農(nóng)戶散養(yǎng)雞禽流感H5亞型一免與二免抗體對比試驗

中圖分類號：S858.31 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B文章編號：1673-1085（2025）05-0109-03

禽流感是由A型流感病毒引起的一種禽類傳染病[，根據(jù)病毒毒力強(qiáng)弱、致病力分為高致病性、低致病性禽流感。H5和H7亞型毒株禽流感病毒能引起禽類發(fā)生高致病性禽流感（HPAI）。病雞主要表現(xiàn)精神沉郁，頭翅下垂，食欲不振，呼吸困難，雞冠發(fā)紺、發(fā)紫，眼結(jié)膜發(fā)紅，排黃、白、綠色稀便，腳鱗出血。高致病性禽流感病程短，傳播迅速快，高發(fā)率，高死亡率，危害巨大，是我國一類動物疫病[2]，目前主要依靠接種疫苗預(yù)防[3]。農(nóng)村都有在房前屋后養(yǎng)雞自食或少量出售的習(xí)慣，雖每戶養(yǎng)殖量不大，但養(yǎng)殖分散、面廣，禽流感防控難度大[4]。在廣西，對著農(nóng)戶散養(yǎng)雞禽流感的防控，主要依靠村獸醫(yī)進(jìn)行接種免疫，村獸醫(yī)在春、秋兩季重大動物疫病統(tǒng)一預(yù)防接種時，上門為農(nóng)戶進(jìn)行一次禽流感疫苗注射。村獸醫(yī)業(yè)務(wù)技術(shù)水平高低不等，免疫后抗體合格率及抗體效價存在較大差異。筆者對村獸醫(yī)為農(nóng)村散養(yǎng)戶雞進(jìn)行一免和二次免疫（一免后第30天），分別在注射疫苗后第20天采血樣進(jìn)行禽流感病毒H5亞型（Re-14株）血凝抑制試驗。通過對比一免、二免禽流感（H5-Re14株）的抗體合格率及效價，分析禽流感H5亞型（H5N8H7-Re-14株）疫苗免疫一次和免疫兩次對農(nóng)村散養(yǎng)雞的保護(hù)效果。

1試驗設(shè)計

根據(jù)廣西秋季重大動物疫病防控統(tǒng)一接種工作安排，在興安縣、永福縣隨機(jī)各選5個鄉(xiāng)鎮(zhèn)，每個鄉(xiāng)鎮(zhèn)選擇一個自然村，由轄區(qū)村獸醫(yī)對散養(yǎng)雞進(jìn)行高致病性禽流感疫苗（內(nèi)含H5亞型毒株）第一次免疫工作，一免后間隔30d進(jìn)行二免。免疫劑量：2＼～5周齡 0.3mL/ 羽，5周齡以上 0.5mL/ 羽。分別在一免、二免第20天，對每個村的試驗雞群隨機(jī)抽樣采血30羽，離心提取血清、編號，進(jìn)行血凝抑制試驗，對比分析一免、二免禽流感H5亞型抗體合格率和抗體效價。樣品來源及編號見表1。

2材料與方法

2.1材料

重組禽流感病毒（ _H5+H7 ）三價滅活疫苗（H5N8H5-Re-14株+H5N6H5-Re13株 +H7N9 H7-Re4株，生產(chǎn)日期：20240306，生產(chǎn)批號：24368031，生產(chǎn)廠家：遼寧益康生物股份有限公司）、禽流感病毒H5亞型（Re-14株）血凝抑制試驗抗原（批號：20230823，有效期至：20250822，哈爾濱國生生物科技股份有限公司）、禽流感病毒H5亞型（Re-14株）血凝抑制試驗陽性血清（哈爾濱國生生物科技股份有限公司，批號：20230906，有效期至：20250905）、被檢血清、 1% 鮮SPF公雞紅細(xì)胞懸液、微量移液器、PBS緩沖液、水槽及96孔微量反應(yīng)板。

2.2樣品準(zhǔn)備

從廣西農(nóng)村散養(yǎng)雞的實(shí)際免疫注射情況出發(fā)，試驗選擇在秋季重大動物疫病防控疫苗注射期間。樣品采自興安縣和永福兩縣，疫苗注射由轄區(qū)村獸醫(yī)操作，樣品的采集和禽流感H5血凝抑制（HI）試驗由筆者完成。

2.3血凝抑制試驗（微量法）（HI）

（1）在實(shí)驗室25℃溫度下進(jìn)行抗原血凝試驗，并依據(jù)試驗結(jié)果配制4HAU的病毒抗原。

（2）在微量反應(yīng)板的1孔＼～11孔加入 0.025mL PBS，第12孔加入0.05mLPBS。

（3）取 0.025mL 被檢血清加入第1孔，混勻后吸 0.025mL 于第2孔，依次2倍稀釋至第10孔，從第10孔吸取 0.025mL 棄去。

（4）1＼～11孔均加入含4HAU混勻的病毒抗原液 0.025mL ，靜置 30min 。

（5）每孔加入0.025mL 1% 的雞紅細(xì)胞懸液，震蕩混勻，靜置 40min 。

（6）結(jié)果判定：以完全抑制4個HAU抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI滴度。只有陰性對照孔血清滴度不大于21og2，陽性對照孔血清與已知效價誤差不超過1個滴度，試驗結(jié)果才有效。HI價小于或等于 2log2 ，判定HI試驗陰性；禽流感HI價等于3log2為可疑，需重復(fù)試驗；HI價大于或等于41og2，判為陽性。

3結(jié)果

試驗陰性對照孔的血清滴度小于2log2，抗原對照孔（第11孔）完全凝集，陽性血清對照孔滴度為8log2，誤差不超過1個滴度。紅細(xì)胞對照孔（第12孔）紅細(xì)胞沉于孔底，代表試驗成立。血凝抑制試驗數(shù)據(jù)見表2。

從表2可知，一免后 20d 血清樣品的平均抗體效價為 6.26log2 ，平均抗體合格率為 76.3% ；二免后血清樣品的平均抗體效價為 7.75log2 ，平均抗體合格率為 97.7% 。

4分析與建議

4.1試驗分析

樣本取自興安縣和永福縣兩縣10個不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)，疫苗由所轄區(qū)村獸醫(yī)進(jìn)行注射，試驗數(shù)據(jù)真實(shí)反應(yīng)目前農(nóng)村散養(yǎng)雞的防疫現(xiàn)狀。一免與二免進(jìn)的抗體效價和合格率對比：二免后第20天檢測的雞禽流感H5亞型平均HI滴度，要比一免第20天的數(shù)值高 1.49log2 ，平均抗體合格率要高21.4% 。結(jié)果顯示，雞經(jīng)二免后，機(jī)體的兩項指標(biāo)均大幅提高，保護(hù)力比一免更強(qiáng)。

4.2建議

在農(nóng)村地區(qū)，每戶養(yǎng)雞數(shù)量少但分布面廣泛。與此同時，村獸醫(yī)的待遇普遍偏低，這在一定程度上影響了防疫工作的全面開展。當(dāng)前，通常僅在春、秋季動物防疫期間，每個村會安排村獸醫(yī)上門免疫一次。而村民們大多習(xí)慣在早上和白天下地干農(nóng)活，部分村民會因接種當(dāng)日有事、未接到通知，又或是其他各類原因，導(dǎo)致自家雞群出現(xiàn)漏免情況。不僅如此，農(nóng)村地區(qū)還存在雞群動態(tài)變化的現(xiàn)象，如新孵出的小雞，或是新購入的小雞等新增雞群。

為有效提升農(nóng)村散養(yǎng)雞群對禽流感病毒H5亞型的免疫保護(hù)水平，切實(shí)提高免疫密度、抗體效價以及抗體合格率，建議合理上調(diào)村獸醫(yī)的免疫補(bǔ)助。在此基礎(chǔ)上，要求村獸醫(yī)開展二次免疫工作。如此一來，那些此前漏免的農(nóng)戶以及新增雞群，便有機(jī)會在村獸醫(yī)二次入村免疫時，及時進(jìn)行免疫接種。這一舉措將有力地保障農(nóng)村雞群整體的免疫效果，降低禽流感病毒H5亞型的傳播風(fēng)險，為農(nóng)村養(yǎng)雞業(yè)的健康發(fā)展筑牢堅實(shí)防線。

參考文獻(xiàn)：

[1]嚴(yán)得元.雞高致病性禽流感的診斷及防控措施[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2024（9）：210-212.

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[3]胡瀟，趙同淵，劉兆霞，等.禽流感的流行病學(xué)、診斷方法及防控措施[J].中國動物保健，2024，26（8）：47-48+56.

[4]張喜霞.禽流感流行特點(diǎn)及綜合防控措施[J].家禽科學(xué)，2025，47 （3）：104-106.