羅漢參組織培養(yǎng)與快繁技術(shù)研究

摘" "要" "以羅漢參華福2號莖尖為外植體，對外植體進行消毒、誘導(dǎo)、增殖以及生根等不同處理，篩選組織培養(yǎng)基配比。結(jié)果表明，最佳啟動培養(yǎng)基為MS+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA，最佳增殖培養(yǎng)基為MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA，最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.1 mg/L NAA。

關(guān)鍵詞" "羅漢參;莖尖;脫毒;快繁

羅漢參是多年蔓生草本植物，我國稀有作物，單縣羅漢參是菏澤特產(chǎn)，是全國農(nóng)產(chǎn)品地理標志產(chǎn)品[1]，羅漢參食用和藥用部分為地下塊根，其干物質(zhì)淀粉含量超過25%，蛋白質(zhì)5.3%，維生素C 18 mg/100 g，鋅7.4 mg/kg，硒含量超過0.12 mg/kg，鐵21.7 mg/kg。含有的羅漢酸等成分可有效降低血糖、血壓以及防治骨質(zhì)疏松等作用[2]，其營養(yǎng)價值和藥用價值非常高，是山東省單縣的重要經(jīng)濟作物。羅漢參傳統(tǒng)繁殖方式為塊根繁殖[3]，增殖系數(shù)低，種苗投入大且質(zhì)量難以控制，開展羅漢參的組培快繁和育苗技術(shù)對羅漢參的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展意義重大。

1" "材料與方法

1.1" "材料" "試驗于2022—2023年在菏澤市農(nóng)業(yè)科學(xué)院組培實驗室進行。2022年5月上旬晴朗天氣在單縣華福2號種植基地選擇長勢良好、無病蟲害的羅漢參莖尖，剪取頂芽，長5～6 cm。

1.2" "方法

1.2.1" "外植體滅菌" "頂芽用洗潔精清洗后沖洗干凈，置于超凈工作臺上用紫外燈消毒45 min，用75%酒精浸泡20 s，隨后用無菌水清洗3次，然后置于無菌瓶內(nèi)，用0.1%HgCl溶液分別浸泡3 min、5 min、7 min、9 min和11 min（編號A1～A5），無菌水清洗5次，用濾紙吸干水分，用無菌解刨刀剝?nèi)?.3～0.5 cm的莖尖，接種進提前配制的MS培養(yǎng)基中。每瓶接入1個芽點，每個處理30個重復(fù)，10 d后統(tǒng)計污染率和存活率。污染率（%）=污染瓶數(shù)/接種瓶數(shù)×100，存活率（%）=無污染且存活瓶數(shù)/接種瓶數(shù)×100。

1.2.2" "誘導(dǎo)培養(yǎng)基篩選" "將羅漢參外植體按照1.2.1最佳滅菌方式處理后，用解剖針剝?nèi)?.5～0.7 cm的生長點接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每瓶接種1個，每個處理接種100瓶，28 d后觀察統(tǒng)計誘導(dǎo)情況。各培養(yǎng)基激素組合如表1所示，外加蔗糖35 g/L，瓊脂7.8 g/L。

1.2.3" "增殖培養(yǎng)基的篩選" "選擇1.2.2試驗中最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)的、長勢一致的叢生芽為材料，將其接種到增殖培養(yǎng)基中，每個處理接種100瓶，每瓶接種5芽，28 d后觀察并統(tǒng)計繼代苗長勢和增殖系數(shù)（增殖系數(shù)=繼代芽數(shù)量/接種數(shù)量）。各培養(yǎng)基激素組合如表2所示，外加蔗糖35 g/L，瓊脂7.8 g/L。

1.2.4" "生根培養(yǎng)基的篩選" "選擇1.2.3最佳增殖培養(yǎng)基的繼代芽為材料。接種到生根培養(yǎng)基中。生根培養(yǎng)基選擇MS和1/2MS兩種，激素濃度如表3所示。外加蔗糖35 g/L，瓊脂7.8 g/L。

2" "結(jié)果與分析

2.1" "不同滅菌處理外植體的污染率和存活率" "如表4所示，污染率隨HgCl滅菌時間的增長而降低，處理A1污染率高達93.3%，處理A5污染率最低，為20%;存活率隨HgCl處理時間的增長呈先增加再降低趨勢。綜合考慮，羅漢參外植體滅菌的最佳處理方法為酒精滅菌處理20 s，0.1%HgCl浸泡9 min。

2.2" "不同誘導(dǎo)處理對羅漢參啟動培養(yǎng)的影響" "由表5可知，萌芽率隨6-BA濃度的增加而增加，隨NAA濃度的增加先增加后降低;6-BA可以促進愈傷組織的發(fā)生和芽的產(chǎn)生，隨6-BA濃度的增加，芽的數(shù)量有所提高;NAA可促進芽的生長，但過高會導(dǎo)致畸形芽的產(chǎn)生，其中B10處理1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA配比最優(yōu)，芽長勢良好，萌芽率可達36%。

2.3" "不同處理對芽增殖的影響" "無性系羅漢參帶腋芽莖段增殖培養(yǎng)結(jié)果見表6，增殖系數(shù)隨6-BA濃度的增加而增加，隨NAA濃度的增加先增加后降低。不添加NAA羅漢參增殖苗普遍存在長勢緩慢、芽黃綠情況;添加0.05 mg/L NAA和不同濃度的6-BA培養(yǎng)基中增殖芽長勢良好，且都能產(chǎn)生明顯的愈傷組織;添加0.1 mg/L NAA和1.5 mg/L 6-BA的培養(yǎng)基，增殖芽健壯、濃綠且長勢好，增殖系數(shù)高達3.27，其他濃度6-BA培養(yǎng)基中增殖芽出現(xiàn)黃化、玻璃化現(xiàn)象;添加0.15 mg/L NAA和不同濃度的6-BA培養(yǎng)基普遍存在切口處產(chǎn)生較多的愈傷組織等情況。綜合考慮，0.1 mg/L NAA和1.5 mg/L 6-BA的培養(yǎng)基，為羅漢參最佳增殖培養(yǎng)基。

2.4" "不同基本培養(yǎng)基及處理方式對羅漢參生根的影響" "繼代芽經(jīng)生根培養(yǎng)30 d后結(jié)果如表7，MS培養(yǎng)基添加不同濃度的NAA，羅漢參普遍根細、根弱且生根率低;1/2MS培養(yǎng)基添加不同濃度的NAA，羅漢參根系相對較粗壯，其中D8處理產(chǎn)生的根系粗壯、有活力，生根率高達37.4%，為最佳生根培養(yǎng)基。

3" "討論與分析

不同生長環(huán)境、生長狀況以及生長階段對外植體的選擇影響很大，選擇合適的外殖體是組織培養(yǎng)順利開展的關(guān)鍵，華福2號羅漢參最佳外植體為頂芽，可能是因為羅漢參頂芽具有強大的分生能力[5]，以莖尖為外植體可迅速建立其組培快繁體系，不同激素配比對羅漢參啟動培養(yǎng)的影響巨大，選擇合適的啟動培養(yǎng)基可極大提高羅漢參增殖效率。羅漢參的增殖培養(yǎng)階段容易出現(xiàn)黃化、玻璃化問題，合適的激素配比不僅可解決黃化、玻璃化問題，還可以改善羅漢參幼苗的長勢，且可增加其增殖系數(shù)。生根培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵在于基本培養(yǎng)基的選擇[6]，以1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基并添加0.1 mg/L NAA可以產(chǎn)生豐富且粗壯的根系，根系活性強弱將直接影響后期馴化成活率和能否進行產(chǎn)業(yè)化的生產(chǎn)[7]。

參考文獻

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[2] 張綿松，賈愛榮，史亞萍，等.羅漢參淀粉理化性質(zhì)及降血糖活性研究[J].食品研究與開發(fā)，2021，42（9）：25-30.

[3] 張欽，李春燕，劉德歲.羅漢參高產(chǎn)栽培技術(shù)[J].農(nóng)業(yè)知識，2012（28）：53.

[4] 范小峰，劉秀麗，盧晶.紫丁香的組織培養(yǎng)和快速繁殖[J].林業(yè)科技通訊，2024（5）：51-54.

[5] 封捷，曾文丹，嚴華兵，等.植物莖尖再生與遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)研究進展[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2024，52（13）：1-13.

[6] 程雅妮，計治聰，任羽.激素種類和濃度對石斛蘭壯苗生根的影響[J].現(xiàn)代園藝，2024，47（18）：25-27+31.

[7] 申海玉，韓超，于夢娟，等.緣毛太行花組織培養(yǎng)技術(shù)及馴化移栽土壤條件的研究[J].生物學(xué)雜志，2024，41（5）：70-76+83.