雞傳染性法氏囊病毒新型變異株傳播性研究

中圖分類號：S858.31 文獻標識碼：A文章編號：1673-1085（2025）05-0042-06

傳染性法氏囊?。↖nfectiousbursaldisease，IBD）是由傳染性法氏囊病病毒（IBDV）引發(fā)的，一種具有高度傳染性、高致死率且可能導致免疫抑制的嚴重傳染病。自1957年在美國首次發(fā)現(xiàn)IBDV的經(jīng)典毒株以來，該病毒在全球范圍內(nèi)廣泛傳播[1。自2017年起，世界各地不斷有IBDV變異株的報道。近期在中國發(fā)現(xiàn)了一種新的變異株，它與早期分離的變異株有所不同。這種新毒株雖然不會導致雞只死亡，但會引起法氏囊嚴重萎縮，導致免疫抑制，從而造成巨大的經(jīng)濟損失。變異株引起的臨床癥狀，主要包括精神不振、羽毛蓬亂、食欲減退、間歇性腹瀉等[2-3]。解剖可見法氏囊黏膜出血，嚴重時法氏囊呈現(xiàn)黃色，甚至呈紫葡萄狀。該病毒的危害直接表現(xiàn)為死亡率上升和飼料利用率降低，給家禽養(yǎng)殖業(yè)帶來了災難性的經(jīng)濟損失[4]。

近年來，隨著傳染性法氏囊病毒A、B節(jié)段的持續(xù)重組與重配，中國東部地區(qū)報道了IBDV新型變異株的出現(xiàn)。2019年，中國首次從六個省份檢測到這種新型變異株[5]。這一發(fā)現(xiàn)引起了科研人員的廣泛關注[，國內(nèi)研究者開始陸續(xù)分離并研究IBDV新型變異株。這種新型變異株也迅速傳播到其他亞洲國家，2021年日本、韓國、馬來西亞等國相繼報告了IBDV新型變異株的發(fā)現(xiàn)[7-8]。IBDV新型變異株的出現(xiàn)，可能成為家禽業(yè)的新挑戰(zhàn)，其防控形勢令人擔憂。

前期在臨床已分離到一株IBDV新型變異株GD2021-08^[9] ，為了解探究新型變異株的傳播性，本試驗對該毒株在SPF雞上的水平感染能力以及發(fā)病特征進行研究，以期能為生產(chǎn)上該病的防控提供參考和指導。

1材料方法

1.1材料

1.1.1病毒毒株：IBDV新型變異株代表株GD2021-08，由溫氏研究院分離純化鑒定。

1.1.2SPF雞胚、試驗動物無特定病原體（Specificpathogenfree，SPF）雞、SPF雞胚均購于。雞胚，37℃培養(yǎng)箱孵育；SPF雞，試驗場負壓隔離器飼養(yǎng)。

1.1.3主要試劑病毒基因組提取試劑盒（RaPureViralRNA/DNAKits）購自Magen生物公司；PrimecriptTMOnetepRT-PCRKitVer.2一 步法反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自TaKaRa公司；凝膠回收試劑盒（E.Z.N.A. GelExtractionKit）、質(zhì)粒DNA抽提試劑盒（E.Z.N.A. PlasmidMiniKitI）為Omega公司產(chǎn)品；In-Fusion HD Cloning Plus均購自TaKaRa公司；胎牛血清（FBS）購自Bovogen公司；DMEM購自Hyclone公司。

1.2 方法

1.2.1傳播性試驗方案及分組為評估IBDV新型變異株GD2021-08在SPF雞上的水平傳播能力，

20只16日齡SPF雞隨機分為3組，GD2021-08感染組（5只）、同居組（5只）、空白對照組（10只），動物試驗分組見表1。GD2021-08感染組，以點眼滴鼻的方式感染IBDV新型變異株GD2021-08，劑量為 ， 200μL/ 只；同居組，5只雞與GD2021-08感染組在感染當天同一隔離器中飼養(yǎng)；空白對照組，以點眼滴鼻的方式接種同劑量PBS溶液。每天觀察SPF雞的臨床癥狀與存活情況，同居25d后，每組雞先稱重后剖檢，觀察法氏囊、脾臟病變，再依照（1-1）式、（1-2）式、（1-3）式計算囊體比、脾體比、BBIX指數(shù)，并通過熒光定量RT-PCR檢測同居組法氏囊拷貝數(shù)，與空白組相比較。

囊重比 （法氏囊重量/體重） ×1000 （1-1）式脾重比 （脾臟重量/體重） ×1000 （1-2）式BBIX 攻毒組雞囊重比/空白對照組雞平均囊重比 （1-3）式

當BBIX lt;0.7 時，判定法氏囊萎縮。

熒光定量PCR檢測：使用AppliedBiosystems7500Fast熒光定量RT-PCR檢測，反應程序為：預變性 ， ，共計40個循環(huán)。計算樣品中IBDV新型變異株病毒RNA的拷貝數(shù)，分析SPF雞排毒情況。qPCR反應體系見表2，IBDVVP2檢測引物和探針見表3。

1.2.2病理切片分析采集的法氏囊組織用 4% 甲醛固定，由武漢塞維爾科技有限公司組織病理學分析。

1.2.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析傳播性試驗通過GraphPadPrism9.0軟件進行T檢驗及單因素方差統(tǒng)計分析，Plt;0.05 時表示差異顯著， Plt;0.01 時表示差異極顯著。

2結(jié)果

2.1存活率

統(tǒng)計同居25d后SPF雞存活率，結(jié)果見圖1，顯示同居組、GD2021-08感染組均沒有雞只死亡，存活率為 100% 。

2.2 同居后法氏囊、脾臟病變

為了探究IBDV新型變異株的傳播能力，剖殺SPF雞取法氏囊、脾臟，病變情況見圖2，可見GD2021-08感染組、同居組的法氏囊較空白對照組有明顯萎縮，三組間脾臟則無明顯病變。

分別對采集的法氏囊、脾臟稱重并分析，發(fā)現(xiàn)同居組、GD2021-08感染組的囊重比與空白對照組有顯著差異（ Plt;0.001 ），較空白對照組下降幅度明顯，脾體比與空白對照組無明顯差異，但較空白組也有所下降，結(jié)果見圖3。

囊指數(shù)（BBIX）測定結(jié)果與水平傳播能力評價見圖4。同居組與GD2021-08感染組的BBIX值相當，且均小于0.7，這表明兩組的法氏囊均出現(xiàn)萎縮情況，該分析結(jié)果與解剖結(jié)果一致。對同居組、感染組法氏囊同時進行熒光定量檢測，檢測結(jié)果顯示同居組和感染組的病毒拷貝數(shù)相當。

注：A：法氏囊；B：脾臟。

2.3 法氏囊病理切片結(jié)果

法氏囊病理切片顯示，可見IBDV新型變異株GD2021-08感染組、同居組皮髓質(zhì)淋巴細胞壞死、溶解，形成空洞（黑色箭頭），伴較多未分化的上皮細胞增生（綠色箭頭），濾泡間質(zhì)少量結(jié)締組織增生（紅色箭頭），伴少量炎性細胞浸潤（黃色箭頭）；而空白組法氏囊則無明顯病理損傷，正常。法氏囊病理切片見圖5。

3討論

自1957年首次在美國發(fā)現(xiàn)傳染性法氏囊病病毒（IBDV）的經(jīng)典株以來，該疾病迅速在全球范圍內(nèi)傳播。到了20世紀80年代，IBD開始展現(xiàn)出新的流行特征[10]，世界各地陸續(xù)報告了IBDV的變異株和超強毒株的出現(xiàn)。這些超強毒株具有極高的致死率，給養(yǎng)禽業(yè)帶來了嚴重的經(jīng)濟損失[5。而變異株主要在北美洲流行，自1990年以來，國內(nèi)僅出現(xiàn)零星病例[1]。因此，在相當長的一段時間內(nèi)，國內(nèi)對IBDV變異株的關注度較低。隨著疫苗開發(fā)和防治管理的加強，vvIBDV也得到了有效的控制，對變異株的研究逐漸受到重視[12]

2017年，中國東部[5報道了一種與美國變異株不同的新型變異株[13]。這種新型變異株雖然不對雞致死，但會嚴重損傷法氏囊，破壞淋巴B細胞的發(fā)育。一旦發(fā)病，雞群會處于亞臨床狀態(tài)，導致其他疫苗接種失敗，引發(fā)免疫抑制，甚至可能引起并發(fā)或混合感染多種疾病。這種新型變異株給雞養(yǎng)殖業(yè)帶來了新的挑戰(zhàn)，迫切需要進行流行病學調(diào)查，為有效防控提供數(shù)據(jù)支持[14]。

本實驗室成功分離出一株新型變異株IBDV9。通過SPF雞致病性試驗顯示，該毒株可引起法氏囊萎縮和壞死。為了進一步評估IBDV新型變異株GD2021-08在SPF雞上的水平傳播能力，我們將感染后的雞群與未感染雞群同居飼養(yǎng)，并每天觀察SPF雞的臨床癥狀與存活情況。結(jié)果表明，同居組的雞也出現(xiàn)了明顯的法氏囊萎縮。進一步通過病理觀察顯示，同居組的法氏囊有明顯的病理損傷，包括皮髓質(zhì)淋巴細胞的壞死、溶解、大量減少，上皮細胞的大量增生，結(jié)締組織的增生，以及炎性細胞的浸潤，并伴有囊腫形成。但脾臟無明顯萎縮。由于法氏囊是雞主要的中樞免疫器官，該變異毒株通過水平傳播對雞群免疫系統(tǒng)造成了巨大損傷，進一步影響了雞群的生長發(fā)育，給生產(chǎn)中的防控工作帶來了巨大的威脅。

4總結(jié)

本研究探討了IBDV新型變異株GD2021-08的水平傳播能力，發(fā)現(xiàn)該毒株能夠?qū)е峦与u群的法氏囊出現(xiàn)萎縮和炎性病變，而脾臟未見明顯變化。法氏囊的這些異常變化，間接導致了雞群的生長發(fā)育障礙，同時在生產(chǎn)免疫防控方面衍生諸多問題。本研究成果為生產(chǎn)實踐中的防控工作提供了有價值的臨床參考和指導，有助于制定更為科學有效的防控策略。

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