天貴卷瓣蘭組培快繁技術(shù)研究

摘要：為了建立天貴卷瓣蘭組培快繁技術(shù)體系，該研究以種子為外植體，篩選適宜其種子萌發(fā)及叢生芽分化、增殖、生根的培養(yǎng)基和生根苗移栽馴化的栽培基質(zhì)。結(jié)果表明：（1）天貴卷瓣蘭種子萌發(fā)的最適培養(yǎng)基為M S+6 -BA 椰汁 蔗糖 瓊脂 。（2）叢生芽分化的最適培養(yǎng)基為 蔗糖 瓊脂 。（3）叢生芽增殖的最佳培養(yǎng)基為 6-BA 椰汁 蔗糖 活性炭 瓊脂 ，增殖系數(shù)達(dá) 6 . 7 0 。（4）叢生芽生根的最佳培養(yǎng)基為 M S+6 -BA 椰汁 蔗糖 活性炭 瓊脂 ，生根率、生根數(shù)以及根長(zhǎng)分別達(dá) （5）生根苗在蛭石和珍珠巖體積比 2 ： 1 的移栽基質(zhì)中成活率最高，達(dá) 100 % ，發(fā)育良好。該研究為天貴卷瓣蘭組培快繁和規(guī)模化生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)，有利于其資源保護(hù)。

中圖分類號(hào)：Q943.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1000-3142（2025）04-0678-11

（1.桂林理工大學(xué)旅游與風(fēng)景園林學(xué)院，廣西桂林 百色533209）

Tissue culture and rapid propagation of Bulbophyllum tianguii

WANG Yake ， WU Qiaofen ， CHAI Shengfeng2， YANG Yanni ， LIU Qiao ，ZHENG Wenjun ， JIANG Qiang3，DENG Zhenhai ，QIU Shuo2 *

（1.Coegeofurismamp;LnscapeAcereGulnUesityfologuli，uangxi，na；.GangiKybt ofPlantFunctionalPhytochemicalsandustainableUtilzation，GuangxiIstituteofBotany，uangxiZhuangAutonomousRegiond Chinese AcademyofSciences，Guilin 541oo6，Guangxi，China；3.GuangxiYachang OrchidNational NatureReserve ManagementCenter，Baise 533209，Guangxi，China）

Abstract：Inorder toestablish the tissue culture andrapid propagation of Bulbophylum tiangui，theseedsof B tianguii wereselectedasexplants to screen for suitable culturemedia for promoting seed germination，cluster bud differentiation，proliferation，roting，andthe growing mediafor transplantingand domesticatingofrooted seedlings.The results were as follows： （1） The most optimal medium for seed germination of B . tianguii was MS -BA （204號(hào) NAA coconut milk sucrose .（2）The optimal culture medium for cluster bud differentiation was IBA sucrose agar .（3）The optimal medium for cluster bud proliferation was MS -BA coconut milk （204號(hào) （20 + sucrose activated carbon agar .Theproliferation coefficient reacheda high valueof 6.70.（4） The optimal medium for cluster bud rooting was MS + 6-BA NAA （204 coconut milk sucrose activated carbon . The rooting rate，rooting number and root length reached 100 % ， 6 . 1 9 and 3.15 cm，respectively. （5） The survival rate of rooted seedlings reached 100 % whentransplanted into media（vermiculite：perlite = 2 ： 1 ）.The study not only provides a foundation for the rapid propagation and large-scale production of B . tianguii，but also is beneficial to resource conservation.

KeyWords：Bulbophyllum tianguii，aseptic seeding，cluster buddiferentiation，clusterbud proliferation，transplanting and domesticating

天貴卷瓣蘭（Bulbophyllumtianguii）屬蘭科（Orchidaceae）石豆蘭屬（Bulbophyllum）附生草本植物，是郎楷永和羅敦于2007年報(bào)道的新種，一般生長(zhǎng)于海拔 7 0 0 ～ 1 3 0 0 m 的喀斯特峽谷崖壁、林下巖石、山頂巖石或腐殖樹(shù)莖上（郎楷永和羅敦，2007）。天貴卷瓣蘭花色艷麗奪目，花形奇特，姿態(tài)優(yōu)美典雅，具有較高的觀賞價(jià)值。然而，天貴卷瓣蘭的野外資源十分稀缺，僅分布于廣西雅長(zhǎng)蘭科植物國(guó)家自然保護(hù)區(qū)和貴州的望謨、修文、開(kāi)陽(yáng)及息烽等地（趙熙黔等，2013）；雅長(zhǎng)保護(hù)區(qū)內(nèi)僅發(fā)現(xiàn)4個(gè)種群，不足1000株（羅亞進(jìn)等，2020）。柴勝豐等（2022）通過(guò)對(duì)雅長(zhǎng)保護(hù)區(qū)內(nèi)的天貴卷瓣蘭研究發(fā)現(xiàn)，其對(duì)生境有較強(qiáng)的依賴性，伴生群落有維管植物79種，隸屬44科71屬，植物分化程度較低，群落組成復(fù)雜；Liang等（2022）發(fā)現(xiàn)天貴卷瓣蘭不同居群的內(nèi)生真菌主要是蠟殼菌屬（Sebacina）和外瓶霉屬（Exophiala）；蔣強(qiáng)等（2020）報(bào)道了天貴卷瓣蘭自然狀態(tài)下種子結(jié)實(shí)率很低。鑒于目前資源現(xiàn)狀，天貴卷瓣蘭已被列入《廣西壯族自治區(qū)重點(diǎn)保護(hù)野生植物名錄》（2023）及《中國(guó)生物多樣性紅色名錄—高等植物卷（2020）》。

肖妮潔（2023）采用層次分析法對(duì)4種石豆蘭屬植物種質(zhì)資源建立評(píng)價(jià)模型，發(fā)現(xiàn)天貴卷瓣蘭的綜合評(píng)分最高，值得進(jìn)一步推廣應(yīng)用。然而，種苗缺乏嚴(yán)重阻礙了這一重要植物的開(kāi)發(fā)利用，如何既保護(hù)該物種的自然資源又能進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用顯得極為重要。植物組織培養(yǎng)技術(shù)是現(xiàn)代高新技術(shù)農(nóng)業(yè)中最重要、最活躍的領(lǐng)域之一，不僅能夠有效保護(hù)珍貴植物資源，也能為開(kāi)發(fā)利用提供優(yōu)質(zhì)種苗（Longetal.，2022）。目前，組培快繁已在蘭科植物資源保護(hù)和開(kāi)發(fā)中發(fā)揮著重要作用，如石斛（Zhouamp;Huang，2024）、白及（Weiet al.，2018）、蝴蝶蘭（孫未鳴等，2023）等。石豆蘭屬作為蘭科種類較多的一個(gè)屬，約1000個(gè)種，然而該屬植物組培快繁方面的研究很少，前人通過(guò)對(duì)麥斛（Bulbophylluminconspicuum）廣東石豆蘭（B.kwangtungense）直唇卷瓣蘭（B.delitescens）以及石豆蘭（Bulbophyllumsp.）的組培快繁技術(shù)研究，發(fā)現(xiàn)以莖尖、莖段、鱗莖或嫩芽等營(yíng)養(yǎng)器官做外植體，雖然誘導(dǎo)出了無(wú)菌材料，但普遍存在污染率高、誘導(dǎo)率低、增殖系數(shù)小等缺點(diǎn)，并且破壞了野生資源（鄭學(xué)威，2005；李洪林等，2009；黃崇成等，2019；王曉峰等，2020）。田海娟等（2022）建立了兩種石豆蘭雜交種的無(wú)菌播種技術(shù)，叢生芽增殖率達(dá) 9 . 2 / 5 0 d ，生根率達(dá) 100 % ，既保護(hù)了野外資源，也提高了種苗生產(chǎn)效率。然而，尚未見(jiàn)天貴卷瓣蘭無(wú)菌播種以及組培快繁技術(shù)的相關(guān)報(bào)道。

鑒于此，本研究以天貴卷瓣蘭人工授粉的種子為外植體，研究不同濃度的激素及添加物配比對(duì)種子萌發(fā)的影響；觀察不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基及激素對(duì)叢生芽分化培養(yǎng)的影響，篩選合適的分化培養(yǎng)基；采用4因素3水平正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，研究不同濃度的激素及添加物配比對(duì)叢生芽增殖和生根的影響，分別篩選適宜叢生芽增殖和生根的最優(yōu)培養(yǎng)基組合；觀察和統(tǒng)計(jì)不同移栽基質(zhì)對(duì)生根苗移栽馴化成活的影響，以篩選最佳移栽馴化栽培基質(zhì)。本研究旨在建立天貴卷瓣蘭規(guī)?；旆狈N苗的技術(shù)體系，為其開(kāi)發(fā)利用和資源保護(hù)奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

天貴卷瓣蘭種子采自廣西雅長(zhǎng)蘭科植物國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)，為人工授粉結(jié)實(shí)的成熟未開(kāi)裂蒴果。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1培養(yǎng)條件培養(yǎng)室設(shè)置溫度 ，LED光源，光照時(shí)間 ，光照強(qiáng)度 1 5 0 0～2 0 0 0 l x （暗培養(yǎng)階段除外）。

1.2.2外植體滅菌選取成熟尚未開(kāi)裂的蒴果，用洗潔精洗去表面附著的雜質(zhì)，自來(lái)水沖洗 1 0 m i n ！將蒴果移至超凈工作臺(tái)上，先用 7 5 % 的無(wú)水乙醇浸泡 4 5 s ，再用無(wú)菌水沖洗一次，后用 0 . 1 % 升汞浸泡 1 0 m i n ，并不時(shí)振蕩以保證種子表面消毒徹底，最后用無(wú)菌水沖洗5次，置于滅菌的濾紙上吸干表面的水分，備用。

1.2.3無(wú)菌播種和原球莖的誘導(dǎo)在超凈工作臺(tái)中，用滅過(guò)菌的解剖刀將消毒后蒴果尖端切開(kāi)小口，輕輕抖動(dòng)，將種子均勻撒在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，立即蓋上瓶蓋，放入培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。無(wú)菌播種和原球莖誘導(dǎo)的基本培養(yǎng)基為MS，6-BA濃度分別為 和 ，NAA濃度均為0.1 ，椰汁濃度為 ，共計(jì)6個(gè)培養(yǎng)基配方。各培養(yǎng)基均添加蔗糖 、瓊脂 ， 值5.5＼～5.8，每個(gè)處理播種10瓶，3次重復(fù)，播種后暗處理 1 5 d 后放置培養(yǎng)室中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng) 6 0 ～ 9 0 d 后觀察種子萌發(fā)情況，并劃分為5個(gè)等級(jí)。Olympusszx-16顯微鏡拍照種子的萌發(fā)情況。

1.2.4叢生芽的分化將1.2.3中種子萌發(fā)最好的培養(yǎng)基獲得的原球莖轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基進(jìn)行分化培養(yǎng)，基本培養(yǎng)基分別為 和MS，IBA的濃度分別為 和 ，共計(jì)6個(gè)培養(yǎng)基配方。蔗糖和瓊脂的使用量以及 Δ p H 值設(shè)置同1.2.3。每個(gè)處理接種10瓶，每瓶接種200個(gè)原球莖，3次重復(fù)，接種后放置培養(yǎng)室中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng) 1 2 0 d 后觀察叢生芽分化情況。其中，分化率 （ % ） = 已分化成芽的個(gè)數(shù)/接種的原球莖數(shù) × 1 0 0

1.2.5叢生芽的增殖將1.2.4中分化最好的培養(yǎng)基獲得的叢生芽轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，采用4因素3水平 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以MS為基本培養(yǎng)基，4因素及3水平分別為6-BA濃度1.0、2.0、 ，KT濃度 ，NAA 濃度 ，添加物土豆泥 ）香蕉泥 以及椰汁 為1個(gè)變量因素的3個(gè)水平，共計(jì)9個(gè)培養(yǎng)基配方。蔗糖和瓊脂的使用量以及 值設(shè)置同1.2.3，另外添加活性炭 。每個(gè)處理播種10瓶，3次重復(fù)。培養(yǎng) 后統(tǒng)計(jì)生長(zhǎng)情況。其中，增殖系數(shù) Σ= Σ 叢生芽總數(shù)/接種的叢生芽數(shù)。

1.2.6叢生芽壯苗生根將1.2.5中增殖效果最好的培養(yǎng)基獲得的 2 ～ 3 c m 的叢生芽轉(zhuǎn)接到壯苗生根培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，采用4因素3水平 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，4因素及3水平分別為6-BA濃度 ，NAA濃度 ， K T 濃度 0 . 1 ， 0 . 2 ， 0 . 5 ，添加物香蕉泥 、椰汁 2 0 0 m L · 和土豆泥 為1個(gè)因素的3個(gè)水平，共計(jì)9個(gè)培養(yǎng)基配方。蔗糖和瓊脂的使用量以及 Δ p H 值設(shè)置同1.2.3，另外添加活性炭 。每個(gè)處理播種10瓶，3次重復(fù)。培養(yǎng)120d后統(tǒng)計(jì)生長(zhǎng)情況。其中，生根數(shù) Σ= Σ 生根的總數(shù)/接種數(shù)，根長(zhǎng) Σ= Σ 根系總長(zhǎng)/根系總數(shù)，生根率 （ % ） = 生根的叢生芽數(shù)量/接種的叢生芽數(shù)量 × 1 0 0 。

1.2.7生根苗移栽馴化將生根的試管苗于9月份進(jìn)行移栽馴化，出瓶前室內(nèi)暗處理5d，室外陰涼通風(fēng)處煉苗 1 5 d 。出瓶時(shí)用清水洗凈根部培養(yǎng)基，置于陰涼通風(fēng)處晾干，移栽至經(jīng)多菌靈消毒的移栽基質(zhì)中?；|(zhì)I：泥炭土：樹(shù)皮：苔蘚 Ψ= 1 ： 1 ： 1 ?；|(zhì)Ⅱ：樹(shù)皮：珍珠巖：蛭石 Ψ= 1 ： 1 ： 1 ?；|(zhì)Ⅲ：樹(shù)皮：苔蘚 = 1 ： 1 ?；|(zhì) I V ：蛭石：珍珠巖 ε= 2 ： 1 ?；|(zhì)V：泥炭土：珍珠巖：蛭石 τ= 1 ： 1 ： 1 。所有基質(zhì)配比均為體積比，用育苗盤進(jìn)行栽植，每個(gè)育苗盤栽植20叢，3次重復(fù)。移栽30d后，分別噴施1.0 花寶1號(hào)和200倍的蘭靈王（微生物菌劑），每隔 1 0 d 噴施1次，連噴3次。3個(gè)月后統(tǒng)計(jì)成活率以及生長(zhǎng)情況。其中，移栽馴化成活率 （ % ） = 成活的數(shù)量/移栽的總數(shù) × 1 0 0 。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSSStatistic26.0以及WPS軟件進(jìn)行處理。

2 結(jié)果與分析

2.1種子的萌發(fā)及原球莖的誘導(dǎo)

天貴卷瓣蘭種子萌發(fā)及原球莖誘導(dǎo)統(tǒng)計(jì)情況如表1所示，培養(yǎng)65d后，不同培養(yǎng)基對(duì)天貴卷瓣蘭種子萌發(fā)的影響有所不同，在激素種類與濃度相同的情況下，添加椰汁更有利于天貴卷瓣蘭種子的萌發(fā)及原球莖誘導(dǎo)，隨著椰汁添加量的增加，萌發(fā)更快，萌發(fā)率更高；培養(yǎng) 9 0 d 時(shí)，未添加椰汁的兩個(gè)處理仍未萌發(fā)（圖1：A），這說(shuō)明椰汁有利于其種子的萌發(fā)。表1還顯示，在含有同樣濃度椰汁的處理組，培養(yǎng)基中添加6-BA 比添加 的處理組種子萌發(fā)情況更好且需時(shí)更短，這說(shuō)明6-BA 更有利于天貴卷瓣蘭種子萌發(fā)。因此，以MS為基本培養(yǎng)基，添加 及 椰汁最適合天貴卷瓣蘭種子萌發(fā)以及原球莖誘導(dǎo)，萌發(fā)需 6 5 d 。

注：種子萌發(fā)情況分為5個(gè)等級(jí) 萌發(fā)率 ? 2 0 % ： 20 % lt;萌發(fā)率 ? 4 0 % 4 0 % lt;萌發(fā)率 ? 6 0 % ： 6 0 % lt;萌發(fā)率 ? 8 0 % ; ： 8 0 % lt;萌發(fā)率 ? 1 0 0 % 。—表示培養(yǎng)90d未見(jiàn)萌發(fā)。

Note：Seed germination situation is divided into five levels + ， 0 lt; germination rate ? 2 0 % ; ： 20 % （204 lt; germination rate ? 4 0 % ; 40 % ： 6 0 %

2.2叢生芽分化

從種子萌發(fā)培養(yǎng)基1號(hào)中挑選萌發(fā)一致、顆粒飽滿的原球莖，轉(zhuǎn)接到叢生芽分化培養(yǎng)基上（圖2：A），經(jīng) 1 2 0 d 分化培養(yǎng)后，不同培養(yǎng)基對(duì)天貴卷瓣蘭叢生芽分化情況統(tǒng)計(jì)見(jiàn)表2。由表2可知，不同的培養(yǎng)基對(duì)天貴卷瓣蘭叢生芽分化的效果不同，其中分化率最高的為基本培養(yǎng)基 外加 ： 的IBA，培養(yǎng)60d后開(kāi)始分化且分化出的叢生芽葉片深綠，長(zhǎng)勢(shì)最快（圖2：C，示培養(yǎng)120d的長(zhǎng)勢(shì)）。對(duì)比 和 MS3種基本培養(yǎng)基，添加 0 ～ 的IBA，其中 基本培養(yǎng)基表現(xiàn)最好， 表現(xiàn)最差。表2結(jié)果還顯示在同樣基礎(chǔ)培養(yǎng)基條件下，添加 的IBA均能提高分化率，這說(shuō)明 的IBA有利于促進(jìn)叢生芽的分化。然而，MS以及 為基礎(chǔ)培養(yǎng)基時(shí)，叢生芽分化效果一般，分化較晚（培養(yǎng)90d后才逐漸產(chǎn)生分化），褐化材料相對(duì)較多，生長(zhǎng)緩慢（圖2：D，E，示培養(yǎng) 1 2 0 d 的長(zhǎng)勢(shì)）。因此，適合天貴卷瓣蘭叢生芽分化的最優(yōu)培養(yǎng)基為 ，分化效果最好。

2.3叢生芽的增殖

選擇2號(hào)分化培養(yǎng)基中生長(zhǎng)一致的叢生芽，高 ，轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)（圖3：A）， 1 2 0 d 后統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，不同濃度植物激素及附加物對(duì)天貴卷瓣蘭叢生芽的增殖效果不同。叢生芽在含有椰汁的3種培養(yǎng)基上增殖系數(shù)高于含有土豆泥或者香蕉泥的培養(yǎng)基，增殖系數(shù)范圍為 6 . 2 7 ～ 6 . 7 0 ，其中MS基本培養(yǎng)基中添加6-BA 、 、NAA 及椰汁 ，培養(yǎng) 1 2 0 d 時(shí)增殖系數(shù)達(dá)到6.70，增殖苗生長(zhǎng)快，假鱗莖膨大，葉片深綠，整體增殖情況最好（圖3：C），即最佳增殖培養(yǎng)基配方為 M S+6 -BA ， 椰汁 。含有香蕉泥的3種培養(yǎng)基的叢生芽增殖系數(shù)范圍為4 . 1 7 ～ 5 . 5 8 ，而在含有土豆泥的培養(yǎng)基中增殖效果較差，增殖系數(shù)僅為 1 . 7 0 ～ 4 . 7 3 且生長(zhǎng)緩慢，甚至無(wú)增殖現(xiàn)象（圖3：D），這說(shuō)明椰汁能夠在一定程度促進(jìn)天貴卷瓣蘭叢生芽的增殖。從表3還可以看出，同樣含椰汁的3號(hào)和4號(hào)培養(yǎng)基，在KT和NAA同樣濃度的情況下，6-BA 更有利于增殖；8號(hào)培養(yǎng)基含有6-BA ，但KT和NAA濃度稍降低，增殖系數(shù)反而降低，這說(shuō)明6-BA濃度過(guò)高不利于促進(jìn)增殖。

2.4叢生芽壯苗生根

選擇4號(hào)增殖培養(yǎng)基中生長(zhǎng)健壯且大小基本一致的叢生芽，接種于生根培養(yǎng)基中（圖4：A），培養(yǎng) 1 2 0 d 后觀察統(tǒng)計(jì)瓶?jī)?nèi)生根情況（表4）。由表4可知，9種培養(yǎng)基中，除了5號(hào)培養(yǎng)基生根率相對(duì)較低外，其他8種培養(yǎng)基生根率均保持在 8 8 % 以上，其中添加了6-BA 、NAA 0 . 2 m g ： 、 及椰汁 的7號(hào)培養(yǎng)基上，天貴卷瓣蘭的長(zhǎng)勢(shì)最好，生根率 100 % ，生根數(shù)達(dá)6.19，根長(zhǎng)達(dá) 3 . 1 5 c m ，根系健壯且發(fā)達(dá)，假鱗莖膨大且葉片深綠（圖4：D），是天貴卷瓣蘭生根壯苗的最佳培養(yǎng)基，即壯苗生根的最佳培養(yǎng)基為M S+6 -BA 椰汁 ；而天貴卷瓣蘭在添加了0 . 5 mg·L ^-1 "6 - "B A 、0 . 5"mg·L^"-1"N A A、0 . 5"mg·L^"-1""KT及 香蕉泥的5號(hào)培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)最差，生根率最低，根長(zhǎng)僅 ，根系少且脆弱，不適合組培苗生根（圖4：C）。從表4還可以看出，1號(hào)、2號(hào)和3號(hào)培養(yǎng)基中含有同濃度的6-BA，而NAA和KT濃度逐漸增大，但生根率最高的是含有香蕉泥的1號(hào)培養(yǎng)基，其次是含有椰汁的2號(hào)培養(yǎng)基，含土豆泥的3號(hào)培養(yǎng)基生根率最低。進(jìn)一步對(duì)含有香蕉泥的1號(hào)、5號(hào)和9號(hào)培養(yǎng)基進(jìn)行比較分析，發(fā)現(xiàn)含有相對(duì)較高濃度的KT（0.5mg· ）、配以同濃度的6-BA和NAA的5號(hào)培養(yǎng)基生根情況較差。這些結(jié)果說(shuō)明影響天貴卷瓣蘭生根的因素既包括植物激素類別及濃度配比，也包括添加物的種類。

2.5生根苗的移栽馴化

生根的試管苗經(jīng)過(guò)室外馴化，移栽到經(jīng)過(guò)消毒的栽培基質(zhì)內(nèi)，移栽3個(gè)月后統(tǒng)計(jì)成活率。由表5可知，不同移栽基質(zhì)下天貴卷瓣蘭組培苗移栽馴化成活率均在 90 % 以上，其中生根的試管苗在基質(zhì)I、Ⅱ和Ⅲ3種移栽基質(zhì)中的成活率差異不明顯，生長(zhǎng)狀況一般，長(zhǎng)勢(shì)較弱，移栽基質(zhì)Ⅱ甚至有發(fā)黃現(xiàn)象（圖5：A）。移栽基質(zhì)IV（蛭石：珍珠巖 ε= 2 ： 1 ，體積比）的成活率最高，達(dá) 100 % ，生長(zhǎng)狀況最好，植株健壯（圖5：B）；其次是移栽基質(zhì)V（泥炭土：珍珠巖：蛭石 Ψ= 1 ： 1 ： 1 ），成活率達(dá)9 5 . 0 0 % ，長(zhǎng)勢(shì)一般（圖5：C）。

3 討論與結(jié)論

據(jù)報(bào)道，利用種子進(jìn)行無(wú)菌播種可以建立多種蘭科植物的工廠化快繁技術(shù)（Pereira etal.，2017；藍(lán)炎陽(yáng)等，2017；廖宏英等，2022；路茜等，2024），能夠在短期內(nèi)獲得大量幼苗，是現(xiàn)階段經(jīng)濟(jì)有效的快速繁殖方法。本研究中，以天貴卷瓣蘭異花授粉的種子為外植體不僅能無(wú)菌萌發(fā)，而且發(fā)現(xiàn)添加椰汗有利于促進(jìn)萌發(fā)，這與廖宏英等（2022）報(bào)道椰汁促進(jìn)德氏兜蘭的結(jié)果一致，這可能是由于椰汁中含有利于種子萌發(fā)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。但是，本研究中的無(wú)菌萌發(fā)時(shí)間較長(zhǎng)且原球莖不能分化形成叢生芽，其原因可能是基本培養(yǎng)基MS含有較高的無(wú)機(jī)鹽不利于原球莖分化，這在其他蘭科植物也有類似現(xiàn)象（Longetal.，2010）。鄭曉君等（2010）和劉思思等（2015）研究表明，1/2MS、

A.叢生芽在增殖培養(yǎng)基培養(yǎng) 0 d ;B.叢生芽在2號(hào)增殖培養(yǎng)基培養(yǎng) 1 2 0 d ；C.生芽在4號(hào)增殖培養(yǎng)基培養(yǎng) 1 2 0 d ；D.生芽在9號(hào) 增殖培養(yǎng)基培養(yǎng) （204號(hào) A. Cluster buds are cultured for 0 d in the proliferation medium；B. Cluster buds are cultured for 12O d in No.2 proliferation medium; C. Cluster buds are cultured for in No.4 proliferation medium；D. Cluster buds are cultured for in No.9 proliferation medium.

Fig.3Effects of different media on cluster bud proliferation of Bulbophyllum tianguii 及 等低無(wú)機(jī)鹽濃度的基本培養(yǎng)基有利于種子的萌發(fā)和原球莖的分化。本研究中，未分化的原球莖轉(zhuǎn)移到低鹽濃度的 培養(yǎng)基能夠進(jìn)行分化，同時(shí)，添加 的IBA能顯著提高分化率（高于 9 0 % ）。因此，天貴卷瓣蘭種子的萌發(fā)及原球莖分化既與基本培養(yǎng)基類型有關(guān)，也與添加的激素類型有關(guān)。今后應(yīng)該繼續(xù)篩選使天貴卷瓣蘭種子快速萌發(fā)并同時(shí)分化的培養(yǎng)基，以提高生產(chǎn)效率。

現(xiàn)有石豆蘭屬植物組培快繁的研究表明，以MS為基本培養(yǎng)基，添加一定濃度的6-BA和NAA，增殖系數(shù)普遍較低（鄭學(xué)威，2005；李洪林等，2009；黃崇成等，2019），僅有田海娟等（2022）報(bào)道6-BA 和NAA 使雜交種

A.叢生芽在生根培養(yǎng)基培養(yǎng) 0 d ；B.叢生芽在4號(hào)生根培養(yǎng)基培養(yǎng) 1 2 0 d ；C.叢生芽在5號(hào)生根培養(yǎng)基培養(yǎng) 1 2 0 d ；D.叢生芽 在7號(hào)生根培養(yǎng)基培養(yǎng) （20 A.ClusterbudsareculturedforOdinrotingmedium；B.Clusterbudsareculturedfor12OdinNo.4rotingmedium；C.Clusterbudsare cultured for inNo.5 rooting medium；D.Cluster buds are cultured for in No.7 rooting medium.

子無(wú)菌播種獲得的叢生芽增殖系數(shù)達(dá)到9.2。本研究也發(fā)現(xiàn)，適宜植物激素種類及濃度配比有利于促進(jìn)叢生芽增殖，最適配比為 6 -BA2mg·L^"-1+KT0.1mg·L^"-1+ ，同時(shí)添加200 的椰汁對(duì)天貴卷瓣蘭叢生芽的增殖影響最大，這在其他蘭科植物中也有報(bào)道（路茜等，2024），可能是椰汁豐富的營(yíng)養(yǎng)成分或者激素適合叢生芽的增殖。前人研究認(rèn)為，香蕉泥有利于帶葉兜蘭、灰?guī)r金線蓮及報(bào)春石斛等蘭科植物叢生芽的生根（陳寶玲等，2016；胡琦敏等，2016；仇碩等，2019），土豆泥有利于馬鈴薯和蝴蝶蘭的叢生芽生根（王艷平等，2019；陳倩，2020）。然而，在本研究壯苗生根培養(yǎng)中，天貴卷瓣蘭生根的因素既包括植物激素類別及濃度配比，也包括添加物的種類。由1號(hào)、2號(hào)和3號(hào)生根培養(yǎng)基可知，對(duì)生根影響最大的添加物可能是香蕉泥，而相對(duì)較高

表5生根苗移栽馴化

A.基質(zhì)ⅡI；B.基質(zhì)V；C.基質(zhì)V。

A.MediumII;B.MediumIV;C.MediumV.

濃度的 ）配以同濃度的6-BA和NAA不利于生根，這可能是由于KT屬于細(xì)胞分裂素且濃度過(guò)高造成促進(jìn)生根和促進(jìn)細(xì)胞分裂的激素比例失調(diào)。本研究還發(fā)現(xiàn)，相比其他蘭科植物，天貴卷瓣蘭在分化、增殖與生根等培養(yǎng)階段時(shí)間均較長(zhǎng)，這可能與石豆蘭屬植物自身植株矮小、生長(zhǎng)發(fā)育緩慢有關(guān)（黃崇成等，2019），今后可以考慮把增殖與生根培養(yǎng)一步完成，進(jìn)而提高效率。

栽培基質(zhì)的選擇是組培苗移栽成活的關(guān)鍵，應(yīng)選擇松軟、透氣排水能力好且富含腐殖質(zhì)的移栽基質(zhì)。天貴卷瓣蘭作為附生植物，具有氣生根，不宜種植于含土壤的基質(zhì)中。鄭學(xué)威（2005）和李洪林等（2009）指出以蛭石或碳化樹(shù)皮為移栽基質(zhì)均適合石豆蘭屬植物組培苗的移栽馴化，移栽成活率達(dá) 9 0 % 。本研究發(fā)現(xiàn)，將生根苗移栽至含有蛭石、珍珠巖、樹(shù)皮等的基質(zhì)都能夠成活，成活率均在 90 % 以上，其中蛭石：珍珠巖 ε= 2 ε： ε1 （體積比）的基質(zhì)配比成活率最高，達(dá) 100 % 且生長(zhǎng)最旺盛，這可能是由于天貴卷瓣蘭根系細(xì)弱，而較高比例的蛭石既保障了足夠的透氣性，也有利于根系附著。但是，移栽30d后需要配合施用一定濃度的花寶1號(hào)和蘭靈王（微生物菌劑），以提供生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

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（責(zé)任編輯周翠鳴）