急腹癥Ⅲ號對呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎大鼠內(nèi)毒素及細(xì)胞因子的影響

王瑞明，馮為民，秦舒能，佟麗妍，陳 杰

(杭州市中醫(yī)院 急診科，浙江 杭州 310007)

腸道被認(rèn)為是危重病應(yīng)激的“中心器官”和多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome, MODS)的“始動器”[1]。腸道粘膜屏障是人體抵御外界細(xì)菌入侵的重要屏障，腸道粘膜屏障破壞可導(dǎo)致腸道通透性增高、免疫功能抑制、腸道菌群移位、甚至發(fā)展為MODS[2]。呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎可導(dǎo)致腸道粘膜屏障破壞[3]。祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為肺與大腸相表里，互為絡(luò)屬，互相影響，肺氣不降，津不下達(dá)，腑氣不通。大腸實(shí)熱，腑氣阻滯，亦可影響肺的宣降。急腹癥Ⅲ號是杭州市中醫(yī)院院內(nèi)制劑，基本成分為生大黃、川樸、枳殼、丹參，川芎、生山梔和蒲公英等。急腹癥Ⅲ號主要是根據(jù)《傷寒論》大承氣湯加減化裁而成，具有泄熱通腑，清熱解毒等功效，臨床上多應(yīng)用于熱瘀所致的腑實(shí)證。本研究基于“肺腸表里”理論觀察急腹癥Ⅲ號對呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎大鼠內(nèi)毒素和細(xì)胞因子的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 選用雄性SD大鼠80 只，體重280～320 g，浙江中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號：SYXK(浙)2013-0184。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 光學(xué)顯微鏡(日本Olympus公司)，RM2135型石蠟切片機(jī)(德國徠卡)，低溫高速離心機(jī) (德國Beckman公司)，SX-300S凝膠圖像分析處理系統(tǒng)(上海小源科技有限公司)，高效液相色譜儀(美國water公司)，精密電子天平(德國Sartorius公司)，電泳儀(美國Bio-Rad公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑 急腹癥Ⅲ號由杭州市中醫(yī)院制劑室提供(批準(zhǔn)文號：浙藥制字Z20100112)，谷氨酰胺購自日本壽制藥株式會社，酶聯(lián)免疫吸附法內(nèi)毒素(ET)、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、核因子κB(NF-κB)試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.4 造模方法 參考文獻(xiàn)[4]建立大鼠呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎模型，造模成功的標(biāo)準(zhǔn)：①出現(xiàn)肺炎臨床表現(xiàn)；②肉眼可見大鼠肺葉不同程度的融合性出血性病灶；③光鏡下觀察大鼠肺組織呈小葉性肺炎特征；④外周血和肺泡灌洗液(BALF)細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)呈陽性。

1.5 給藥方法 將大鼠隨機(jī)分為4組各20只。①急腹癥Ⅲ號組：建模大鼠每日灌胃急腹癥Ⅲ號2 mL×5 d；②谷氨酰胺組：建模大鼠每日灌胃谷氨酰胺顆粒2 mL×5 d；③急腹癥Ⅲ號聯(lián)合谷氨酰胺組：建模大鼠灌胃急腹癥Ⅲ號及谷氨酰胺顆粒各2 mL×5 d；④安慰劑組：建模大鼠每日灌胃生理鹽水2 mL×5 d。

1.6 觀測指標(biāo) 給藥5 d后處死大鼠，取門靜脈血3 mL，加10%EDTA搖勻，30 min內(nèi)2000 r/min離心10 min后取上層血漿，-80 ℃凍存待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測大鼠血漿IL-2，IL-6，ET，NF-κB水平。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 17.0軟件分析數(shù)據(jù)，三組間連續(xù)變量差異采用單因素方差分析，采用Tukey’s多重比較法進(jìn)行兩兩比較，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

單因素方法分析結(jié)果顯示，各組大鼠血漿IL-2、IL-6、ET、NF-κB水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩兩比較結(jié)果顯示，急腹癥Ⅲ號組、谷氨酰胺組、急腹癥Ⅲ號聯(lián)合谷氨酰胺組大鼠血漿的IL-2、IL-6、ET水平均低于安慰劑組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；谷氨酰胺組、急腹癥Ⅲ號聯(lián)合谷氨酰胺組大鼠血漿的NF-κB水平低于安慰劑組，急腹癥Ⅲ號聯(lián)合谷氨酰胺組IL-2、ET水平均低于急腹癥Ⅲ號組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組大鼠內(nèi)毒素及細(xì)胞因子比較

注：a與安慰組比較，P<0.05；b與急腹癥Ⅲ號組比較，P<0.05。

3 討論

呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎是指應(yīng)用機(jī)械通氣治療后48 h和停用機(jī)械通氣拔除人工氣道48 h內(nèi)發(fā)生肺實(shí)質(zhì)的感染性炎癥[5]。腸道是機(jī)體最大細(xì)菌和毒素庫，多種原因可導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)，屏障功能破壞，有可能成為呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎患者的菌血癥來源。腸道通透性與危重癥病情呈正相關(guān)，病情越重，腸道通透性越高，而通透性增高又加重病情[6]。腸黏膜屏障的損傷萎縮、機(jī)體免疫功能的下降及腸道菌群失調(diào)都是促進(jìn)細(xì)菌移位的機(jī)制。

內(nèi)毒素及細(xì)胞因子參與了全身嚴(yán)重反應(yīng)綜合征的啟動，激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生炎癥介質(zhì)，最終可導(dǎo)致多臟器功能衰竭[7]。IL-6是機(jī)體創(chuàng)傷和修復(fù)過程中一種重要的急性期反應(yīng)介質(zhì)，可以加劇創(chuàng)傷后炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生[8]。IL-2具有廣泛生物活性，是T細(xì)胞亞群的生長因子，可促進(jìn)活化B細(xì)胞增殖，為調(diào)控免疫應(yīng)答的重要因子，也參與抗體反應(yīng)[9]。內(nèi)毒素對宿主有毒性，當(dāng)細(xì)菌死亡溶解或用人工方法破壞菌細(xì)胞后，內(nèi)毒素釋放出來可導(dǎo)致發(fā)熱反應(yīng)、白細(xì)胞反應(yīng)和內(nèi)毒素休克[10]。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為“肺與大腸相表里”。肺與大腸的表里關(guān)系主要體現(xiàn)在肺氣的肅降和大腸傳導(dǎo)相互為用的關(guān)系。肺氣肅降，氣機(jī)條達(dá)，布散津液，有利于糟粕的排出，同理大腸傳導(dǎo)正常，糟粕下行，也有利于肺氣的肅降。呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎以腑實(shí)證候?yàn)槎啵备拱YⅢ號是杭州市中醫(yī)院院內(nèi)制劑，中醫(yī)認(rèn)為“六腑以通為用”，六腑傳化水谷，需不斷收納、消化、傳導(dǎo)和排泄，虛實(shí)更替，宜通而不宜滯，因此通腑法在腑氣不通及胃腸功能受損方面屢有見效。方中大黃為君，苦寒泄熱，祛瘀通便。大黃作為通腑要藥在《神農(nóng)本草經(jīng)》中早有記載：“蕩滌腸胃，推陳致新，通利水谷，調(diào)中化食，安和五臟”。厚樸，枳殼為臣，行氣除脹，消積導(dǎo)滯，輔以丹參，川芎，生山梔，蒲公英活血祛瘀行氣之功?，F(xiàn)代藥理研究表明：大黃可防治內(nèi)毒素血癥，抑制內(nèi)毒素介導(dǎo)單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子，減少細(xì)胞因子的瀑布效應(yīng)，拮抗全身炎癥反應(yīng)綜合征[11]。藥理研究表明，急腹癥Ⅲ號具有抗凝，抑制血小板粘附、聚集、釋放，擴(kuò)張血管的作用，保護(hù)腸黏膜屏障功能，減少細(xì)菌易位，改善腸黏膜微循環(huán)的作用[12]。

谷氨酰胺可以危重患者減輕腸屏障損害[13]，抑制內(nèi)毒素和細(xì)胞因子的產(chǎn)生，防止腸源性感染，抑制小腸粘膜萎縮。本研究結(jié)果表明：急腹癥Ⅲ號組、谷氨酰胺組、急腹癥Ⅲ號聯(lián)合谷氨酰胺組大鼠血漿的IL-2、IL-6、內(nèi)毒素水平均明顯低于安慰劑組，提示急腹癥Ⅲ號及谷氨酰胺均可抑制內(nèi)毒素和相關(guān)細(xì)胞因子的產(chǎn)生；急腹癥Ⅲ號聯(lián)合使用谷氨酰胺后IL-2、ET水平明顯低于急腹癥Ⅲ號，可能與谷氨酰胺促進(jìn)免疫球蛋白的合成，防止細(xì)菌移位及內(nèi)毒素入血、維持腸道屏障完整性有關(guān)。本研究結(jié)果還需大樣本進(jìn)一步研究證實(shí)，急腹癥Ⅲ號具體作用成分及毒副作用也有待進(jìn)一步研究。