翁瀝通膠囊含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)定

楊建龍 韓晶 曲艷麗 蔡廣知 貢濟(jì)宇*

（1長(zhǎng)春市食品藥品檢驗(yàn)中心中藥室，長(zhǎng)春13 0 0 12；2吉林省食品檢驗(yàn)所檢驗(yàn)二部，長(zhǎng)春13 0 10 3；3長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長(zhǎng)春13 0 11 7）

翁瀝通膠囊含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)定

楊建龍1韓晶2曲艷麗1蔡廣知3貢濟(jì)宇3*

（1長(zhǎng)春市食品藥品檢驗(yàn)中心中藥室，長(zhǎng)春13 0 0 12；2吉林省食品檢驗(yàn)所檢驗(yàn)二部，長(zhǎng)春13 0 10 3；3長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長(zhǎng)春13 0 11 7）

目的提高翁瀝通膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，建立翁瀝通膠囊中貝母素乙的含量測(cè)定方法。方法采用A g i l e n t T C-C 18（4.6 m m×15 0 m m，5 μm）色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-0.1%三乙胺溶液（6 5∶3 5），E L S D參數(shù)：漂移管溫度：8 5℃，載氣流量：2.3 L· m i n-1。結(jié)果采用該方法測(cè)定貝母素乙的線性范圍為0.77 9～7.7 9 2 μg，貝母素乙的回歸方程為：Y=1.4 4 6 6 x+1.5 0 5 6，r=0.9 9 7，平均回收率是9 6.4 2%，R S D=1.1%，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性良好。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便易行，準(zhǔn)確性高，結(jié)果可靠，能準(zhǔn)確反映出翁瀝通膠囊的質(zhì)量，為藥典中增加翁瀝通膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。

H P L C-E L S D；貝母素乙；含量測(cè)定

翁瀝通膠囊是由薏苡仁、浙貝母、梔子、金銀花等中藥組成的復(fù)方制劑，具有清熱利濕，散結(jié)去瘀的功效。用于證屬濕熱雍結(jié)，痰瘀交阻之前列腺增生癥［1］。本品收載于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBZ09432004，規(guī)格為0.4 g/粒，標(biāo)準(zhǔn)收載了貝母素乙的薄層掃描法含量測(cè)定，掃描波長(zhǎng)為500 nm，參比波長(zhǎng)為650 nm，在實(shí)際操作過(guò)程中發(fā)現(xiàn)該標(biāo)準(zhǔn)影響因素較多，顯色后掃描，受時(shí)間影響較大，靈敏度較低，精密度和重現(xiàn)性極差，無(wú)法準(zhǔn)確反映出翁瀝通膠囊中貝母素乙的含量［2］。由于翁瀝通膠囊中的指標(biāo)性成分貝母素乙為生物堿，僅有一個(gè)雙鍵，缺少典型的共軛體系［3］，只有末端吸收，在紫外區(qū)域沒(méi)有合適的適用于含量測(cè)定的紫外吸收范圍，受溶劑吸收影響較大，無(wú)法通過(guò)紫外檢測(cè)器檢測(cè)到。因此通過(guò)LC分離，最終采用蒸發(fā)光檢測(cè)器檢測(cè)是較好的選擇。

采用高效液相色譜法測(cè)定翁瀝通膠囊的指標(biāo)性成分貝母素乙的含量測(cè)定未見報(bào)道，為了更好的控制翁瀝通膠囊制劑的質(zhì)量，筆者采用HPLC-ELSD法，建立了準(zhǔn)確度較好的定量方法，該方法可以作為翁瀝通膠囊的修訂提高提供依據(jù)。

1 儀器與材料

儀器：島津“LC-2010”高效液相色譜儀；Alltech 2000ES型ELSD檢測(cè)器；“GR-202”電子天平。試劑：乙腈（色譜純），其他試劑均為分析純。材料：貝母素乙（中國(guó)藥品生物制品所提供，110751-200709，99.8%），在五氧化二磷干燥器中減壓干燥12 h以上使用）。翁瀝通膠囊，由吉林華威藥業(yè)生產(chǎn)廠家提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱為Agilent TC-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動(dòng)相：乙腈-0.3%二乙胺水（65∶35），流速為1.0 mL·min-1，柱溫為30℃，ELSD檢測(cè)器：漂移管溫度85℃，載氣壓力0.33 MPa。分離結(jié)果見圖1。

圖1翁瀝通膠囊供試品和貝母素乙對(duì)照品H P L C-E L S D色譜圖

2.2 對(duì)照品溶液的制備精密稱取貝母素乙對(duì)照品19.52 mg置25 ml量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得貝母素乙對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取上述儲(chǔ)備液5 ml置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液［3］。

2.3 供試品溶液的制備取取供試品10粒，取出內(nèi)容物混勻，精密稱定，取內(nèi)容物約2.5 g，精密稱定，置燒瓶中，加濃氨試液5 ml浸潤(rùn)1小時(shí)，精密加入三氯甲烷-甲醇（4∶1）的混合溶液40 ml，稱定重量，混勻，置80℃水浴中加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，加上述混合溶液補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液10 ml，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙獠⑥D(zhuǎn)移至2 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.4 線性關(guān)系的考察分別精密吸取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0 ml、2 ml、3 ml、5 ml、7 ml、10 ml置于10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖峰面積，以貝母素乙峰面積的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)，對(duì)照品質(zhì)量（ng）的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，貝母素乙的回歸方程為：Y=1.4466X+1.5056，r=0.997，貝母素乙在0.779～7.792 μg內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)分別精密稱取同一批樣品（批號(hào)150101）6份，按上述含量測(cè)定項(xiàng)方法進(jìn)行5次平行試驗(yàn)，結(jié)果表明本法重復(fù)性較好貝母素乙（0.35 mg/粒）的RSD為2.08%。

2.6 精密度試驗(yàn)取同一樣品溶液，測(cè)定6次，以貝母素乙峰面積計(jì)算，貝母素乙的RSD為1.98%。

2.7 穩(wěn)定性取同一樣品溶液，在室溫下分別放置0、2、4、6、12、24 h時(shí)分別進(jìn)樣，測(cè)定翁瀝通膠囊中貝母素乙的含量，RSD為2.10%，結(jié)果表明貝母素乙在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率按上述測(cè)定方法，精密稱取已知含量的翁瀝通膠囊內(nèi)容物，分別加入對(duì)照品母液0.5 ml，按照色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果表明本法具有良好的準(zhǔn)確性。

表1 貝母素乙回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液5 μl和10 μl，供試品溶液10 μl，注入液相色譜儀，按上述HPLCELSD條件進(jìn)行分析測(cè)定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算貝母素乙的含量，結(jié)果見下表。

表2 供試品中貝母素乙含量

3 討論

3.1 提取條件的選擇經(jīng)過(guò)查閱相關(guān)文獻(xiàn)，本實(shí)驗(yàn)考察了四種提取溶劑：三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇（4∶1）、三氯甲烷-甲醇（2∶1）、乙醚，按照上述四種提取溶劑進(jìn)行提取，并按建立的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明三氯甲烷-甲醇（4∶1）提取效率最高，其次是三氯甲烷-甲醇（2∶1）和三氯甲烷，最后是乙醚。故采用三氯甲烷-甲醇（4∶1）作為翁瀝通膠囊的提取溶劑。取同一批號(hào)的翁瀝通膠囊樣品，分別在70℃和80℃回流，結(jié)果表明80℃回流提取效率高，因此采用80℃回流的提取方法。考察了回流提取時(shí)間為1、2、3 h的結(jié)果，結(jié)果表明測(cè)定結(jié)果在這三個(gè)回流提取條件下影響不是很大，即提取時(shí)間為1 h時(shí)足以提取充分，綜合經(jīng)濟(jì)、環(huán)保、高效的因素，選擇回流提取時(shí)間為1 h。取樣量約2.5 g時(shí)，考察了加入濃氨試液3 ml、4 ml、5 ml進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明加入濃氨試液5 ml時(shí)較為適宜。3 ml和4 ml很難將翁瀝通膠囊內(nèi)容物全部浸泡

3.2 色譜條件的優(yōu)化考察了乙腈-0.3%二乙胺水溶液在70∶30、65∶35、60∶40三個(gè)比例下的色譜條件，70∶30條件下貝母素乙分離度不合格，其余兩種比例流動(dòng)相條件下分離度均可達(dá)到要求，雖然60∶40條件下分離度更好，但是分析時(shí)間會(huì)延長(zhǎng)，流動(dòng)相中水的比例較其他兩種高，基線噪音會(huì)偏大，綜合考慮選擇乙腈-0.3%二乙胺水溶液（65∶35）作為最終流動(dòng)相?？疾炝松V柱溫度在30℃、35℃、40℃下的條件，三種溫度下出峰時(shí)間和峰形略有變化，影響不大，因此選擇接近常溫的30℃作為色譜柱溫度。適當(dāng)?shù)娘h移管溫度設(shè)置是基于乙腈-0.3%二乙胺水溶液流動(dòng)相的揮發(fā)性和流速，如果飄移管溫度設(shè)置過(guò)高將會(huì)產(chǎn)生較大的基線波動(dòng)，通過(guò)選擇最終選擇飄移管溫度為85℃，氣體流量設(shè)置為2.3 L/ml。翁瀝通膠囊原標(biāo)準(zhǔn)中貝母素乙的含量限度為不低于0.072 mg/粒，限度較低，無(wú)法體現(xiàn)出翁瀝通膠囊真實(shí)品質(zhì)，采用此方法測(cè)定的5批翁瀝通膠囊樣品中貝母素乙的含量結(jié)果在0.2957～0.3882/粒之間，所測(cè)結(jié)果高于原標(biāo)準(zhǔn)的含量限度的4～5倍，因此在修訂標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，建議提高翁瀝通膠囊中貝母素乙的含量限度。此方法的最大優(yōu)點(diǎn)是準(zhǔn)確性高，結(jié)果可靠，能準(zhǔn)確反反映出翁瀝通膠囊的質(zhì)量，較原標(biāo)準(zhǔn)來(lái)說(shuō)能更加準(zhǔn)確的控制翁瀝通膠囊的質(zhì)量，該實(shí)驗(yàn)可以為提高翁瀝通膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。

［1］國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)Y B Z 0 9 4 3 2004.［2］張浩，李成網(wǎng).HPLC-ELSD法測(cè)定皖貝止咳膠囊中貝母素甲和貝母素乙的含量［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2009，5（15）：4-5.

［3］韓靜.HPLC-ELSD法同時(shí)測(cè)定平貝母中貝母素甲、貝母素乙的含量［J］.中國(guó)藥師，2009，12（5）：5 9 5.

［4］姜艷，李萍.HPLC-ELSD測(cè)定浙貝母中貝母素甲、貝母素乙的含量［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2005（8）：12 5 7.

YANG Jianlong1； HANG Jing2； QU Yanli1； CAI Guangzhi3； GONG Jiyu3*
（1. Chinese Herbal Medicine Office； Changchun Center for Food and Drug Control； Changchun 130012； China；2. Laboratory； Jilin Institute for Food Control； Changchun 130103； China；3. College of Pharmacy； Changchun University of Chinese Medicine； Changchun 130117； China）

Objective To imProve quality standards of Wenglitong caPsules，and to establish the determination method of Peiminine in Wenglitong caPsules.Methods Using Agilent TC-C18（4.6mm×150mm，5μm）column with a mobile Phase of acetonitrile-0.1% triethylamine（65：35），ELSD Parameters as follows：drift tube temPerature is 85℃，and carrier gas flow rate is 2.3L min-1.Results Using this method for the determination Peiminine linear range 0.779-7.792μg，Peiminine regression equation：Y=1.4466X+ 1.5056，r=0.997，the average recovery rate was 96.42%，RSD=1.1%，and had the Precision degree，stability and good reProducibility.Conclusion The method is simPle，highly accurate，has reliable results，can accurately reflect the quality Wenglitong caPsules，and Provide basis for the increase quality standard of Wenglitong caPsule in PharmacoPoeia.

HPLC-ELSD；Peiminine；content determination

10.3 9 6 9/j.issn.1672-2 77 9.2016.11.0 6 6

1672-2 77 9（2016）-11-0 14 6-0 3

：楊杰本文校對(duì)：謝鵬飛

2016-03-24）

＊通訊作者：g j y 0 4 3 1@12 6.c o m