ELISA、TRUST 法行梅毒血清學(xué)檢測(cè)效果比較

摘要:目的　比較酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)(TRUST)、凝集法(TPPA法)法行梅毒血清學(xué)檢驗(yàn)的效果。方法　分別用ELISA、TRUST、TPPA法檢測(cè)1 468例梅毒疑似患者的血清學(xué)標(biāo)本。以TPPA法檢測(cè)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算ELISA、TRUST法的檢出率、靈敏度并進(jìn)行比較。結(jié)果　本組1 468例標(biāo)本中ELISA法檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性48例(3．27%)、TRUST法陽(yáng)性23例(1．57%)、TPPA法陽(yáng)性46例(3．13%)。ELISA法檢出率與TPPA法相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但均高于TURST法(P均＜0．05)。以TPPA法檢測(cè)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，ELISA法靈敏度97．83% (45/46)，TRUST法靈敏度45．65%(21/46);二者靈敏度相比，P＜0．05。結(jié)論　用ELISA行梅毒血清學(xué)檢測(cè)效果優(yōu)于TRUST法。

doi: 10．3969/j．issn．1002-266X．2015．38．025

文獻(xiàn)標(biāo)志碼: B

文章編號(hào): 1002-266X(2015)38-0062-02

近年來(lái)，梅毒發(fā)病率呈現(xiàn)逐漸高發(fā)的趨勢(shì) ［1］。目前，臨床采用的梅毒臨床血清學(xué)檢測(cè)方法有酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)、甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)(TRUST法)和凝集法(TPPA法)。TPPA檢測(cè)準(zhǔn)確率高，但是費(fèi)用昂貴; ELISA、TRUST法檢測(cè)費(fèi)用相對(duì)較低，但其檢測(cè)效果孰優(yōu)孰劣尚有爭(zhēng)議 ［2，3］。2011年10月～2014年10月，我們分別用ELISA、TRUST、TPPA法檢測(cè)1 468例梅毒疑似患者的血清學(xué)標(biāo)本，并以TPPA法檢測(cè)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，比較ELISA、TRUST法的靈敏度。現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1．1　臨床資料　1 468例梅毒疑似患者，其中男768例、女700例，年齡26～58(39．50±1．50)歲。均經(jīng)患者及其家屬知情同意，與患者及家屬簽訂知情同意書(shū)，并報(bào)我院倫理委員會(huì)備案。

1．2梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法　患者入院第2天上午抽取5 mL靜脈血，靜置5 min，將血清分離后行ELISA、TRUST、TPPA檢測(cè)，檢驗(yàn)過(guò)程均嚴(yán)格按照試劑盒規(guī)定進(jìn)行。ELISA試劑盒由上?？迫A生物技術(shù)發(fā)展有限公司生產(chǎn)，TRUST試劑盒由上海榮盛生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，TPPA試劑盒由富士瑞必歐株式會(huì)社公司生產(chǎn)。①ELISA:分別取待測(cè)樣本50 μL，加入預(yù)包被板條孔內(nèi)，并設(shè)陰性、陽(yáng)性及空白對(duì)照，于37℃溫度下溫育60 min。分別取酶標(biāo)記物50 μL，加入陰性、陽(yáng)性及空白對(duì)照孔內(nèi)，振蕩混勻，于37℃溫度下溫育30 min。洗板完成后陰性、陽(yáng)性及空白對(duì)照孔內(nèi)分別加入終止液50 μL，混勻，察看酶標(biāo)儀顯示數(shù)據(jù)，判斷樣本性質(zhì)。②TRUST:取待測(cè)樣本50 μL，置于卡片圈中，并均勻涂布于整個(gè)卡片圈內(nèi)。將抗原液輕輕搖勻后滴加于卡片圈內(nèi)。把卡片放置在立體脫色搖床內(nèi)，震蕩搖勻(100 r/min，8 min)，立即觀察檢測(cè)結(jié)果。③TPPA:將標(biāo)本稀釋液加入U(xiǎn)型反應(yīng)板上，第1孔內(nèi)加入100 μL，其他2～9孔均分別加入25 μL，。與第1孔內(nèi)加入血清25 μL，混合均勻后取出25 μL加入到第2孔中，然后依次稀釋，一直稀釋到第9孔中，第9孔稀釋后取出的25 μL液體丟棄。取未致敏粒子液25 μL加入第3孔內(nèi)，取致敏粒子液25 μL加入4～9孔內(nèi)，將微量反應(yīng)板放置在振蕩器中，震蕩0．5 min，然后將微量反應(yīng)板放置在有蓋的濕盒內(nèi)，室溫下靜置2 h，觀察檢測(cè)情況。檢出率=陽(yáng)性例數(shù)/1 468。ELISA、TRUST法靈敏度= TPPA法檢測(cè)陽(yáng)性者中ELISA、TRUST法檢測(cè)陽(yáng)性例數(shù)/TPPA法檢測(cè)陽(yáng)性例數(shù)。

1．3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法　采用SPSS17．0統(tǒng)計(jì)軟件。率的比較采用重復(fù)測(cè)量的方差分析。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

本組1 468例標(biāo)本中ELISA法檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性48 例(3．27%)、TRUST法陽(yáng)性23例(1．57%)、TPPA法陽(yáng)性46例(3．13%)。ELISA法陽(yáng)性檢出率與TPPA法相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但均高于TURST 法(P均＜0．05)。以TPPA法檢測(cè)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，ELISA法靈敏度97．83%(45/46)，TRUST法靈敏度45．65%(21/46)，二者靈敏度相比P＜0．05。

3　討論

在梅毒臨床檢測(cè)方法中，血清學(xué)試驗(yàn)是臨床使用最為廣泛、效果最好的方法，目前臨床上最常用來(lái)檢驗(yàn)梅毒的方法有ELISA、TRUST、TPPA等多種檢測(cè)方法 ［4］。研究發(fā)現(xiàn)，在梅毒侵入人體2周后，人體血清內(nèi)即可產(chǎn)生特異性抗體IgM與IgG。ELISA主要是通過(guò)基因重組形成特異性抗原，對(duì)梅毒特異性抗體IgM與IgG進(jìn)行檢測(cè)，在早期既可對(duì)梅毒感染進(jìn)行判斷 ［5］。此外，ELISA還具有操作簡(jiǎn)單、成本較低等優(yōu)點(diǎn)，且可應(yīng)用半自動(dòng)或全自動(dòng)酶標(biāo)儀，易于保存原始數(shù)據(jù)，是進(jìn)行大批量檢測(cè)梅毒的方法 ［6］。但是，由于ELISA檢測(cè)的是梅毒特異性抗體IgM與IgG，IgG抗體在梅毒被治愈后較長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)可仍表現(xiàn)為陽(yáng)性，部分患者甚至終身表現(xiàn)為陽(yáng)性。因此，ELISA檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性并不代表梅毒病毒正在活動(dòng)，在臨床診斷梅毒的過(guò)程中必須結(jié)合患者臨床表現(xiàn)，以避免誤診 ［7］。在本研究中，ELISA檢測(cè)陽(yáng)性率為3．27%，與TPPA檢測(cè)陽(yáng)性率(3．13%)較為接近。盡管如此，ELISA檢測(cè)仍存在假陽(yáng)性率。究其原因可能與血清內(nèi)的纖維蛋白原存在一定的關(guān)系。資料顯示，相當(dāng)多的疾病以及免疫接種均能使ELISA檢測(cè)表現(xiàn)為假陽(yáng)性，某些基礎(chǔ)性疾病能夠促使機(jī)體產(chǎn)生誘導(dǎo)抗TP抗體或抗類脂抗體交叉抗原導(dǎo)致假陽(yáng)性 ［8］。

TRUST也是血清學(xué)試驗(yàn)的重要方法，主要是對(duì)抗心磷脂抗體進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)于一期梅毒、二期梅毒，其檢出率可達(dá)96%以上，但對(duì)于晚期梅毒或者期梅毒潛伏期檢出率卻相對(duì)較低，約為58%～85%，故常不易用作梅毒晚期或早期輔助診斷 ［9］。臨床數(shù)據(jù)顯示，TRUST應(yīng)用于梅毒檢測(cè)，無(wú)論是假陽(yáng)性率還是假陰性率均相對(duì)較高，易受類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、瘧疾、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等疾病的影響，且易漏檢 ［10］。但在觀察患者臨床療效以及病程進(jìn)展方面TRUST具有較高的應(yīng)用價(jià)值，并且其價(jià)格相對(duì)較低，易被患者接受 ［11］。在本研究中，TRUST檢測(cè)陽(yáng)性率為1．57%，與TPPA檢測(cè)陽(yáng)性率(3．13%)差距較大，與上述研究結(jié)果較為一致。TPPA為包被明膠顆粒的梅毒特異性抗原，在梅毒檢測(cè)上具有較好的特異性及敏感性，尤其是對(duì)于潛伏期梅毒，其特異性及敏感性更高 ［12］。

本研究結(jié)果顯示，用ELISA法行梅毒血清學(xué)檢查，靈敏度高于TRUST法。結(jié)合兩種方法檢出率的差異，筆者認(rèn)為臨床行梅毒血清學(xué)檢查時(shí)，ELISA優(yōu)于TRUST，可通過(guò)ELISA對(duì)梅毒患者進(jìn)行篩查 ［12］。