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    卵巢早衰患者血清白介素-1、淋巴細胞亞群的水平及臨床意義

    2012-06-08 06:15:30馬小紅
    中國計劃生育學雜志 2012年2期
    關(guān)鍵詞:亞群卵泡淋巴細胞

    馬小紅 徐 仙

    寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院生殖醫(yī)學中心,寧夏生殖與遺傳重點實驗室(銀川,750004)

    卵巢早衰(POF)是由多種病因所致的卵巢功能過早衰竭,發(fā)生于40歲以下的婦女,發(fā)病率約1%~3%[1,2]。POF 的病因復(fù)雜,盡管國內(nèi)外學者提出眾多假說,諸如遺傳、感染、理化/代謝因素、藥物等,但均不能更好地解釋POF的病理生理變化及其臨床特征。近年來有學者提出POF并非不可逆的,殘存的卵泡功能可能再度恢復(fù),POF的發(fā)生與自身免疫功能紊亂密切相關(guān)[3]。本研究對POF患者和正常婦女進行對照研究,通過測定血清中白介素(IL)-1α、IL-1β、淋巴細胞亞群(CD3、CD4、CD8、CD19、CD16+56)水平,從分子水平進一步闡明POF的自身免疫致病機制,以期尋找治療POF的有效方法。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    篩選2009年5月~2010年12月在本中心就診的POF患者30例為研究組,年齡30.45±6.12(21~38)歲;已婚24例(9例無生育要求),未婚6例;原發(fā)不孕7例,繼發(fā)不孕8例。選擇同期月經(jīng)周期規(guī)律,尿黃體生成激素(LH)或B超監(jiān)測有正常排卵,因男性因素或者輸卵管因素不孕的婦女(需首先征得患者同意)為對照組(30例),年齡29.21±3.58歲。研究對象3個月內(nèi)均未使用過甾體激素藥物,在進入本研究前2個月內(nèi)無妊娠、手術(shù)史,肝腎功能均正常。

    1.2 POF 患者診斷標準[4]

    ①青春期以后至40歲前閉經(jīng);②卵泡刺激素(FSH)>40U/L;③雌二醇(E2)<25pg/ml。

    1.3 方法

    1.3.1 儀器及試劑 505型酶標測定儀(美國BIORAD公司),5745型洗板機(美國 BIO-RAD公司),F(xiàn)ACSCalibur流式細胞儀(美國BD公司);IL-1α及IL-1β檢測試劑盒(美國ABI公司);淋巴細胞亞群檢測試劑盒(美國BD公司)。

    1.3.1 標本采集 研究組于任意日的早晨,對照組于月經(jīng)周期第3~5d,空腹12h,晨8時采集靜脈血3ml,3 000rpm/min 離心 5min,留取血清保存,集中測定血清中 IL-1α、IL-1β、淋巴細胞亞群(CD3、CD4、CD8、CD19、CD16+56)水平。

    1.3.2 測定方法 各因子測定均嚴格依照試劑盒說明書進行。IL-1α、IL-1β采用ELISA法測定;淋巴細胞亞群采用熒光免疫法測定。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

    采用SPSS 11.5軟件對資料數(shù)據(jù)進行χ2檢驗。

    2 結(jié)果

    2.1 兩組血清中IL-1α、IL-1β 比較

    研究組血清中 IL-1β水平(27.90±6.63pg/ml)低于對照組(33.73 ±8.63pg/ml,t=2.359,P <0.05);血清 IL-1α 水平研究組(18.15 ±5.30pg/ml)和對照組(19.25 ±3.35pg/ml)無差異(t=0.041,P >0.05)。

    2.2 兩組血清中T淋巴細胞亞群比較

    兩組全血T+B+自然殺傷細胞(NK)、CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、CD19、CD16+56 水平均無差異(P >0.05),見表1。

    表1 研究組與對照組T淋巴細胞亞群測定值比較(pg/ml,±s)

    表1 研究組與對照組T淋巴細胞亞群測定值比較(pg/ml,±s)

    組別T+B+NK CD3 CD4 CD8 CD4/CD8 CD19 CD16+56研究組 99.30 ±3.16 70.50 ±7.62 34.7 ±5.52 31.5 ±7.09 1.15 ±0.30 11.90 ±3.63 16.9 ±7.33對照組 92.97 ±24.45 70.64 ±8.92 35.75 ±4.25 30.38 ±8.91 1.73 ±1.98 10.44 ±8.70 21.13 ±5.37 t 0.809 0.041 0.547 0.337 0.915 0.502 1.67

    3 討論

    3.1 IL-1β對 POF的影響

    IL-1又稱淋巴細胞激活因子,是一種主要由血液中的單核細胞、巨噬細胞以及其它多種類型細胞合成和分泌的重要細胞因子和多肽調(diào)節(jié)因子。IL-1系統(tǒng)由IL-1α、IL-1β、IL-1Ⅰ型受體、IL-1Ⅱ型受體、IL-1受體拮抗劑5種成分組成。其中,IL-1β和生殖內(nèi)分泌的關(guān)系最為密切。IL-1系統(tǒng)參與白細胞不同群體間信息傳遞,在卵泡發(fā)育、排卵和黃體功能調(diào)節(jié)等方面均具有重要作用。Karagouni等[5]用ELISA法證實了卵泡液中IL-1β的存在,并發(fā)現(xiàn)卵泡液中IL-1β的水平較血清中明顯增高。由此可見,IL-1β為卵巢源性。免疫組化研究亦表明在卵細胞發(fā)育的全過程中卵泡液都存在IL-1β的強陽性表達。IL-1β有較強的抗促性腺激素作用,可阻斷顆粒細胞分泌孕酮(P)和形成LH受體,并通過抑制雌激素、P、雄激素和LH受體的形成,阻止卵泡閉鎖。當體內(nèi)的IL-1β下降時,卵泡的發(fā)育及閉鎖受到影響,出現(xiàn)排卵障礙,分泌雌、孕激素下降,卵泡閉鎖加速,而卵泡閉鎖的加速是POF的發(fā)病原因之一。本研究結(jié)果顯示:對照組卵泡早期血清IL-1β 水平為 33.73 ±8.63pg/ml,與早期文獻報道不一致,研究組IL-1β水平低于對照組,而IL-1α水平無差異,提示IL-1β對卵泡發(fā)育具有重要調(diào)節(jié)作用,其作用過程有待進一步探討。

    有研究回顧近30年有關(guān)卵巢炎和POF的文獻,發(fā)現(xiàn)POF患者活化T淋巴細胞增加,該細胞表達主要組織相容性抗原-Ⅱ(MHC-Ⅱ)類分子,產(chǎn)生IL-1β,進而活化卵巢上皮巨噬細胞,分泌細胞因子,進入卵泡液,參與生長卵泡的閉鎖過程[6,7]。

    3.2 淋巴細胞亞群在POF組織中的病理作用

    近年來,眾多的研究表明細胞免疫在POF中起著至關(guān)重要的作用,而CD4+和CD8+T細胞是細胞免疫中的主要細胞。CD4+T細胞根據(jù)分泌細胞因子的不同,分為Th1(分泌IL-2,IFN-γ等)、Th2(分泌IL-6,IL-10等)兩大類,分別參與細胞免疫和體液免疫,兩者之間為動態(tài)平衡,如某種因素打破了這種狀態(tài),則可能導(dǎo)致各種免疫相關(guān)的疾病。Th1細胞占優(yōu)勢,其分泌的細胞因子IL-2、IFN-γ等可誘導(dǎo)顆粒細胞及黃體細胞MHC-Ⅱ類抗原表達誘發(fā)自身免疫應(yīng)答,使顆粒細胞和卵泡受到破壞,從而發(fā)生POF。CD8+T細胞主要指細胞毒性T細胞,其主要功能是特異性殺傷靶細胞。在POF中,卵巢功能減退閉經(jīng)時,CD8+T增加是自身免疫性卵巢炎在外周血的反映。謝梅青[8]報道:在POF患者體內(nèi),CD8+T細胞作為一個整體,雖然其數(shù)量是增加的,但其調(diào)節(jié)功能下降,機體的自身免疫反應(yīng)亢進。所以在POF中,CD8+T細胞亞群水平升高。其升高的程度與疾病的嚴重程度、病情變化、治療反應(yīng)及預(yù)后密切相關(guān)。

    本研究結(jié)果顯示:兩組全血T+B+NK、CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、CD19、CD16+56 水平均無差異,這與文獻報道不一致,其原因可能是:①研究對象的選擇及病程長短的差異;②實驗技術(shù)和測定方法等因素的影響。

    總之,POF病因復(fù)雜,其發(fā)病機制與神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)之間存在著復(fù)雜的聯(lián)系,隨著生殖醫(yī)學的飛速發(fā)展,將為其發(fā)病機理的研究開辟新的途徑。如何早期預(yù)防POF的發(fā)生及恢復(fù)卵巢功能,提高生活質(zhì)量,是國內(nèi)外生殖內(nèi)分泌學者亟待解決的問題。因POF患者可能存在自身免疫功能紊亂,應(yīng)用免疫抑制劑是治療方法之一,但激素類藥物長期應(yīng)用副作用較大,且不易為所有POF患者所接受。而中醫(yī)藥通過多環(huán)節(jié)發(fā)揮整體調(diào)節(jié)作用,進而改善患者癥狀,且副作用較小。因此,中醫(yī)藥與POF的病理生理研究將是極有發(fā)展前景的領(lǐng)域之一。

    1 Gleicher N,Weghofer A,Barad DH.A pilot study of premature ovarian senescence:II.Different genotype and phenotype for genetic and autoimmune etiologies[J].Fertil Steril,2008,3(7):203-205.

    2 Dong L,Jiang L,Men W,et al.Preventive and therapeutic effects of Bushen Huoxue Recipe on autoimmune premature ovarian failure in mice[J].Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao,2008,6(3):294-297.

    3 Zhang P,Shi Y,Gao X,et al.Clinical analysis of Chinese infertility women with premature ovarian failure[J].Neuro Endocrinol Lett,2007,28(5):580-584.

    4 馬良坤,林守清.卵巢早衰與卵巢不敏感綜合征[J].實用婦產(chǎn)科雜志,2003,19(4):198-200.

    5 Karagouni EE,Chryssikopoulos A,Mantzavinos T,et al.Interleukin-1beta and interleukin-lalpha may affect the implantation rate of patients undergoing in vitro fertilization-embryo transfer[J].Fertil Steril,1998,70(3):553-559.

    6 Hoek A,Schoemaker J,Drexhage HA.Premature ovarian failure and ovarian autoimmunity[J].Endocr Rev,1997,18(1):107-134.

    7 Gervera R,Balasch J.Bidirectional effects on autoimmunity and reproduction[J].Hum Reprod Update,2008,14(4):359-366.

    8 謝梅青.卵巢早衰的病因[J].實用婦產(chǎn)科雜志,2003,19(4):193-195.

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