)農(nóng)藥甲基硫菌靈混配后對茄腐鐮孢菌的抑制作用研究結(jié)果表明：甲基硫菌靈濃度為0.001 mg／mL時(shí)，與4種生防菌混配對茄腐鐮孢菌的抑制率達(dá)到78.21％～80.93％。較生肪菌單獨(dú)處理，混配的抑制率提高了43％～54％；較單獨(dú)使用甲基硫菌靈，抑制率提高了14％～19％。當(dāng)濃度為0.000 5 mg／mL時(shí)混配作用的抑制率為71.21％～68.48％，較生防菌單獨(dú)作用，混配的抑制率提高了31％～44％；較甲基硫菌靈單獨(dú)作用抑制率提高了12％～19％。當(dāng)濃度繼續(xù)降低后，4種生防菌分別和甲基硫菌靈混配對茄腐鐮孢茵的抑制率與僅使用4種生防菌對茄腐鐮孢菌的抑制率無顯著差異，但較甲基硫菌靈單獨(dú)作用抑制率提高27％。說明甲基硫菌靈在濃度為0.001、0.000 5 mg／mL時(shí)與4種生防菌混配，兩者協(xié)同作用增強(qiáng)了抑制效果，對茄腐鐮孢菌有很好的抑制作用。

關(guān)鍵詞：芽孢桿菌；甲基硫菌靈；混配；抑制作用；茄腐鐮孢菌

中圖分類號：S 476.1

近年來發(fā)展形成的生物農(nóng)藥與化學(xué)防治方法相結(jié)合防治植物病蟲害的策略，既能有效控制病蟲害危害，又能降低農(nóng)藥在農(nóng)副產(chǎn)品中的殘留，因此受到了各國植物保護(hù)專家的重視。生物農(nóng)藥低毒、綠色、無公害，通過直接或間接的作用方式來防治蟲害、病害和雜草。但從整體上看還存在一些問題，如生防菌的作用較單一、防效不穩(wěn)定、防治譜較窄及生產(chǎn)和使用技術(shù)不完善等。但近年來，國內(nèi)在蘇云金桿菌與化學(xué)農(nóng)藥混配等方面取得了一定成就；陳志誼等人將枯草芽孢桿菌與井岡霉素進(jìn)行復(fù)配，成功研制了防治水稻病害的微生物農(nóng)藥井岡·枯芽菌。因此，通過生防菌的菌-菌混配使用或與低毒農(nóng)藥混配來提高效果、擴(kuò)大應(yīng)用范圍，達(dá)到良好的防病治蟲效果，在生產(chǎn)和實(shí)踐中是可行的。因此本文擬通過對多種植物病原真菌具有較強(qiáng)抑制作用的幾種芽孢桿菌與農(nóng)藥的混配試驗(yàn)，篩選與生防菌混配的化學(xué)農(nóng)藥。旨為進(jìn)一步提高生防菌抑菌防病效果，應(yīng)用于生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

芽孢桿菌B1、B2、B6、B8是甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)學(xué)院植病教研組在豌豆根際周圍土壤和東祁連山高寒草地土壤中篩選出的對豌豆根腐病菌、小麥紋枯菌、小麥根腐菌、小麥全蝕病菌、辣椒立枯病菌、茄子菌核菌、茄子枯萎菌、番茄葉霉菌、番茄灰霉菌、大蒜白腐病菌和番茄早疫菌、茄腐鐮孢菌等有顯著抑菌作用的幾種生防菌，抑菌譜廣。

1材料與方法

1.1供試菌株和殺菌劑

生防菌芽孢桿菌B1、B2、B6、B8由甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)學(xué)院植病教研組提供。

病原菌茄腐鐮孢菌[Fusarium solani(Mart.)Sacc.]由甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)學(xué)院植病系提供。

70％甲基硫菌靈可濕性粉劑為西安美邦化工產(chǎn)品。

1.2供試培養(yǎng)基

細(xì)菌培養(yǎng)用肉汁胨培養(yǎng)基；真菌培養(yǎng)和測定拮抗效果用PDA培養(yǎng)基。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1甲基硫菌靈對茄腐鐮孢菌的抑制作用

將甲基硫菌靈先用無菌水稀釋配成母液，根據(jù)設(shè)定濃度梯度，將藥液按一定比例稀釋并定量加入到滅菌后冷卻至50℃左右的PDA培養(yǎng)基內(nèi)，立即混勻后倒入培養(yǎng)皿即成帶毒培養(yǎng)基平板。

將活化好的病原菌打成菌餅(d=4 mm)，用接種環(huán)分別移到PDA藥液培養(yǎng)基中央，每皿接一菌餅，3個(gè)重復(fù)。設(shè)無藥培養(yǎng)基平板接菌為對照，置28℃恒溫箱中培養(yǎng)5 d，待對照長到平皿邊緣時(shí)，取出培養(yǎng)皿測量菌落直徑。采用十字交叉法測量，根據(jù)1.3.5計(jì)算公式計(jì)算各濃度對病原菌的抑制作用。

1.3.2藥劑對生防菌無抑制濃度的篩選

肉汁胨帶毒培養(yǎng)基的制備方法同1.3.1，將實(shí)驗(yàn)室保存的生防菌B1、B2、B6、B8于肉汁胨斜面培養(yǎng)基上28℃培養(yǎng)24～48 h后，加入無菌水搖勻，制備成菌懸液，測定各菌液A₆₀₀值，并用滅菌水調(diào)一致，分別在制備好的肉汁胨帶毒平板上滴加4種不同生防菌懸液0.1 mL后刮平、涂勻，無藥培養(yǎng)基為對照，每處理重復(fù)3次，置28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h觀察菌落生長情況。菌落數(shù)與對照無差異，即為能正常生長，平板上僅有少量菌落，與對照有顯著差異即為零星生長，平板上無菌落即為不能生長。

1.3.3藥劑毒力測定

參考1.3.1中設(shè)置的藥劑濃度，考慮盡量降低化學(xué)農(nóng)藥的用量，也要提高抑制效果。設(shè)定5個(gè)濃度制成PDA帶毒培養(yǎng)基(濃度見表3)。將活化好的病原菌打成菌餅(d=4 mm)，用接種環(huán)分別移植到PDA帶毒培養(yǎng)基中央，每皿接一菌餅，重復(fù)3次。設(shè)無藥培養(yǎng)基平板接菌為對照，置28℃恒溫箱中培養(yǎng)，待對照長到平皿邊緣時(shí)，采用十字交叉法測量菌落直徑。根據(jù)1.3.5計(jì)算公式計(jì)算各濃度對病原菌的抑制作用。再根據(jù)濃度對數(shù)與幾率值，求得回歸方程y=bx+a，由回歸方程計(jì)算出各藥劑對相應(yīng)菌株的抑制中濃度EC₅₀及相關(guān)系數(shù)r值。

1.3.4菌藥混配抑制試驗(yàn)

在以上試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，將篩選出的農(nóng)藥制備成PDA帶毒培養(yǎng)基(共設(shè)5個(gè)濃度)，然后把滅菌好的濾紙條(8.3 cm×0.4 cm)，十字交叉放入培養(yǎng)皿中，用移液槍吸取10μL的菌懸液(制備如1.3.2)均勻加在濾紙上。在濾紙交叉間分別接4塊病原菌菌餅。并設(shè)3個(gè)對照：(1)濾紙條加無菌水置于帶毒培養(yǎng)基，即為單一農(nóng)藥對照；(2)濾紙條加生防菌液置于無毒培養(yǎng)基，即為單一生防菌對照；(3)濾紙條加無菌水置于無菌培養(yǎng)基，即為空白對照。各處理重復(fù)3次。置于27℃恒溫箱中，待空白對照長到平皿邊緣時(shí)，取出培養(yǎng)皿測量菌落直徑。采用十字交叉法測量菌落直徑。根據(jù)1.3.5計(jì)算公式計(jì)算各濃度對病原菌的抑制作用。

1.3.5計(jì)算公式

菌落生長抑制率=(對照菌落直徑一處理菌落直徑)／(對照菌落直徑一菌餅直徑)×100％。

2結(jié)果分析

2.1農(nóng)藥對病原菌的抑制作用

由表1可見甲基硫菌靈濃度為0.25～1.00 mg／mL對茄腐鐮孢菌的抑制率為100％。

2.2生防菌在不同藥劑濃度培養(yǎng)基中的生長情況

甲基硫菌靈濃度降為0.25 mg／mL時(shí)對4種生防菌無抑制作用，其他濃度下對生防菌均有抑制作用(表2)。

2.3甲基硫菌靈不同濃度對茄腐鐮孢菌的抑制作用

甲基硫菌靈對茄腐鐮孢菌的毒力測定結(jié)果表明(表3)，甲基硫菌靈對此菌具有很強(qiáng)的抑菌效果，EC₅₀為0.002 mg／mL，毒力回歸方程為y=10.657+2.096 1 x，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.997 7。在0.008 mg／mL濃度下甲基硫菌靈對茄腐鐮孢菌有很好的抑制作用，抑制率可高達(dá)89.41％。

2.4菌藥混配抑制效果

由表4可以看出：在甲基硫菌靈濃度為0.001 mg／mL時(shí)，與4種生防菌混配對茄腐鐮孢菌的抑制率分別達(dá)到78.21％、77.04％、75.88％、80.93％，B1、B2、B6、B8單獨(dú)作用的抑制率分別為32.30％、30.74％、32.68％、26.85％，此濃度下甲基硫菌靈單獨(dú)作用的抑制率為61.48％。較生防菌單獨(dú)處理，混配的抑制率提高了43％～54％；較單獨(dú)使用甲基硫菌靈，抑制率提高了14％～19％。當(dāng)濃度為0.0005 mg／mL時(shí)混配作用的抑制率分別為71.21％，66.54％，64.20％，68.48％，較生防菌單獨(dú)作用，混配的抑制率提高了3l％～44％；較甲基硫菌靈單獨(dú)作用抑制率提高了12％～19％。當(dāng)濃度繼續(xù)降低后，4種生防菌分別和甲基硫菌靈混配對茄腐鐮孢菌的抑制率與僅使用4種生防菌對茄腐鐮孢菌的抑制率無顯著差異，但較甲基硫菌靈單獨(dú)作用抑制率提高27％。說明甲基硫菌靈在濃度為0.001、0.000 5mg／mL時(shí)與4種生防菌混配有良好的防治茄腐鐮孢菌的效果。

3結(jié)論與討論

近年來，我國利用生防菌與農(nóng)藥混配抑制病蟲害的工作已取得一定成就，馬良進(jìn)等進(jìn)行了蘇云金桿菌與農(nóng)藥混配，研究表明蘇云金桿菌菌體濃度為1012個(gè)／L與0.36％苦參堿水劑(5 000倍液)或1.8％阿維菌素乳油(5 000倍液)混配殺蟲效果最好；姜延超等進(jìn)行了微生物殺蟲劑BT與化學(xué)農(nóng)藥復(fù)配防治大袋蛾的研究也篩選出了較好的混配組合；李素英等人將生防菌與多菌靈混用防治棉花黃萎病，結(jié)果表明大部分混用防治效果優(yōu)于單用效果。國外Kantan，J.提出用化學(xué)藥物弱化病原菌后，有利于生物防治菌定殖并提高其防治效果。目前植物源農(nóng)藥、微生物農(nóng)藥與化學(xué)農(nóng)藥混配開發(fā)的品種有增加的趨勢。

從幾種枯草芽孢桿菌與甲基硫菌靈的混配研究可看出：甲基硫菌靈在適宜濃度與生防菌混配，不僅可顯著提高抑菌效果，而且對生防菌有促進(jìn)生長的作用，有利于生防菌生長繁殖，因此兩者混配，既發(fā)揮了農(nóng)藥殺菌速度快、防效穩(wěn)定的優(yōu)點(diǎn)，也提高了生防菌的抑菌效果，達(dá)到了兩者優(yōu)勢互補(bǔ)、用量減少、防效提高的目的，與以上文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。本文未涉及的其他農(nóng)藥與生防菌混配研究仍需進(jìn)一步探討；菌一藥混配在田間的防效有待進(jìn)一步研究。