洗液一號(hào)主要藥效學(xué)及皮膚毒性的實(shí)驗(yàn)研究

　　摘要：目的：觀察洗液一號(hào)抑菌、抗炎、止癢的藥理作用及安全性。方法：液體試管抑茵、小鼠耳廓二甲苯致炎、大鼠角又菜膠足跖腫脹、磷酸組織胺致瘁、皮膚急性毒性、長期毒性、過敏、皮膚及粘膜刺激等實(shí)驗(yàn)。觀察洗液一號(hào)的最小抑茵濃度、止癢、抗炎的藥理作用廈皮膚粘膜毒性。結(jié)果：洗液一號(hào)對(duì)多種常見陰道炎致病茵具抑制作用，能抑制二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹度角叉萊膠所致的大鼠足跖腫脹，能明顯提高豚鼠致瘁閾，未發(fā)現(xiàn)皮膚粘膜毒性。結(jié)論：洗液一號(hào)具有抑茵、抗炎、止癢作用且安全。
　　關(guān)鍵詞：洗液一號(hào)；陰道炎；抑菌；抗炎；止癢；皮膚毒性
　　中圖分類號(hào)：R285.5
　　文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A
　　文章編號(hào)：1007—2349(2007)06—0038—03
　　
　　洗液一號(hào)是攀枝花市中心醫(yī)院用于臨床多年治療婦女陰道炎的院內(nèi)制劑。為了探求洗液一號(hào)的主要藥理作用及客觀評(píng)價(jià)其安全性，對(duì)洗液一號(hào)進(jìn)行了體外抑菌、抗炎、止癢等藥效學(xué)及皮膚、粘膜毒性的實(shí)驗(yàn)研究，現(xiàn)報(bào)道如下。
　　
　　1材料
　　
　　1.1動(dòng)物ICR封閉群小鼠，體重(21±2)g，動(dòng)物級(jí)別；清潔級(jí)，合格證號(hào)：云衛(wèi)動(dòng)管9806號(hào)。SD大鼠，體重(190±20)g，動(dòng)物級(jí)別：清潔級(jí)，合格證號(hào)：云衛(wèi)動(dòng)管1305號(hào)。家兔，體重1.9～2.1kg，動(dòng)物級(jí)別：普通級(jí)，合格證號(hào)：云衛(wèi)動(dòng)管0001208。豚鼠，體重250～300g，動(dòng)物級(jí)別：普通級(jí)。均由昆明醫(yī)學(xué)院重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室及動(dòng)物科提供。
　　1.2藥物及試劑洗液一號(hào)，濃度67％，攀枝花市中心醫(yī)院提供，批號(hào)：20010411。臨床用量用法：150ml／次，溫水稀釋至500～1000mI(含原生藥8g／m1)，每日3次，外洗。潔爾陰，四川省成都思威公司制藥廠，批號(hào)：010703；二甲苯，汕頭市達(dá)濠精細(xì)化學(xué)品公司，批號(hào)：20000802。
　　1.3儀器電子分析天平，型號(hào)：BOSCH—SAE200，德國；足跖容積測(cè)量?jī)x(自制)。
　　
　　2方法
　　
　　2.1最低抑菌濃度(MIC)測(cè)定以供試品無菌取藥lml(潔爾陰原濃度，洗液一號(hào)67％濃度)，用無菌肉湯lml作倍比稀釋，采用液體試管抑菌法(檢測(cè)管8支，藥物對(duì)照管1支，細(xì)菌對(duì)照管1支)，加入菌量0.1ml(3X10⁶／m1)，培養(yǎng)18小時(shí)，然后將以上培養(yǎng)物分別定量轉(zhuǎn)種至瓊脂平板中培養(yǎng)18小時(shí)，觀察記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
　　2.2洗液一號(hào)對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 參照文獻(xiàn)，將50只小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只。各組分別為：對(duì)照組(蒸餾水)；潔爾陰組(30％)；洗液一號(hào)高、中、低劑量組(67％、34％、17％，)。實(shí)驗(yàn)當(dāng)日各組小鼠右耳前后兩面涂藥一次(O.1m1)，對(duì)照組涂以等量蒸餾水。1h后各給藥組以蒸餾水洗去藥液，用于棉球擦凈。采用二甲苯(25μl／每耳)致小鼠耳廓腫脹法，觀察記錄各組小鼠左右耳片重量，計(jì)算腫脹度(即左右耳片重量之差值)，并求出抑腫率。
　　2.3洗液一號(hào)對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響參照文獻(xiàn)將50只大鼠隨機(jī)分為5組，每組10只。分組同方法
　　2.2。涂藥前以改良容積法測(cè)定各組大鼠右后足(踝關(guān)節(jié)以下)體積，然后各組大鼠右后足跖部涂藥0.2mI／只，對(duì)照組涂以等量蒸餾水，1h后給各組大鼠右后足跖皮下注射角叉菜膠(0.05ml／只)致炎，同時(shí)再涂藥一次(對(duì)照組仍涂以等量蒸餾水)，分別于致炎后1、2、3、4、5h用改良容積法測(cè)量各組大鼠的右后足體積。計(jì)算腫脹度(即致炎前后足跖體積的差值)，并求出抑腫率。
　　2.4洗液一號(hào)對(duì)磷酸組織胺致豚鼠搔癢作用的影響參照文獻(xiàn)將豚鼠隨機(jī)分為4組，每組8只。分組同方法2.2。于試驗(yàn)前一日將各組豚鼠右后足背剪毛，分別外涂相應(yīng)藥物或蒸餾水(0.1ml／100g)。試驗(yàn)當(dāng)日用砂紙擦傷豚鼠右后足背部剪毛處，面積約2cm2，局部再次涂相應(yīng)藥物或蒸餾水(0.1ml／100g)。10min后，用0.1％磷酸組織胺分別滴在各組豚鼠的創(chuàng)面處(0.05ml／只／次)，此后每隔3min滴一次，直至出現(xiàn)豚鼠回頭舔右后足擦傷皮膚動(dòng)作為止。記錄并比較各組涂抹組織胺次數(shù)及致癢閾(最后出現(xiàn)豚鼠回頭舔右后足時(shí)所給予的磷酸組織胺累積用量)。
　　2.5皮膚急性毒性試驗(yàn)體重(20±2)g小鼠，雌雄各半。參照文獻(xiàn)，隨機(jī)分為5組，每組10只，洗液一號(hào)給小鼠一次皮下注射給藥(試藥劑量范圍：20～160g／kg；組距：1：0.5943;給藥體積：0.1m／10g)，連續(xù)觀察7天內(nèi)動(dòng)物毒性反應(yīng)及死亡情況，并用點(diǎn)斜法計(jì)算LD及LD的95％可信限。
　　2.6皮膚長期毒性試驗(yàn)體重(155±10)g大鼠，雌性。參照文獻(xiàn)，設(shè)高、中、低3個(gè)劑量組，每組動(dòng)物30只。高、中、低三個(gè)劑量濃度分別為200％、100％、20％(該濃度相當(dāng)于臨床推薦用藥濃度的10、5、1倍)。洗液一號(hào)給雌性大鼠皮膚、粘膜(大腿內(nèi)側(cè)、陰道、會(huì)陰、肛門周圍)涂藥，連續(xù)涂藥21天(為臨床驗(yàn)證用藥周期的3倍)。
　　2.7皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)1.9～2.1kg家兔8只，雌雄各半。參照文獻(xiàn)，隨機(jī)分為完整和破損皮膚2組，采用同體自身對(duì)比法，用賦形劑作對(duì)照，觀察67％洗液一號(hào)Iml外用對(duì)家兔完整皮膚和破損皮膚的刺激作用。
　　2.8粘膜刺激性實(shí)驗(yàn)參照文獻(xiàn)將1.9～2.1kg雌性家兔，隨機(jī)分為受試組與對(duì)照組，每組4只分別陰道注入洗液一號(hào)和滅菌生理鹽水(0.2ml／只／次)，每隔1h1次，共計(jì)5次。觀察其有無全身毒性反應(yīng)。24h后處死家兔，肉眼和鏡檢觀察陰道粘膜有無充血和水腫等反應(yīng)。如有死亡則對(duì)主要臟器進(jìn)行病理檢查。
　　2.9主動(dòng)皮膚過敏實(shí)驗(yàn)(ACA)，將250～300g豚鼠30只隨機(jī)分為3組，受試藥(67％洗液一號(hào))組、陰性對(duì)照(清潔飲用水)組及陽性對(duì)照(2、4二硝基氯代苯)組，每組10只，雌雄兼用。進(jìn)行致敏與激發(fā)試驗(yàn)(受試區(qū)3X 3cm²，受試物量為0.2m1)。按皮膚過敏反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)皮膚紅斑、水腫進(jìn)行評(píng)分。計(jì)算致敏反應(yīng)發(fā)生率。按皮膚致敏性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)皮膚致敏性進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　2.10統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS8.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。
　　
　　3結(jié)果
　　
　　3.1最低抑菌濃度(MIC)測(cè)定洗液一號(hào)對(duì)金黃色葡萄球菌、變形桿菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、真菌中的白色念珠菌和石膏樣小孢子菌均有不同程度的抑菌作用。對(duì)金黃色葡萄球菌及變形桿菌抑菌作用效果尤為顯著，MIC與潔爾陰接近。結(jié)果見表1。
　　3.3洗液一號(hào)對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響洗液一號(hào)高、中低劑量組能明顯抑制角叉菜膠所致的大鼠足跖腫脹，與陰性對(duì)照組比較差異有顯著性意義(P<0.05或P<0.01)，結(jié)果見表3。
　　3.4洗液一號(hào)對(duì)磷酸組織胺致豚鼠瘙癢作用的影啊　潔爾陰組能明顯提高豚鼠致癢閾，與對(duì)照組比較差異有非常顯著性意義(P<0.01)；洗液一號(hào)高、中、低劑量組有明顯提高豚鼠致癢閾的作用，與對(duì)照組比較差異有顯著性意義(P<0.01或P<0.05)見表4。
　　3.5皮膚急性毒性試驗(yàn)洗液一號(hào)小鼠皮下注射給藥，測(cè)得其LD=77.45g／kg，LD的95％可信限為63.21g／kg～94.88g／kg。相當(dāng)于臨床推薦成人外用量1.67g／kg的46倍。本品臨床應(yīng)用為皮膚、粘膜外用劑，吸收至皮下者極少，故可認(rèn)為本品外用安全低毒。
　　3.6皮膚長期毒性試驗(yàn)全部動(dòng)物健康存活，生長發(fā)育和行為活動(dòng)未見明顯異常反應(yīng)。體重隨時(shí)間的推移各組均相應(yīng)增加。血液學(xué)、血液生化學(xué)檢測(cè)的各項(xiàng)指標(biāo)均在正常范圍。心、肝、脾、肺、腎、胃、腸、腎上腺、甲狀腺、胸腺、子宮、卵巢和涂藥部位皮膚、粘膜等重要臟器組織，肉眼觀察未見異常，病理組織學(xué)檢查亦未發(fā)現(xiàn)毒性損害。各組間臟器系數(shù)差異無顯著性意義(P>0.05)。停藥2周后可逆性觀察，未發(fā)現(xiàn)遲緩性毒性。3.7皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)該藥液對(duì)家兔完整皮膚和破損皮膚均無明顯刺激性。
　　3.8粘膜刺激性實(shí)驗(yàn)未見全身毒性反應(yīng)，肉眼觀察未發(fā)現(xiàn)陰道分泌物、粘膜充血及水腫反應(yīng)，刺激反應(yīng)評(píng)分均為0，病理組織學(xué)觀察亦未見異常的病理改變。
　　3.9主動(dòng)皮膚過敏實(shí)驗(yàn)(AcA)洗液一號(hào)外用未引起豚鼠皮膚過敏反應(yīng)。
　　
　　4結(jié)論
　　
　　洗液一號(hào)具有抑菌、抗炎、止癢作用。臨床外用劑量安全。
　　
　　5討論
　　
　　陰道炎是不同病原茵侵襲引起的多種陰道粘膜炎性疾病的總稱，是最常見的一類婦科疾病。常表現(xiàn)為外陰瘙癢、紅、腫、痛，或局部糜爛，陰道分泌物增多，伴有尿頻、尿痛等癥狀。局部瘙癢不僅嚴(yán)重影響患者的正常生活，瘙癢還可引起局部感染加重。祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為該病主要是濕熱或寒濕下注所致。中西醫(yī)治療均以局部用藥為主，通過抑菌、抗炎、止癢達(dá)到緩解癥狀，根治病因的目的。
　　洗液一號(hào)以苦參、黃柏、老鸛草、白花蛇舌草、白鮮皮、蘆薈等16味中藥組成，苦參殺蟲止癢，清熱解毒為其君藥，輔以黃柏清熱燥濕，老鸛草、白花蛇舌草、白鮮皮祛風(fēng)殺蟲止癢，佐助藥蘆薈清肝經(jīng)濕熱、解毒殺蟲。諸藥合用，共奏清熱解毒、殺蟲止癢之功。根據(jù)現(xiàn)代藥理研究，方中諸藥均有廣譜抗菌及抗炎作用，對(duì)真菌及滴蟲也均有較好的抑制效果。其它如苦參能抗?jié)?，蘆薈有修復(fù)和保護(hù)陰部皮膚黏膜，促進(jìn)傷口愈合等作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：洗液一號(hào)外用對(duì)金黃色葡萄球菌、變形桿菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、真菌中的白色念珠菌和石膏樣小孢子菌均有不同程度的抑菌作用，同時(shí)還具有抗炎和止癢作用，該制劑的皮膚毒性實(shí)驗(yàn)未見明顯毒性，為臨床運(yùn)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。多年的臨床觀察結(jié)果也表明：洗液一號(hào)能治療各種婦女陰道炎、皮膚病，尤其對(duì)霉菌性陰道炎具有比較明顯的臨床療效，總有效率達(dá)98％。未見明顯的毒副作用。由此可見，洗液一號(hào)對(duì)治療婦女陰道炎，是一種安全有效的中藥制劑。其藥理作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步研