頭穴透刺對急性腦梗塞大鼠血漿中cAMP、cGMP含量的影響

吳緒平　周　爽等

吳緒平周爽劉又香王亞文黃蓉孫國杰

(湖北中醫(yī)學(xué)院,武漢*"430061)

摘要為探討頭穴透刺治療急性腦栓塞對血漿中cAMP、cGMP含量的影響,用線栓法直接阻斷大鼠大腦中動脈開口處制作急性腦梗塞動物模型,應(yīng)用放免技術(shù),檢測頭穴透刺對急性腦梗塞大鼠血漿中cAMP、cGMP含量的影響。結(jié)果:頭穴透刺后,血漿中過度降低的cAMP含量明顯升高,過度升高的cGMP含量逐漸下降,病理性減小的cAMP/cGMP比值增大,并均趨于正常值水平。提示頭穴透刺可以調(diào)節(jié)急性腦梗塞大鼠血漿中cAMP、cGMP的含量及二者的比值。

主題詞腦梗塞/針灸療法cAMP/血液cGMP/血液頭針透針

頭針治療腦源性疾病效果顯著,尤其是對急性腦梗塞的治療受到越來越廣泛的關(guān)注。為了進(jìn)一步探討其作用機(jī)制,本工作動態(tài)觀測了頭穴透刺對急性腦梗塞大鼠血漿中cAMP、cGMP含量的影響。

1材料與方法

1.1實驗動物與分組

選健康SD大鼠(250～280 g)90只,雌雄各半(同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供,采用籠養(yǎng)方式)。隨機(jī)分為正常對照組(10只)、模型組(40只)、治療組(40只)。模型組和治療組再按不同時相隨機(jī)分為4個小組,即6 h、24 h、48 h、72 h,每小組10只。各組飼養(yǎng)方法與實驗室環(huán)境等條件均相同,正常組無須作任何處理,直接取全血樣本,模型組造模后不予針刺,按不同時相采血,治療組造模后行頭穴透刺,也按不同時相采血。

1.2動物模型的制作

將大鼠經(jīng)腹腔注射6%水合氯醛(0.6 ml/100 g)后仰臥于恒溫手術(shù)臺上,切開右側(cè)頸部皮膚,分離、結(jié)扎右側(cè)頸總動脈、頸外動脈及其分支,分離右側(cè)頸內(nèi)動脈(ICA),近端備線,遠(yuǎn)端放置動脈夾。于頸總動脈上距分叉0.5 cm處切口,插入1.5號尼龍線(頭端烤化呈光滑球形,直徑達(dá)0.25 mm左右,并具有一定的彈性和硬度)18～20 mm。栓線進(jìn)入ICA,穿過大腦中動脈(MCA)起始端至大腦前動脈近端,阻斷MCA的所有血液來源。扎緊備線,剪去多余線頭,縫合皮膚。在手術(shù)結(jié)束麻醉醒后,觀察其神經(jīng)癥狀,按照Kuluz神經(jīng)缺損三級評分標(biāo)準(zhǔn)^[1],選擇符合二級者,即行走時身體向偏癱側(cè)轉(zhuǎn)圈者作為實驗觀察對象。

1.3頭穴透刺方法

按照中國針灸學(xué)會實驗針灸研究會1992年制定的《實驗動物穴位定位標(biāo)準(zhǔn)》,取"百會"透"前頂",沿皮刺入6 mm,病灶側(cè)"率谷"透"懸厘",沿皮刺入6 mm,接通上海產(chǎn)G-6805治療儀,選用疏密波,強(qiáng)度為1 mA左右(以大鼠肢體震顫為度),頻率為30 Hz,每次通電30 min。造模麻醉清醒后即刻針刺1次,此后每日1次(即6 h組針刺1次,24 h組針刺2次,48 h組針刺3次,72 h組針刺4次)。

1.4樣品制備

用心臟穿刺采血法抽取全血1.5 ml加入預(yù)置有50 μl EDTA·2 Na抗凝劑的試管內(nèi),搖勻后置冰浴中,1 h內(nèi)離心(2000 r/min,10 mins)。取上清液0.1 ml移入試管,加入無水酒精2 ml,振搖1 mins,靜置5 mins后離心(3000 r/min,10 mins),取上清液移入干凈的青霉素小瓶內(nèi),剩余殘渣加75%酒精1 ml,振搖均勻以打碎塊狀物后再離心(3000 r/min,10 mins),合并上清液于青霉素小瓶,烘干后置于4 ℃恒溫箱中保存待測。

1.5樣品測定

測定用放免藥盒由上海中醫(yī)藥大學(xué)同位素室提供,采用上海核福光電儀器有限公司生產(chǎn)的SN-682型放射免疫γ計數(shù)器檢測。全部程序按藥盒說明書進(jìn)行。

2結(jié)果

本實驗所得數(shù)據(jù),全部輸入電子計算機(jī)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,采用組間配對玹檢驗方法進(jìn)行顯著性檢驗。所得結(jié)果如下。

2.1頭穴透刺對急性腦梗塞大鼠血漿中cAMP含量的影響(見表1)

由表1可見,模型組血漿中cAMP含量明顯低于正常組(6 h、24 h組,P<0.01),隨著時間的推移,其含量有小幅度的回升,但仍具有顯著性差異(48 h、72 h組,P<0.05);頭穴透刺治療后,血漿中cAMP含量逐漸上升,并于72 h基本恢復(fù)正常,與模型組比較,差異有顯著性意義(P<0.05)。提示頭穴透刺可以明顯提高急性腦梗塞大鼠血漿中cAMP含量。

2.2頭穴透刺對急性腦梗塞大鼠血漿中cGMP含量的影響(見表2)

由表2可見,模型組血漿中cGMP含量明顯高于正常組,差異具有非常顯著性意義(〖WTBX〗P<0.01),頭穴透刺治療后,血漿中cGMP的含量逐漸下降,并漸趨于正常值水平,與模型組比較(48 h組P<0.05,72 h組P<0.01)差異具有顯著或非常顯著性意義。提示頭穴透刺可以明顯降低血漿中cGMP含量。

2.3頭穴透刺對急性腦梗塞大鼠血漿中cAMP/cGMP的影響(見表3)

由表3可見,模型組血漿中cAMP/cGMP比值明顯低于正常組,各時相組比較,差異均具有非常顯著性意義(P<0.01),頭穴透刺治療后,血漿中cAMP/cGMP比值回升,并漸趨于正常值。48 h和72 h組與模型組比較,差異具有非常顯著性意義(P<0.01)。提示頭穴透刺可以明顯提高血漿中cAMP/cGMP比值。

3討論

3.1依據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)大腦皮層功能區(qū)在頭皮的投影,百會透前頂為皮質(zhì)運動、感覺區(qū)上部的投影區(qū),率谷透曲鬢為面、手、上肢運動、感覺皮層區(qū),主側(cè)半球的語言皮質(zhì)區(qū)和顳葉部分的投影。同時百會透前頂位于大腦前動脈主干投影區(qū),率谷透曲鬢位于大腦中動脈皮層支主干和分支顳前、中、后動脈支配區(qū)的投影處。刺激上述兩組頭穴可以改善大腦中動脈、大腦前動脈的血液循環(huán),使相應(yīng)皮層功能區(qū)血流量發(fā)生變化,從而改善了梗塞區(qū)的血液供應(yīng),加速了腦組織的修復(fù),促進(jìn)了臨床神經(jīng)功能缺損癥狀的改善。

3.2國內(nèi)外研究表明,cAMP與cGMP對血管平滑肌功能有調(diào)節(jié)作用。主要表現(xiàn)為影響細(xì)胞膜成分的結(jié)構(gòu)和功能,降低細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度,以及抑制肌醇磷脂代謝,抑制細(xì)胞內(nèi)以Ca2+的動員,從而介導(dǎo)血管平滑肌的松弛反應(yīng)^[2]。本實驗結(jié)果顯示急性腦梗塞大鼠血漿中cAMP含量明顯下降,cGMP含量明顯升高,cAMP/cGMP比值減小。這可能是由于腦梗塞引起機(jī)體神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)的改變,進(jìn)而影響了腺苷酸環(huán)化酶和鳥苷酸環(huán)化酶的活性而造成的。頭穴透刺治療后,cAMP含量逐漸回升,cGMP含量逐漸下降,兩者的比值逐漸增大,并均趨于正常值水平。因此,我們認(rèn)為頭穴透刺可能通過對機(jī)體血漿中cAMP、cGMP的含量及二者的比值的調(diào)節(jié)來實現(xiàn)對急性腦梗塞的治療作用,但其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

4參考文獻(xiàn)

1Kukuz JW,Prado RJ,Dietrich D,et al.the Effect of Nitric Oxide Synthase Inhibition on Infarct Volume after Reversible Focal Ischemia in Conscious Rats.Stroke 1993;24:2023

2Axelsson KL,et al.The Clinic Value of Measurement of the Symphysis-fundus-distance and Ultrasosic Measurement of the Biparietal Diameter in Diagnosis of Intrauterine Growth Retaralation.Acta Pharmacol Toxicol 1985;57:227

(收稿日期:1999-12-17,齊淑蘭發(fā)稿)