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    不同溶液體系中甘草酸的超濾分離規(guī)律研究

    2015-12-08 08:13:59瞿其揚(yáng)李存玉鄭云楓彭國(guó)平
    中成藥 2015年12期
    關(guān)鍵詞:超濾膜甘草酸提取液

    瞿其揚(yáng), 李存玉,2, 鄭云楓, 時(shí) 浩, 彭國(guó)平,2*

    (1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,江蘇南京210023;2.江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過(guò)程協(xié)同創(chuàng)新中心,江蘇南京210023)

    不同溶液體系中甘草酸的超濾分離規(guī)律研究

    瞿其揚(yáng)1, 李存玉1,2, 鄭云楓1, 時(shí) 浩1, 彭國(guó)平1,2*

    (1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,江蘇南京210023;2.江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過(guò)程協(xié)同創(chuàng)新中心,江蘇南京210023)

    目的 探討不同溶液體系下甘草酸的超濾分離規(guī)律。方法 以甘草酸為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,在不同溶劑、藥液pH等條件下,選擇系列截留分子量的超濾膜進(jìn)行超濾,HPLC法計(jì)算甘草酸超濾前后的變化,分析不同條件下甘草酸存在狀態(tài)與其超濾行為的相關(guān)性。結(jié)果 含有相同濃度甘草酸的單體溶液與甘草提取液在相同條件下,超濾透過(guò)率具有明顯差異。此外,在酸性條件下甘草酸透過(guò)率降低,而在堿性條件下增加。在不同體積分?jǐn)?shù)乙醇溶液中,甘草酸透過(guò)率隨乙醇體積分?jǐn)?shù)升高而有不同程度增加。結(jié)論 不同溶液體系下甘草酸的存在狀態(tài)決定了其超濾透過(guò)行為,為超濾技術(shù)應(yīng)用于中藥制劑領(lǐng)域提供一定參考。

    甘草酸;超濾;溶液體系;HPLC

    超濾是一種以孔徑截留為特征的分離模式,依靠一定的壓力和體積流量,通過(guò)膜孔的篩分作用,迫使大分子物質(zhì)留下,小分子物質(zhì)透過(guò)[1],具有操作簡(jiǎn)單、能耗低、工藝流程短等優(yōu)點(diǎn),在中藥制藥領(lǐng)域具有較大的開發(fā)潛力,尤其是中藥注射劑方面。但在實(shí)際應(yīng)用時(shí),成分的分離規(guī)律與超濾膜截留分子量常出現(xiàn)相關(guān)性差的現(xiàn)象,僅依靠孔徑篩分理論往往無(wú)法解釋多樣性的超濾結(jié)果[2-3],從而阻礙了超濾技術(shù)的推廣應(yīng)用,目前多歸結(jié)為溶液中的黏度、介電常數(shù)等因素引起[4-5],而忽略同一成分在不同溶液環(huán)境中的存在狀態(tài)與其超濾行為的相關(guān)性。

    由于中藥制劑中成分的多樣性,導(dǎo)致在同一溶液體系中,不同的成分均受到這一復(fù)雜環(huán)境的影響,會(huì)出現(xiàn)游離、解離、締合等形式[6-7]。由于成分存在形式的差異,其原本所具有的物化性質(zhì)也會(huì)發(fā)生相應(yīng)的改變,在進(jìn)行超濾時(shí)也會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的影響。因此,為了明確成分的超濾分離行為,首先需要制備不同的溶液體系,結(jié)合成分透過(guò)行為總結(jié)規(guī)律,進(jìn)而指導(dǎo)超濾技術(shù)的應(yīng)用。

    本實(shí)驗(yàn)選擇具有酸性、表面活性且在中藥制劑中較為常見的指標(biāo)成分甘草酸作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,HPLC法分析超濾前后溶液中甘草酸的含有量,研究不同溶液體系下甘草酸透過(guò)率的變化,分析溶液環(huán)境-透過(guò)行為-存在狀態(tài)的相關(guān)性,為中藥超濾分離原理研究提供一定的參考。

    1 儀器和材料

    1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 Minipore Pellicon 2板框式超濾裝置、Minipore蠕動(dòng)泵、超濾膜 (再生纖維素,截留分子質(zhì)量100、30、10、5、1 kDa) (美國(guó)Minipore公司);Waters 2695 HPLC色譜儀(美國(guó)Waters公司);AEL-40SM型電子天平 (十萬(wàn)分之一,梅特勒-托利多上海有限公司);PB-10型pH計(jì) (德國(guó)賽多利斯公司);FA2204型電子天平 (萬(wàn)分之一,上海市安亭電子儀器廠);H66025超聲清洗機(jī)(無(wú)錫市蘭輝超聲電子設(shè)備廠)。

    1.2 材料 甘草酸提取物 (純度>95%,南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司,批號(hào)20120405);甘草酸對(duì)照品 (中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào)110731-200614,供含有量測(cè)定用)。甲醇、乙腈為色譜純;三氟乙酸為分析純;水為純化水。

    甘草飲片 (亳州市中正中藥材飲片有限公司,批號(hào)1305201),經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)吳啟南教授鑒定為豆科植物烏拉爾甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根及根莖,符合 《中國(guó)藥典》2010版 (一部)有關(guān)項(xiàng)下的規(guī)定。

    2 方法

    2.1 供試品配制

    2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的甘草酸對(duì)照品適量,置于量瓶中,加甲醇定容至刻度,即得質(zhì)量濃度為0.561 8 mg/mL的甘草酸對(duì)照品溶液。

    2.1.2 超濾原液的制備及預(yù)處理

    2.1.2.1 甘草酸溶液 稱取甘草酸提取物適量,加水配制成質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL的藥液,超聲10 min,0.45μm微孔濾膜過(guò)濾,即得。

    2.1.2.2 甘草提取液[8-9]稱取甘草藥材160.0 g,分別加10、8倍體積水回流,提取2.0、1.5 h,合并提取液,濃縮1.2倍后離心,0.45μm微孔濾膜過(guò)濾,即得。

    2.1.2.3 甘草混合液 取甘草酸溶液和甘草提取液,等體積混合,超聲10 min,0.45μm微孔濾膜過(guò)濾,即得。

    2.1.2.4 不同pH甘草酸溶液 稱取甘草酸提取物適量,加磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液配制成質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL的藥液,pH值為3.0、9.0,超聲10 m in,0.45μm微孔濾膜過(guò)濾,即得。

    2.1.2.5 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇甘草酸溶液 稱取甘草酸提取物適量,用10%、20%乙醇配制成質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL的藥液,超聲10 min,0.45μm微孔濾膜過(guò)濾,即得。

    2.2 色譜條件[10-11]Thermo Scientific C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5μm);乙腈為流動(dòng)相A,0.1%三氟乙酸為流動(dòng)相B,梯度洗脫,順序見表1;體積流量1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm;進(jìn)樣量10μL;柱溫30℃。

    表1 梯度洗脫順序

    2.3 超濾實(shí)驗(yàn)

    2.3.1 甘草酸超濾平衡實(shí)驗(yàn) 取甘草酸溶液10 L,分別選擇100、30、10、5、1 kDa超濾膜進(jìn)行超濾,操作溫度25℃,操作壓力2 psi(1 psi=6.89 kPa),將超濾裝置中進(jìn)液端、截留液端及濾前原液端放于同一容器內(nèi)。當(dāng)超濾液端通量為原液體積的0.5、1、2、4、6倍體積時(shí),取容器內(nèi)平衡液及超濾液,將不同平衡體積后的樣品進(jìn)行HPLC檢測(cè),并按式 (1)計(jì)算甘草酸吸附率。

    其中,R為成分的吸附率;C平衡為平衡液中甘草酸質(zhì)量濃度,單位為mg/mL;C原液為原液中甘草酸質(zhì)量濃度,單位為mg/m L。

    2.3.2 甘草酸超濾實(shí)驗(yàn) 超濾平衡實(shí)驗(yàn)后,分別將甘草酸溶液、甘草提取液、甘草混合液、不同pH甘草酸溶液、不同體積分?jǐn)?shù)乙醇甘草酸溶液置于超濾系統(tǒng)中,采用系列孔徑超濾膜超濾,待充分平衡后取樣,進(jìn)而收集超濾液。超濾后,將超濾液端混勻,取樣,HPLC檢測(cè)超濾液、平衡液,根據(jù)式 (2)計(jì)算成分透過(guò)率T。

    3 結(jié)果與分析

    3.1 超濾規(guī)范操作 由圖1可知,10、30、100 kDa超濾膜平衡2~4倍溶液體積后,甘草酸吸附率較為穩(wěn)定,5和1 kDa超濾膜在平衡1~2倍體積后亦然。由于5和1 kDa

    超濾膜通量較小,平衡1倍溶液體積所需時(shí)間較長(zhǎng),故根據(jù)吸附率總體趨勢(shì)變化,選擇平衡2倍溶液體積后取樣,結(jié)果相對(duì)穩(wěn)定,而且時(shí)間較為合適。

    圖1 不同平衡體積下超濾膜對(duì)甘草酸的吸附率

    3.2 不同溶液體系對(duì)甘草酸透過(guò)率的影響

    3.2.1 甘草酸溶液、甘草提取液和混合液 三種溶液中,甘草酸透過(guò)率均隨膜孔徑增大而升高,其中甘草提取液與混合液中成分的透過(guò)率相當(dāng)。超濾膜在30 kDa以下時(shí),提取液、混合液中甘草酸透過(guò)率均高于甘草酸單體溶液,見表2。

    表2 不同藥液中甘草酸的透過(guò)率 (n=3)

    3.2.2 不同pH值甘草酸溶液 甘草酸溶液pH約為5.3~5.5。隨著溶液pH降低,透過(guò)率呈明顯下降趨勢(shì);溶液pH升高,透過(guò)率則隨之上升,見表3。

    表3 不同溶液pH下甘草酸的透過(guò)率(n=3)

    3.2.3 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇的甘草酸溶液 乙醇使溶液中甘草酸透過(guò)率明顯高于單體水溶液。而且隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)升高,甘草酸透過(guò)率有一定程度的上升,見表4。

    表4 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇溶液中甘草酸的透過(guò)率 (n=3)

    4 討論

    4.1 超濾操作方法是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的關(guān)鍵因素之一,但現(xiàn)有文獻(xiàn)中鮮有關(guān)于超濾規(guī)范操作的報(bào)道,為避免操作等原因引起的結(jié)果多樣化,需要對(duì)超濾的取樣方法進(jìn)行系統(tǒng)性研究。本實(shí)驗(yàn)選取2倍平衡體積后取樣,避免因超濾膜對(duì)成分吸附變化而導(dǎo)致數(shù)據(jù)不穩(wěn),從而確保后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

    4.2 甘草提取液、混合液與相同質(zhì)量濃度甘草酸的單體透過(guò)率存在明顯差異,表明不同溶液體系對(duì)甘草酸超濾行為具有顯著影響。由于甘草酸屬于皂苷成分,在水溶液中易形成 “膠束”,阻礙其透過(guò)超濾膜[3],在提取液中形成單分子鹽[12]而易于透過(guò),說(shuō)明溶液制備方式影響了成分存在形式,繼而影響其透過(guò)。而將兩種甘草酸溶液混合制備混合溶液進(jìn)行超濾時(shí),甘草酸透過(guò)率并非介于兩者之間,而是較接近甘草提取液,這也說(shuō)明混合溶液體系對(duì)甘草酸單體的超濾行為產(chǎn)生一定影響。

    4.3 超濾法對(duì)不同溶液體系中甘草酸單體透過(guò)率的影響各異,可能與甘草酸具有表面活性有一定關(guān)聯(lián)。甘草酸親水端含有羧基結(jié)構(gòu),在酸性條件下其解離受到抑制,與水分子親和力減小,有助于分子間形成膠束而被截留;堿性條件下其以離子形式存在,分子間排斥增大,致使分子團(tuán)聚作用減弱[13-14],從而改變甘草酸單體的超濾效果。而在溶液中加入大量有機(jī)醇時(shí),會(huì)抑制甘草酸膠束的形成[14],并改善其疏水端的親水性,因此破壞了該分子團(tuán)聚的溶液條件,使甘草酸單體的透過(guò)率得到顯著提高。

    4.3 綜上所述,不同溶液體系下成分的存在狀態(tài)有一定差異,使其透過(guò)行為發(fā)生改變,最終導(dǎo)致成分透過(guò)率的變化。因此,當(dāng)中藥成分進(jìn)行超濾時(shí),可以通過(guò)篩選相應(yīng)溶液環(huán)境來(lái)改變成分透過(guò)率,以達(dá)到分離的目的,對(duì)超濾技術(shù)的推廣應(yīng)用有一定借鑒意義。但是,成分存在形式影響超濾行為的變化機(jī)制尚未明確,仍有待作進(jìn)一步分析研究。

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    R284

    B

    1001-1528(2015)12-2775-04

    10.3969/j.issn.1001-1528.2015.12.047

    2014-11-24

    國(guó)家自然科學(xué)基金 (81373980,81503258);江蘇省自然科學(xué)基金青年基金 (BK20151005)

    瞿其揚(yáng) (1990—),男,碩士,研究方向?yàn)橹兴幓瘜W(xué)與分析。Tel:18351895393,E-mail:18351895393@163.com

    *通信作者:彭國(guó)平 (1963—),男,研究員,博士生導(dǎo)師,研究方向?yàn)橹兴幊煞址蛛x精制及新藥研究。Tel: (025)86798186,E-mail:guopingpeng@sohu.com

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