• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    槲皮素對(duì)糖尿病大鼠晶狀體上皮細(xì)胞凋亡的影響*

    2016-09-15 08:54:26劉鵑康剛勁康海軍白夢天蔣燕韓茜
    關(guān)鍵詞:槲皮素晶狀體沖洗

    劉鵑,康剛勁,康海軍,白夢天,蔣燕,韓茜

    (西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院眼科,四川瀘州646000)

    槲皮素對(duì)糖尿病大鼠晶狀體上皮細(xì)胞凋亡的影響*

    劉鵑,康剛勁,康海軍,白夢天,蔣燕,韓茜

    (西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院眼科,四川瀘州646000)

    目的:探討槲皮素對(duì)糖尿病大鼠晶狀體上皮細(xì)胞(lens epithelial cells,LECs)凋亡的影響及機(jī)制。方法:將60只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、糖尿病組、槲皮素組,每組20只。糖尿病組、槲皮素組采用鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)誘導(dǎo)制作糖尿病性白內(nèi)障模型,糖尿病組和對(duì)照組予以常規(guī)飼料喂養(yǎng),槲皮素組則予以50mg/kg/d槲皮素灌胃治療。STE注射后4周、8周、12周檢測大鼠血糖,觀察大鼠晶狀體混濁程度,HE染色觀察大鼠晶狀體上皮細(xì)胞,免疫組織化學(xué)檢測大鼠LECs Bcl-2和Bax的表達(dá),流式細(xì)胞術(shù)檢測大鼠LECs凋亡率。結(jié)果:12周時(shí)糖尿病組、槲皮素組大鼠體重明顯低于對(duì)照組(P<0.05),糖尿病組大鼠體重與槲皮素組之間無明顯差異(P>0.05)。STZ注射后4周時(shí)、8周時(shí)、12周時(shí)對(duì)照組與糖尿病組、槲皮素組血糖比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),糖尿病組與槲皮素組血糖比較無明顯差異(P>0.05)。STZ注射后4周時(shí)、8周、12周時(shí)對(duì)照組、糖尿病組、槲皮素組大鼠晶狀體混濁程度兩兩比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。HE結(jié)果顯示糖尿病組、槲皮素組均可見LECs形態(tài)不規(guī)則,胞質(zhì)疏松,染色淡,后囊區(qū)晶狀體纖維細(xì)胞見大量未被降解的細(xì)胞器。與對(duì)照組比較,糖尿病組和槲皮素組大鼠LECs Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào),Bax蛋白表達(dá)增加,兩組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與槲皮素組比較,糖尿病組大鼠LECs Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào),Bax蛋白表達(dá)增加,兩組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。STZ注射后4周、8周、12周時(shí),各組之間LECs凋亡率兩兩比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:槲皮素對(duì)糖尿病大鼠LECs凋亡有一定的抑制作用,可延緩糖尿病性白內(nèi)障的發(fā)生發(fā)展。

    槲皮素;細(xì)胞凋亡;晶狀體上皮細(xì)胞;糖尿病性白內(nèi)障;Bcl-2;Bax

    1 材料與方法

    1.1 材料與分組

    SD大鼠購自西南醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,散瞳后經(jīng)數(shù)碼裂隙燈顯微鏡檢查晶狀體透明、完整,體重150~180 g。60只SD大鼠隨機(jī)抽取20只為正常對(duì)照組,剩余大鼠成功造糖尿病模型后隨機(jī)分為糖尿病模型組和槲皮素干預(yù)組,每組20只。槲皮素購自華越洋生物公司;鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)和戊巴比妥鈉購自美國Sigma公司;兔抗大鼠Bcl-2和Bax多克隆抗體購自美國Bioworld進(jìn)口分裝;Annexin V-FITC/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒購自美國BD公司;其余試劑購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 糖尿病大鼠模型的建立與槲皮素干預(yù)

    一次性腹腔注射STZ 65 mg/kg誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型,72 h后尾靜脈取血,空腹血糖≥16.7 mmol/L時(shí)為糖尿病造模成功,納入實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組予以常規(guī)飼料喂養(yǎng)。糖尿病組和槲皮素組,STZ注射后第4 d開始槲皮素組大鼠予以槲皮素50 mg/kg/d灌胃。每周稱重一次,調(diào)整槲皮素用量。分別于STE注射后4周、8周各組隨機(jī)斷髓處死5只大鼠,共30只,12周末處死剩余30只。

    1.2.2 觀察大鼠晶狀體混濁情況

    使用復(fù)方托吡卡胺滴眼液散瞳后,予以大鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉麻醉,分別于4周、8周、12周時(shí)用數(shù)碼裂隙燈顯微鏡對(duì)晶狀體混濁情況進(jìn)行觀察、記錄、拍照,分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)參照Bahmani F等對(duì)晶狀體混濁分級(jí),共分為5級(jí)[2]:Ⅰ級(jí):晶狀體無混濁;Ⅱ級(jí):晶狀體輕度混濁,周邊部出現(xiàn)空泡改變;Ⅲ級(jí):晶狀體中度混濁,周邊部空泡向中心區(qū)域擴(kuò)展,核出現(xiàn)霧狀混濁;Ⅳ級(jí):晶狀體高度混濁,周邊空泡擴(kuò)展到核區(qū),核霧狀混濁加重;Ⅴ級(jí):晶狀體全混濁,發(fā)展為完全白內(nèi)障。

    “昆北”去聲字“媚”唱調(diào)(《鐵冠圖·刺虎》【滾繡球】“俺佯嬌假媚”,787)。該單字唱調(diào)的過腔是。其中即第一節(jié)級(jí)音性過腔,即第二節(jié)級(jí)音性過腔,為第三節(jié)級(jí)音性過腔。這個(gè)過腔即為“主調(diào)+級(jí)音+級(jí)音”兩種不同音樂材料組合而成的多節(jié)型過腔。

    1.2.3 HE染色

    將石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化;蘇木素染色,蒸餾水沖洗至水變清;1%鹽酸乙醇分化30 s,褪色至紅色,蒸餾水過洗至恢復(fù)藍(lán)色;0.5%伊紅液染色2 min,蒸餾水沖洗;梯度酒精脫水、二甲苯透明;中性樹膠、蓋玻片封片。光學(xué)顯微鏡下觀察、攝片。

    1.2.4 免疫組織化學(xué)染色檢測大鼠LECs Bcl-2、Bax表達(dá)情況

    切片脫蠟后放在3%H2O2室溫避光孵育10 min,PBS沖洗;切片置于染色架上,再放入0.01 mmol/L枸櫞酸鹽緩沖液容器中,加熱至沸騰,15 min后取出容器,室溫冷卻30 min,PBS沖洗;滴加1滴5%BSA封閉游離結(jié)合位點(diǎn),室溫孵育30 min后棄去血清;滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗(1∶100),在4℃冰箱中過夜,PBS沖洗;滴加適當(dāng)比例稀釋的生物素標(biāo)記的二抗(1∶10),37℃水浴箱孵育30 min,PBS沖洗;滴加適當(dāng)比例稀釋的HRP標(biāo)記的鏈霉親和素,37℃孵育30 min,PBS沖洗;加新鮮配制的DAB顯色,顯微鏡觀察控制染色時(shí)間,見黃褐色斑時(shí)放入雙蒸水中終止顯色;自來水沖洗,蘇木精復(fù)染,鹽酸酒精分化,自來水沖洗;梯度酒精脫水,二甲苯透明;中性樹膠、蓋玻片封片;放入60℃烘箱中烤干,光學(xué)顯微鏡下觀察攝片。

    1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡

    將摘除的晶狀體用平衡液沖洗干凈后,在顯微鏡下從赤道部環(huán)形撕取晶狀體前囊膜,消化后用300目濾網(wǎng)制備成單細(xì)胞懸液;轉(zhuǎn)移細(xì)胞至離心管中,1 000 r/min離心5 min,棄去培養(yǎng)液,PBS洗滌2次;加入預(yù)冷的結(jié)合緩沖液,調(diào)整細(xì)胞密度為1× 106/mL;按照Annexin V-FITC凋亡檢測試劑盒說明書加入Annexin V-FITC液5 uL和PI 10 uL,輕輕充分混勻,室溫(20°C~25°C)避光染色15 min;PBS洗滌多余染料后,在1 h內(nèi)進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    采用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料采用x±s表示。多個(gè)樣本均數(shù)之間比較采用單因素方差分析(ONE-WAY AONVA),兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。等級(jí)資料等級(jí)秩和檢驗(yàn)。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 大鼠晶狀體混濁程度

    各組大鼠晶狀體混濁情況,見表1。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中,對(duì)照組始終保持晶狀體透明、完整。STZ注射后4周糖尿病組、槲皮素組大鼠均開始出現(xiàn)不同程度的晶狀體混濁,且晶狀體混濁程度隨實(shí)驗(yàn)進(jìn)行逐漸加重。8周時(shí),糖尿病組大鼠晶狀體混濁程度較槲皮素組重。12周時(shí),糖尿病組大鼠全部出現(xiàn)不同程度的晶狀體混濁,槲皮素組大鼠晶狀體混濁發(fā)展速度及混濁程度均較糖尿病組輕,實(shí)驗(yàn)結(jié)束仍未見1只晶狀體發(fā)生Ⅴ級(jí)改變。4周、8周、12周時(shí)三組間晶狀體混濁情況兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    表1 在各時(shí)間點(diǎn)各組大鼠晶狀體混濁程度(單位:只)

    2.2 大鼠晶狀體HE染色

    對(duì)照組LECs形態(tài)規(guī)則,分布均勻,相鄰細(xì)胞及與晶狀體囊膜緊密結(jié)合,細(xì)胞核呈橢圓形,染色質(zhì)均勻無凝縮,晶狀體纖維細(xì)胞未見異常。而在糖尿病組、槲皮素組均可見LECs形態(tài)不規(guī)則,多呈扁平狀或柱狀,胞質(zhì)疏松,染色淡,可見空泡,細(xì)胞核縮小,核內(nèi)染色質(zhì)不均勻、濃縮,后囊區(qū)晶狀體纖維細(xì)胞見大量未被降解的細(xì)胞器,見圖1。

    圖1 各組晶狀體HE染色(×200)

    2.3 大鼠晶狀體上皮細(xì)胞Bcl-2、Bax表達(dá)情況

    各組大鼠LECs Bcl-2、Bax表達(dá)情況。光學(xué)顯微鏡下觀察陽性表達(dá)為細(xì)胞質(zhì)中見黃色或棕黃色顆粒,否則為陰性。陽性細(xì)胞率=5個(gè)視野內(nèi)陽性細(xì)胞總數(shù)/5個(gè)視野內(nèi)細(xì)胞總數(shù)×100%,每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野進(jìn)行觀察及記錄陽性細(xì)胞率。規(guī)定陽性表達(dá)率:0%為陰性(-);1%~25%為弱陽性(+);26%~50%為陽性(++);>50%為強(qiáng)陽性(+++)。正常大鼠LECs均表達(dá)少量的Bcl-2、Bax,胞漿內(nèi)均可見少量棕黃色顆粒。STZ注射后4周、8周、12周時(shí)槲皮素組Bcl-2蛋白的陽性表達(dá)較糖尿病組增強(qiáng)(P<0.05),但較對(duì)照組下降(P<0.05),同一時(shí)間點(diǎn)槲皮素組Bax蛋白的表達(dá)較糖尿病組下降(P<0.05),但較對(duì)照組增強(qiáng)(P<0.05)。見圖2、3,表2、3。

    圖2 免疫組化顯示Bcl-2的表達(dá)(×200)

    表2 各組大鼠晶狀體上皮細(xì)胞Bcl-2表達(dá)情況(n=5)

    表3 各組大鼠晶狀體上皮細(xì)胞Bax表達(dá)情況(n=5)

    2.4 大鼠晶狀體上皮細(xì)胞凋亡率

    各組大鼠LECs凋亡情況,STE注射后4周、8周、12周時(shí)糖尿病組大鼠LECs的凋亡率顯著高于對(duì)照組,而槲皮素組細(xì)胞凋亡率較糖尿病組顯著降低,但仍高于對(duì)照組。各時(shí)間點(diǎn)三組之間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表4。

    表4 各組大鼠晶狀體上皮細(xì)胞凋亡率(%)

    圖3 免疫組化顯示Bax的表達(dá)(×200)

    3 討論

    糖尿病病人晶狀體上皮細(xì)胞凋亡的發(fā)生發(fā)展是多種因素綜合作用的結(jié)果,糖尿病最早攻擊LECs,LECs能自主發(fā)生凋亡并可自我調(diào)節(jié)來抑制過度凋亡,而在高血糖刺激下產(chǎn)生的高氧化、高滲透壓等將破壞LECs凋亡與增殖的平衡,從而引起LECs過度凋亡,并由此釋放一系列物質(zhì)產(chǎn)生級(jí)聯(lián)反應(yīng),如Ca2+流入、半胱氨酸酶激活、晶狀體蛋白變性、細(xì)胞骨架降解、水和電解質(zhì)滲入等,晶狀體的穩(wěn)定性破壞,內(nèi)壞境代謝失衡,最終導(dǎo)致白內(nèi)障發(fā)生[1-3]。

    槲皮素可通過抑制LECs的凋亡過程而對(duì)晶狀體發(fā)揮保護(hù)作用。研究表明[4]槲皮素可明顯降低老年性白內(nèi)障的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。紫外線誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡是通過LECs DNA氧化性損傷引起的,槲皮素則可以在細(xì)胞遭受紫外線輻射前或后起到輻射防護(hù)的作用。Yao等[5]發(fā)現(xiàn),紫外照射體外培養(yǎng)的LECs會(huì)誘導(dǎo)目標(biāo)分子如p38蛋白、JNK蛋白的磷酸化,激活核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB,MAPK家族等信號(hào)通路的活化,從而誘發(fā)LECs凋亡。Michael等[6]對(duì)大鼠晶狀體紫外線照射發(fā)現(xiàn),當(dāng)LECs受到的損傷超過自我調(diào)節(jié)的能力時(shí),細(xì)胞就會(huì)發(fā)生凋亡。Cao等[7]在觀察DMSO和槲皮素共同作用于LECs的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),0.1 umol/L濃度的槲皮素可一定程度上抑制DMSO對(duì)LECs的破壞。Milackova I等[8]在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,大鼠晶狀體在高糖中處理后,槲皮素衍生物可顯著降低山梨糖醇的含量,認(rèn)為槲皮素可能對(duì)高糖誘導(dǎo)的人LECs的凋亡有保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),同一時(shí)間點(diǎn)糖尿病組晶狀體混濁程度均明顯高于對(duì)照組,槲皮素組又輕于糖尿病組。并且糖尿病組LECs凋亡率明顯高于對(duì)照組,而槲皮素組較糖尿病組低。表明隨著糖尿病性白內(nèi)障病情加重,LECs凋亡增加,予以槲皮素干預(yù)治療糖尿病大鼠后,LECs凋亡程度降低,證實(shí)槲皮素在一定程度上可抑制LECs凋亡的發(fā)生發(fā)展。

    Bcl-2家族是最早研究的凋亡相關(guān)基因,Bcl-2抑制細(xì)胞凋亡,Bax促進(jìn)細(xì)胞凋亡,Bcl-2和Bax是主要的細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)蛋白,Bcl-2與Bax的比值決定著細(xì)胞的存亡,其它一切凋亡相關(guān)基因?qū)?xì)胞凋亡的作用都取決于Bcl-2與Bax比值的變化。因此,Bcl-2/Bax是目前細(xì)胞凋亡研究的熱點(diǎn)之一,在細(xì)胞凋亡中決定細(xì)胞存活與凋亡的方向[9]。它們主要通過線粒體途徑進(jìn)行細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié),Bcl-2主要在線粒體外膜執(zhí)行功能,對(duì)于維持膜完整性起重要作用,而Bax破壞膜完整性。當(dāng)細(xì)胞收到凋亡信號(hào),被置換出來的Bax使線粒體膜通透性增加,促凋亡蛋白如cyt-c等及一些細(xì)胞因子進(jìn)入細(xì)胞質(zhì),引起細(xì)胞凋亡。在此過程中Bcl-2和Bax以同/異二聚體的形式參與細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)。當(dāng)受到某種刺激(槲皮素干預(yù))時(shí),Bcl-2增多,將與Bax形成異二聚體,妨礙Bax之間形成同二聚體而使Bax減少,細(xì)胞免于凋亡;相反,若Bax增多,Bax形成同二聚體增多,細(xì)胞發(fā)生凋亡。有研究報(bào)道,轉(zhuǎn)染Bcl-2能抑制如藥物、加熱、輻射等誘因引起的多種細(xì)胞凋亡[10]。Mao等[11]在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),Bcl-2通過減少β-晶狀體蛋白,減弱H2O2誘導(dǎo)的兔LECs的凋亡。并且有研究證明[12],蘆丁可下調(diào)Bax表達(dá),上調(diào)Bcl-2表達(dá),保護(hù)晶狀體上皮細(xì)胞。已有研究者認(rèn)為[13],Bax在硅油眼中對(duì)晶狀體上皮細(xì)胞的凋亡起至關(guān)重要的作用。有研究者認(rèn)為,通過改變Bcl-2/Bax的比值可能抑制糖尿病大鼠晶狀體上皮細(xì)胞的凋亡[14]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,糖尿病組與對(duì)照組比較,Bcl-2降低,Bax升高,表明Bcl-2和Bax的改變在糖尿病性白內(nèi)障發(fā)生過程起重要作用,能起到調(diào)節(jié)LECs凋亡的作用。本實(shí)驗(yàn)通過免疫組化檢測Bcl-2、Bax發(fā)現(xiàn),高糖可引起晶狀體上皮細(xì)胞凋亡。槲皮素組與糖尿病組比較,Bcl-2降低及Bax升高幅度更小,提示槲皮素通過引起B(yǎng)cl-2和Bax的改變來抑制晶狀體上皮細(xì)胞的凋亡。

    綜上所述,槲皮素對(duì)糖尿病大鼠LECs凋亡有一定的抑制作用,可延緩糖尿病性白內(nèi)障的發(fā)生發(fā)展,作用機(jī)制可能是通過降低Bax的表達(dá),增強(qiáng)Bcl-2的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。但槲皮素難溶于水,不利于機(jī)體吸收及利用,其溶劑的毒性也將限制其應(yīng)用,如二甲基亞砜可導(dǎo)致溶血、肝腎毒性等,最近有將生物可降解的微粒與槲皮素共同制備成膠囊,不僅增加其吸收,還可延長槲皮素的釋放周期;槲皮素對(duì)晶狀體保護(hù)作用的研究尚不完善,確切的有效濃度、最大濃度、組織毒性等尚無定論;大部分研究仍處于臨床前階段,要廣泛用于臨床還需進(jìn)一步在作用濃度、組織毒性、作用途徑、劑型等方面進(jìn)行探索和研究。

    1.Kim J,Kim OS,Kim CS,et al.Accumulation of argpyrimidine a methylglyoxal-derived advanced glycation end product,increases apoptosis of lens epithelial cells both in vitro and in vivo[J].Exp Mol Med,2012,44(2):167-175.

    2.Bahmani F,Bathaie SZ,Aldavood SJ,et al.Glycine therapy inhabits the progression of cataract in streptozotocininduced diabetic rats[J].Mol Vis,2012,18:439-448.

    3.Li Y,Jia Y,Zhou J,et al.Effect of methionine sulfoxide reductase B1 silencing on high-glucose-induced apoptosis of human lens epithelial cells[J].Life Sci,2013,92(3): 193-201.

    4.Ma Y,Gao W,Wu K,et al.Flavonoid intake and the risk of age-related cataract in China's Heilongjiang Province [J].Food Nutr Res,2015,11(59):29564.

    5.Yao K,Zhang L,Zhang Y,et al.The flavonoid,fisetin,inhibits UV radiation-induced oxidative stress and the activation of NF-kappaB and MAPK signaling in human lens epithelial cells[J].Mol Vis,2008,14:1865-1871.

    6.Michael R,Vrensen GF,Van Marle J,et al.Apoptosis in the rat lens after in vivo threshold dose ultraviolet irradiation[J].Invest Ophthalmol Vis Sci,1998,39(13):2681-2687.

    7.Cao XG,Li XX,Bao YZ,et al.Responses of human lens epithelial cells to quercetin and DMSO[J].Invest Ophthalmol Vis Sci,2007,48(8):3714-3718.

    8.Milackova I,Prnova MS,Majekova M,et al.2-Chloro-1,4-naphthoquinone derivative of quercetin as an inhibitor of aldose reductase and anti-inflammatory agent[J]. Enzyme Inhib Med Chem,2015,30(1):107-113.

    9.Korkmaz D,Bastu E,Dural O,et al.Apoptosis through regulation of Bcl-2,Bax and Mcl-1 expressions in endometriotic cyst lesions and the endometrium of women with moderate to severe endometriosis[J].J Obstet Gynaecol,2013,33(7):725-728.

    10.Huang YL,Chou CK.Bcl-2 blocks apoptosis signal of transforming growth factor in human hepatoma cells[J].J Biomed Sci,1998,5(3):185-191.

    11.Mao YW,Xiang H,Wang J,et al.Human Bcl-2 gene attenuates the ability if rabbit lens epithelial cells against H2O2-induced apoptosis through down-regulation if the alpha B crystalline gene[J].J Biol Chem,2001,276(46): 43435-43445.

    12.Zhou YF,Guo B,Ye MJ,et al.Protective Effect of Rutin Against H2O2-Induced Oxidative Stress and Apoptosis in Human Lens Epithelial Cells[J].Curr Eye Res,2015,41(7):1-10.

    13.Zhu L,Zhao K,Luo D.Apoptosis Factors of Lens Epithelial Cells Responsible for Cataractogenesis in Vitrectomized Eyes with Silicone Oil Tamponade[J].Med Sci Monit, 2016,9(22):788-796.

    14.Ou Y,Yuan Z,Li K,et al.Phycocyanin may suppress D-galactose-induced human lens epithelial cell apoptosis throughmitochondrialandunfoldedproteinresponse pathways[J].Toxicol Lett,2012,215(1):25-30.

    (2016-05-30收稿)

    Apoptotic effect of quercetin on len epithelial cells in diabetic rats

    Liu Juan,Kang Gangjin,Kang Haijun,Bai Mengtian,Jiang Yan,Han Qian
    Department of Ophthalmology,the Affiliated Hospital of Southwest Medical University,Luzhou,Sichuan Province 646000,China

    Quercetin;Cell apoptosis;Lens epithelial cells;Diabetic cataract;Bcl-2;Bax

    R776.1

    A

    10.3969/j.issn.1000-2669.2016.06.017

    *西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院國際合作課題(2011-43)

    劉鵑(1988-),女,碩士,住院醫(yī)師

    康剛勁(1968-),女,碩士,教授。E-mail:929460414@qq.com

    Astract Objective:To explore the apoptotic effect and the underlying molecular mechanism of quercetin on len epithelial cells in diabetic rats induced by STZ.Methods:60 SD rats were randomly divided into normal control group,diabetic model group and QUE treatment group,with 20 in each group.The rats in control group were maintained normally,and the other 40 rats were given intraperitoneal injection of 1%Stretozocin(STZ)to induce the diabetic cataract rats.The model group was maintained normally,and QUE group was given 50 mg/kg QUE by gavage every day.At 4,8,and 12 weeks after STZ injection,the blood glucose level was measured,the changes of lens opacity were evaluated,the morphology of LECs was observed by HE staining,the expression of Bcl-2 and Bax in LECs were analyzed by immunohistochemical,and the apoptotic ratio of LECs was measured by flow cytometry.Results:At 12 weeks,the average body weight in the model group and QUE group was significantly lower than that of control group(P<0.05),whereas there was no statistical difference between model group and treatment group(P>0.05).At 4,8,and 12 weeks,the blood glucose level in the model group and QUE group was significantly higher than in the control group(P<0.05),whereas there was no statistical difference between model group and treatment group(P>0.05).The degree of len opacity after STZ at 4th,8th,and 12th week was statistical different among groups(P<0.05),with the QUE group severer than control group(P<0.05)and model group severer than QUE group(P<0.05).HE results showed that LECs were irregular in morphology, loose and lightly stained in cytoplasm,contained many non-degraded organelles in the fibroblasts of the posterior capsule in both model group and treatment group.Compared with the control group,the protein expression of Bcl-2 in the model group and QUE group was reduced and the protein expression of Bax was up-regulated(P<0.05). Compared with the QUE group,the protein expression of Bcl-2 in the model group was reduced and the protein expression of Bax was up-regulated(P<0.05).At 4,8 and 12 weeks,the differences of the apoptotic rate in each group were statistically significant between any two groups(P<0.05).Conclusion:QUE can inhibit LECs apoptosis and delay the occurrence and the development of diabetic cataract in diabetic rats.

    猜你喜歡
    槲皮素晶狀體沖洗
    鼻腔需要沖洗嗎?
    外傷性晶狀體半脫位的CT 表現(xiàn)
    Notice of the 6th International Academic Conference on Sleep Medicine & Reelection of the Third Board of Directors of Sleep Medicine Specialty Committee,WFCMS
    玻璃體切除聯(lián)合晶狀體超聲粉碎在合并晶狀體脫位眼外傷中的應(yīng)用
    槲皮素改善大鼠銅綠假單胞菌肺感染
    中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:21
    不同沖洗劑對(duì)樁道玷污層清除能力的體外研究
    槲皮素通過抑制蛋白酶體活性減輕心肌細(xì)胞肥大
    人工晶狀體鞏膜縫線固定術(shù)矯正兒童玻璃體切割術(shù)后無晶狀體眼療效分析
    有晶狀體眼ICL植入矯正高度近視
    邦鼻凈鼻腔沖洗治療慢性鼻-鼻竇炎的療效觀察
    草草在线视频免费看| 午夜福利在线观看吧| www.www免费av| 男插女下体视频免费在线播放| 禁无遮挡网站| 欧美色视频一区免费| 午夜精品久久久久久毛片777| 精品熟女少妇八av免费久了| 99精品久久久久人妻精品| 国内精品久久久久久久电影| 欧美3d第一页| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲第一电影网av| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 真人做人爱边吃奶动态| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 黄色成人免费大全| 麻豆久久精品国产亚洲av| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产真人三级小视频在线观看| 少妇被粗大的猛进出69影院| 两个人免费观看高清视频| 波多野结衣高清作品| 丁香欧美五月| 一级a爱片免费观看的视频| 熟女电影av网| 精品福利观看| 悠悠久久av| 国产成年人精品一区二区| 桃红色精品国产亚洲av| 高潮久久久久久久久久久不卡| 岛国在线观看网站| 亚洲国产精品合色在线| 国产精品免费视频内射| 三级国产精品欧美在线观看 | 村上凉子中文字幕在线| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲av电影在线进入| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲熟妇熟女久久| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 久久精品国产综合久久久| 波多野结衣巨乳人妻| 免费观看精品视频网站| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 国产视频内射| 女人被狂操c到高潮| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 欧美高清成人免费视频www| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产精品av久久久久免费| 很黄的视频免费| 免费一级毛片在线播放高清视频| 男女午夜视频在线观看| 久久久久久久精品吃奶| 欧美大码av| 午夜两性在线视频| 国产在线观看jvid| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 日本 av在线| 亚洲精品美女久久av网站| 国产午夜精品久久久久久| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 成人精品一区二区免费| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲精品中文字幕在线视频| 色在线成人网| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产av在哪里看| 精品国产美女av久久久久小说| 久久精品综合一区二区三区| 精品国产乱码久久久久久男人| 在线观看午夜福利视频| 99久久国产精品久久久| 亚洲国产精品久久男人天堂| 脱女人内裤的视频| 岛国在线观看网站| 午夜视频精品福利| 欧美黑人精品巨大| 久久精品综合一区二区三区| 久久亚洲真实| 国产成人aa在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 看片在线看免费视频| 一区二区三区国产精品乱码| 国产激情欧美一区二区| 可以在线观看毛片的网站| 一本大道久久a久久精品| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 日韩欧美国产一区二区入口| 在线永久观看黄色视频| or卡值多少钱| 日韩高清综合在线| 亚洲免费av在线视频| 午夜久久久久精精品| 久久精品国产综合久久久| 白带黄色成豆腐渣| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 久久久久久久午夜电影| 一级片免费观看大全| 无人区码免费观看不卡| 在线播放国产精品三级| 成人永久免费在线观看视频| 日本黄大片高清| 亚洲国产看品久久| 色综合站精品国产| 久久精品成人免费网站| 最新在线观看一区二区三区| 黑人欧美特级aaaaaa片| 不卡av一区二区三区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲国产精品999在线| 一二三四社区在线视频社区8| 国产高清有码在线观看视频 | 国产1区2区3区精品| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 久久国产精品影院| 亚洲自拍偷在线| 一二三四社区在线视频社区8| 成人午夜高清在线视频| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 可以免费在线观看a视频的电影网站| 一级毛片女人18水好多| 欧美日韩精品网址| 男人舔女人的私密视频| 国产私拍福利视频在线观看| 听说在线观看完整版免费高清| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 一级毛片精品| 中文字幕高清在线视频| 不卡av一区二区三区| 国内精品一区二区在线观看| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲国产看品久久| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲五月婷婷丁香| www.精华液| 欧美日韩国产亚洲二区| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产免费av片在线观看野外av| 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 久久伊人香网站| 99国产精品一区二区三区| 国产爱豆传媒在线观看 | 淫妇啪啪啪对白视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产三级在线视频| 亚洲熟妇熟女久久| 毛片女人毛片| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 看黄色毛片网站| 精品不卡国产一区二区三区| 神马国产精品三级电影在线观看 | 日本一本二区三区精品| 免费看a级黄色片| 久久久久久久精品吃奶| 99精品在免费线老司机午夜| 在线视频色国产色| 国产av又大| 99久久99久久久精品蜜桃| 欧美av亚洲av综合av国产av| 久9热在线精品视频| 国产熟女xx| 国产精品av视频在线免费观看| 成人手机av| 国产成人精品久久二区二区免费| avwww免费| 成年人黄色毛片网站| 人人妻人人看人人澡| 国产一区二区在线观看日韩 | 亚洲国产欧洲综合997久久,| 婷婷丁香在线五月| 国产99白浆流出| 国产精品av久久久久免费| 日本在线视频免费播放| 亚洲乱码一区二区免费版| 久久精品91无色码中文字幕| 国产伦在线观看视频一区| 在线永久观看黄色视频| 首页视频小说图片口味搜索| 午夜视频精品福利| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 亚洲国产欧美一区二区综合| 一级毛片高清免费大全| 欧美午夜高清在线| 狂野欧美激情性xxxx| 一区二区三区激情视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 91大片在线观看| 亚洲真实伦在线观看| av超薄肉色丝袜交足视频| 日日夜夜操网爽| av国产免费在线观看| 黄片大片在线免费观看| 757午夜福利合集在线观看| 深夜精品福利| 国产激情久久老熟女| 国产精品综合久久久久久久免费| 制服丝袜大香蕉在线| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产精品影院久久| 制服诱惑二区| 国产乱人伦免费视频| 黄色视频不卡| 制服人妻中文乱码| 五月伊人婷婷丁香| 午夜老司机福利片| 国产黄片美女视频| 久久热在线av| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产成人aa在线观看| 精品福利观看| 国产精品爽爽va在线观看网站| 日韩欧美在线二视频| 成人av一区二区三区在线看| 国产成人精品无人区| 欧美国产日韩亚洲一区| 欧美精品啪啪一区二区三区| 12—13女人毛片做爰片一| 免费在线观看完整版高清| 色播亚洲综合网| 国产久久久一区二区三区| 亚洲国产精品合色在线| 一a级毛片在线观看| 久久久久久久午夜电影| 麻豆成人午夜福利视频| 久久热在线av| 久久国产精品影院| 1024香蕉在线观看| a在线观看视频网站| 黄色丝袜av网址大全| 激情在线观看视频在线高清| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产三级黄色录像| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 成人18禁在线播放| 黄色成人免费大全| 免费av毛片视频| 亚洲黑人精品在线| 午夜成年电影在线免费观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 日本 av在线| 丝袜人妻中文字幕| 午夜久久久久精精品| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产又色又爽无遮挡免费看| а√天堂www在线а√下载| 欧美中文日本在线观看视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| av欧美777| 午夜福利在线观看吧| 观看免费一级毛片| 日韩欧美 国产精品| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 久久香蕉激情| 国产激情偷乱视频一区二区| 午夜免费成人在线视频| 一个人免费在线观看电影 | 亚洲欧美激情综合另类| 亚洲一区二区三区不卡视频| 一级a爱片免费观看的视频| 啪啪无遮挡十八禁网站| 级片在线观看| 国产一区二区三区视频了| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲国产欧美网| 免费在线观看影片大全网站| 十八禁网站免费在线| 国产av又大| 色综合婷婷激情| 国产在线观看jvid| 久久精品91无色码中文字幕| 久久久久久久久免费视频了| 免费在线观看影片大全网站| 叶爱在线成人免费视频播放| 国内精品久久久久久久电影| 一本综合久久免费| 国产一区二区在线观看日韩 | 亚洲色图av天堂| 丰满的人妻完整版| 最近在线观看免费完整版| 人人妻人人看人人澡| 国产精品久久久av美女十八| 最近最新免费中文字幕在线| 91老司机精品| 此物有八面人人有两片| 国产午夜精品久久久久久| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产精品av视频在线免费观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲国产欧美网| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 又大又爽又粗| 丁香六月欧美| 无遮挡黄片免费观看| 老鸭窝网址在线观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产熟女xx| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久久久国内视频| 成人一区二区视频在线观看| 久久人人精品亚洲av| 黄频高清免费视频| 日本在线视频免费播放| 12—13女人毛片做爰片一| 99国产综合亚洲精品| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 麻豆国产97在线/欧美 | 老熟妇乱子伦视频在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 一本久久中文字幕| 麻豆一二三区av精品| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| a级毛片在线看网站| 日日爽夜夜爽网站| 波多野结衣高清无吗| 成人午夜高清在线视频| 亚洲av成人精品一区久久| 午夜免费成人在线视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 嫩草影视91久久| 大型av网站在线播放| 国产成人av激情在线播放| 国产亚洲精品第一综合不卡| 亚洲精华国产精华精| 国产精品电影一区二区三区| 国产精品久久久av美女十八| 禁无遮挡网站| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 久久久久久久久久黄片| 美女 人体艺术 gogo| 日韩精品中文字幕看吧| 欧美黄色片欧美黄色片| 在线看三级毛片| 一级黄色大片毛片| 90打野战视频偷拍视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 一进一出抽搐gif免费好疼| 日韩欧美免费精品| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 大型黄色视频在线免费观看| 成人午夜高清在线视频| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲色图av天堂| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产精品 国内视频| 日日夜夜操网爽| avwww免费| 免费在线观看黄色视频的| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 免费人成视频x8x8入口观看| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲成人精品中文字幕电影| 在线观看免费日韩欧美大片| 中文资源天堂在线| 精品国产美女av久久久久小说| 精品无人区乱码1区二区| av福利片在线观看| 十八禁网站免费在线| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产精品一区二区精品视频观看| 变态另类丝袜制服| 亚洲免费av在线视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 久久精品影院6| 99久久综合精品五月天人人| 久久精品91蜜桃| 露出奶头的视频| 日本三级黄在线观看| 好男人电影高清在线观看| 国产成人精品无人区| 免费在线观看日本一区| 在线视频色国产色| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲午夜理论影院| 久久天堂一区二区三区四区| 免费在线观看成人毛片| 久久国产精品影院| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产高清videossex| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲国产精品成人综合色| 级片在线观看| 久久精品人妻少妇| 大型av网站在线播放| 免费观看精品视频网站| av国产免费在线观看| 最近在线观看免费完整版| 亚洲欧美日韩东京热| 88av欧美| 成年女人毛片免费观看观看9| 欧美成人午夜精品| 亚洲性夜色夜夜综合| www.精华液| 亚洲专区中文字幕在线| 欧美在线一区亚洲| 国产1区2区3区精品| 99久久精品热视频| 可以在线观看的亚洲视频| 日韩国内少妇激情av| 宅男免费午夜| 男人的好看免费观看在线视频 | 五月伊人婷婷丁香| 男女之事视频高清在线观看| 免费看日本二区| 人妻夜夜爽99麻豆av| av视频在线观看入口| 免费一级毛片在线播放高清视频| 亚洲美女视频黄频| x7x7x7水蜜桃| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 久久久精品欧美日韩精品| 最新美女视频免费是黄的| 村上凉子中文字幕在线| 真人一进一出gif抽搐免费| 日本熟妇午夜| 床上黄色一级片| 一本精品99久久精品77| 国产在线观看jvid| 日本一区二区免费在线视频| 亚洲成人免费电影在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 日韩中文字幕欧美一区二区| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产探花在线观看一区二区| 草草在线视频免费看| 国产视频内射| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 人成视频在线观看免费观看| 国产亚洲精品av在线| 1024香蕉在线观看| 99久久综合精品五月天人人| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 亚洲精品久久国产高清桃花| 中文字幕av在线有码专区| 久久99热这里只有精品18| 免费在线观看亚洲国产| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲黑人精品在线| 一区二区三区国产精品乱码| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 午夜老司机福利片| 国产成人精品无人区| 99国产精品99久久久久| 香蕉av资源在线| 人妻久久中文字幕网| 男女午夜视频在线观看| 一进一出抽搐动态| 日本黄大片高清| 一边摸一边抽搐一进一小说| 白带黄色成豆腐渣| 黄频高清免费视频| 久久精品国产综合久久久| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 欧美久久黑人一区二区| 久久99热这里只有精品18| 色综合欧美亚洲国产小说| 日本五十路高清| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 免费观看精品视频网站| 黄片小视频在线播放| 色尼玛亚洲综合影院| 一a级毛片在线观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 亚洲真实伦在线观看| 女警被强在线播放| 三级国产精品欧美在线观看 | x7x7x7水蜜桃| 亚洲全国av大片| 午夜精品久久久久久毛片777| 久久久久久免费高清国产稀缺| 久久精品91无色码中文字幕| 国产精品99久久99久久久不卡| 岛国在线免费视频观看| 亚洲专区字幕在线| 极品教师在线免费播放| 伦理电影免费视频| 国产三级在线视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 999久久久国产精品视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产午夜福利久久久久久| 日韩大码丰满熟妇| 国产视频一区二区在线看| 亚洲黑人精品在线| 曰老女人黄片| 色播亚洲综合网| 婷婷亚洲欧美| 精品不卡国产一区二区三区| 一夜夜www| 人人妻人人看人人澡| 麻豆国产97在线/欧美 | 神马国产精品三级电影在线观看 | 精品电影一区二区在线| 欧美日韩一级在线毛片| 我的老师免费观看完整版| 成年人黄色毛片网站| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | videosex国产| 国产成人精品久久二区二区免费| 91成年电影在线观看| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲性夜色夜夜综合| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲人成77777在线视频| 天堂av国产一区二区熟女人妻 | 老司机午夜福利在线观看视频| 美女大奶头视频| 色av中文字幕| 美女午夜性视频免费| 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲欧美日韩无卡精品| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产69精品久久久久777片 | 他把我摸到了高潮在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 99久久精品热视频| 色尼玛亚洲综合影院| 宅男免费午夜| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲18禁久久av| 国产激情欧美一区二区| 欧美性猛交黑人性爽| 搡老熟女国产l中国老女人| 俄罗斯特黄特色一大片| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 听说在线观看完整版免费高清| 午夜日韩欧美国产| 天天添夜夜摸| 搞女人的毛片| cao死你这个sao货| 又紧又爽又黄一区二区| 黄片大片在线免费观看| 老汉色∧v一级毛片| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 国产伦在线观看视频一区| 丝袜美腿诱惑在线| 亚洲一区二区三区不卡视频| 一个人免费在线观看电影 | 精品一区二区三区视频在线观看免费| 午夜精品在线福利| 久久久久久人人人人人| 很黄的视频免费| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲欧美精品综合久久99| av在线播放免费不卡| 国产久久久一区二区三区| 国产精品一及| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 99国产精品99久久久久| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产午夜精品论理片| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产精品一区二区精品视频观看| 中国美女看黄片| 久久香蕉精品热| 久9热在线精品视频| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产成人欧美在线观看| avwww免费| 久久人妻av系列| 国产一区二区在线av高清观看| 9191精品国产免费久久| 一夜夜www| 欧美精品亚洲一区二区| 久久亚洲真实| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 久99久视频精品免费| 亚洲自拍偷在线| √禁漫天堂资源中文www| 美女黄网站色视频| 日日夜夜操网爽| or卡值多少钱| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久精品91蜜桃| 亚洲人成伊人成综合网2020| 久久国产乱子伦精品免费另类| 日韩欧美在线二视频| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲av片天天在线观看| 国产高清有码在线观看视频 | 99精品欧美一区二区三区四区| 国产精品野战在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 欧美日韩黄片免| 精品无人区乱码1区二区| av国产免费在线观看| 国产高清videossex| 哪里可以看免费的av片| 9191精品国产免费久久| 69av精品久久久久久| 亚洲精品在线美女| x7x7x7水蜜桃| 国内揄拍国产精品人妻在线| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 成人永久免费在线观看视频| 中亚洲国语对白在线视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 一进一出抽搐动态| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产精品 欧美亚洲| 国产高清视频在线观看网站|