采摘時(shí)期對(duì)沙棗葉茶黃酮與多酚含量影響的研究

摘 要：茶葉因富含多種對(duì)人體有益的活性化合物而被全球廣泛消費(fèi)。茶葉中的黃酮類和多酚類化合物常被作為衡量茶葉功效的重要指標(biāo)之一，對(duì)于新開(kāi)發(fā)的茶葉產(chǎn)品，測(cè)量其中的黃酮和多酚含量有助于評(píng)估該茶葉的功效。研究以新開(kāi)發(fā)的沙棗葉茶為對(duì)象，通過(guò)設(shè)置正交試驗(yàn)優(yōu)化黃酮與多酚的提取條件、采用單因素試驗(yàn)確定最佳的反應(yīng)試劑用量與時(shí)間，探究不同采摘時(shí)期對(duì)沙棗葉茶中黃酮與多酚含量的影響。結(jié)果顯示，5月中旬、9月中旬、9月下旬采摘的沙棗葉茶其總黃酮含量分別為1.086、2.534、1.219 mg·g-1，總酚含量分別為37.330、34.094、17.914 mg·g-1。方差分析顯示，不同采摘時(shí)期沙棗葉茶間的黃酮含量存在極顯著差異（Plt;0.001）、多酚含量存在顯著差異（Plt;0.05）。研究表明，9月中旬采摘的沙棗葉具有最高的黃酮、多酚含量，是制備沙棗葉茶的理想采摘時(shí)期。研究結(jié)果為沙棗葉茶的生產(chǎn)提供了科學(xué)依據(jù)，對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)具有實(shí)際的指導(dǎo)意義。

關(guān)鍵詞：沙棗葉茶; 黃酮; 多酚; 采摘時(shí)間

中圖分類號(hào)：S793.9"""""""" 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A""""" 文章編號(hào)：1002-204X（2024）09-0041-10

doi：10.3969/j.issn.1002-204x.2024.09.008

Study on Effect of Picking Time on Contents of Flavone and Polyphenol in Elaeagnus angustifolia Leaf Tea

Zhang Fang1， Zhang Xin1， 2， 3， Lu Loulou1， Bai Xilong1， Bei Zhanlin1， 2， 3*

（1. College of Biological Science and Engineering， Beifang Ethnic University， Yinchuan， Ningxia 750021; 2. State Ethnic Affairs Commission Key Laboratory of Ecological Protection in Agro-Pastoral Intercropping Area of Yellow River Basin， Yinchuan， Ningxia 750021; 3. Ningxia Economic Forest Genetic Improvement Innovation Team， Yinchuan， Ningxia 750021）

Abstract Tea is widely consumed worldwide because it contains a variety of active compounds that are beneficial to the human body. Flavonoids and polyphenols in tea are often used as one of the important indicators to measure the efficacy of tea. For newly developed tea products， measuring the content of flavonoids and polyphenols is helpful to evaluate the efficacy of the tea. Taking the newly developed Elaeagnus angustifolia leaf tea as the object， orthogonal test was set to optimize the extraction conditions of flavonoids and polyphenols， and single factor test was used to determine the best reaction reagent dosage and time， so as to explore the effects of different picking periods on the contents of flavonoids and polyphenols in Elaeagnus angustifolia leaf tea. The results showed that the total flavonoid content and total phenol content of the leaf tea picked in mid-May， mid-September and late September were 1.086， 2.534 and 1.219 mg·g-1， respectively， and 37.330， 34.094 and 17.914 mg·g-1， respectively. The analysis of variance showed that there were significant differences in the contents of flavonoids and polyphenols between different picking periods （Plt;0.001）. The results showed that the leaf tea picked in mid-September had the highest flavonoid and polyphenol content， which was the ideal picking period for preparing the leaf tea. The results provided a scientific basis for the production of Elaeagnus angustifolia leaf tea and had practical guiding significance for agricultural production.

Key words Elaeagnus angustifolia leaf tea; Flavone; Polyphenol; Picking Time

茶葉作為全球廣泛消費(fèi)的著名飲品，因其富含多種對(duì)人體有益的活性化合物而被廣泛研究。這些化合物包括茶多酚、兒茶素、生物堿、黃酮、游離氨基酸、可溶性總糖和有機(jī)酸等[1]，賦予了茶葉多樣的健康益處，如解暑排毒、體重管理、抗氧化[2]，以及預(yù)防和治療多種疾病，包括癌癥[3]、心血管疾病[4]、抑郁癥[5]等。黃酮、酚類化合物是其中最有效的化合物[6-9]，直接決定著茶葉的品質(zhì)與健康功效。世界上生產(chǎn)規(guī)模較大的茶葉生產(chǎn)地主要有中國(guó)、印度、日本、斯里蘭卡、肯尼亞等國(guó)家。

中國(guó)作為茶葉的發(fā)源地之一，許多省份都出產(chǎn)茶葉，且多集中在南部各省。在中國(guó)西北地區(qū)，獨(dú)特的氣候和生態(tài)條件孕育了具有特殊營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的植物，如沙棘（Hippophae rhamnoides L.），研制出的沙棘葉茶[10]受到了廣泛關(guān)注，但受沙棘葉形較小、人工采摘成本高等因素影響嚴(yán)重制約了其產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展。與沙棘同科的沙棗（Elaeagnus angustifolia L.）是一種在新疆、甘肅、寧夏、內(nèi)蒙古等地區(qū)廣泛分布的落葉喬木[11]，沙棗葉中富含活性成分，如糖類、黃酮和多酚類化合物，對(duì)人體健康具有諸多益處[12-13]，如抗疲勞[14]、抗關(guān)節(jié)炎[15]、抗癌、抗氧化、降血糖等[16-17]。目前，沙棗利用主要是食用果實(shí)，葉片開(kāi)發(fā)常被忽視，大量被當(dāng)做廢棄物丟棄、焚燒或作為肥料還田，葉片資源未被充分利用。因此，該研究主要集中于探索沙棗葉片作為制茶原料的潛力，通過(guò)研究不同采摘時(shí)期沙棗葉茶的黃酮、多酚含量，旨在揭示采摘時(shí)期對(duì)沙棗葉茶活性化合物的影響，為沙棗葉的有效利用提供科學(xué)依據(jù)，并為相關(guān)農(nóng)業(yè)實(shí)踐和茶葉生產(chǎn)提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 沙棗葉茶的制備

摘取位于寧夏銀川的北方民族大學(xué)校園內(nèi)沙棗樹(shù)的葉片，制成沙棗葉茶。將沙棗葉茶研磨成粉末狀，存放于密封的檔案袋中備用。

1.2 試驗(yàn)儀器

超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，KQ5200E型）、大容量高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司，CHT210R）、分析天平（上海?？惦娮觾x器廠，AB145S）、移液槍（上海力辰邦西儀器科技有限公司，Discovery-H 100-1000μL）。

1.3 試驗(yàn)試劑

無(wú)水乙醇（天津市博華通化工產(chǎn)品銷售中心，分析純）、亞硝酸鈉（天津市瑞金特化學(xué)品有限公司，分析純），硝酸鋁（天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司，分析純），氫氧化鈉（天津市大茂化學(xué)試劑廠，分析純）、無(wú)水碳酸鈉（上海廣諾化學(xué)科技有限公司，分析純）、福林酚試劑（上海瑞永生物科技有限公司，分析純）、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（酷爾化學(xué)，質(zhì)量純度98%）、沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品（煙臺(tái)市雙雙化工有限公司，質(zhì)量純度99.0%）、石油醚（徐州天鴻化工有限公司，分析純）。

1.4 總黃酮含量測(cè)定方法

1.4.1 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線

使用70%乙醇配制1 g·L-1蘆丁對(duì)照品溶液。按照一定體積梯度（0、0.013、0.026、0.039、0.052、0.065、0.078 mL）向10 mL容量瓶中加入對(duì)照品溶液，用70%乙醇調(diào)至5 mL。依次加入5%亞硝酸鈉溶液0.4 mL、靜置6 min，10%硝酸鋁溶液0.4 mL、靜置6 min，4%氫氧化鈉溶液4.0 mL、靜置15 min;最后用蒸餾水定容至10 mL，并在510 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。根據(jù)蘆丁質(zhì)量濃度與吸光度的關(guān)系，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4.2 正交試驗(yàn)確定最佳提取條件

稱取沙棗葉茶粉末0.1 g，加入石油醚5 mL，震蕩30 min，重復(fù)2次，以去除葉綠素和脂質(zhì)。揮干石油醚后，加入特定比例和濃度的乙醇溶液，使用超聲波輔助提取總黃酮?？紤]料液比（1︰40、1︰50、1︰60）、乙醇濃度（60%、70%、80%）、超聲時(shí)間（10、20、30 min）、溫度（55 ℃、60 ℃、65 ℃）等因素的影響，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)（表1）。提取液于4 600 r·min-1離心10 min，取上清液進(jìn)行總黃酮含量測(cè)定，確定最佳提取工藝。

1.4.3 黃酮的最佳顯色反應(yīng)條件

1.4.3.1 樣品溶液制備 精確稱取沙棗葉茶粉末0.5 g，置于25 mL的離心管中。根據(jù)預(yù)先確定的最佳提取條件，將沙棗葉茶粉末與適量的提取溶劑混合。在4 600 r·min-1速度下離心10 min，吸取上清液至50 mL容量瓶中，使用已確定的最佳乙醇濃度稀釋至刻度，充分搖勻。從稀釋后的提取物中精確量取25 mL，轉(zhuǎn)移到50 mL的容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，并充分搖勻，作為樣品溶液備用。

1.4.3.2 顯色反應(yīng)條件的優(yōu)化 從每種樣品溶液中精確吸取1 mL置于25 mL的容量瓶中。設(shè)立27組單因素試驗(yàn)，每種樣品溶液中僅改變顯色劑的加入量（4% NaNO2溶液、5% Al（NO3）3溶液、4% NaOH溶液）和反應(yīng)時(shí)間，進(jìn)行顯色反應(yīng)條件的優(yōu)化，確定最佳顯色劑加入量和反應(yīng)時(shí)間。

1.4.3.3 乙醇定容濃度的優(yōu)化 分別使用體積分?jǐn)?shù)為30%、40%、50%、60%、70%的乙醇對(duì)樣品溶液進(jìn)行定容，于510 nm處測(cè)定吸光度值，以確定最佳乙醇定容濃度。

1.4.4 沙棗葉茶總黃酮含量測(cè)定

稱取沙棗葉茶粉末0.1 g于10 mL離心管中，每組沙棗葉茶粉末按最佳提取條件（顯色劑加入量、顯色劑反應(yīng)時(shí)間、乙醇定容濃度），在510 nm處測(cè)得吸光度（Abs），將沙棗葉茶樣品的吸光度值對(duì)照蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出沙棗葉茶中總黃酮的含量。3次重復(fù)，計(jì)算平均值，以提高數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。

1.5 總酚含量測(cè)定

1.5.1 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線

采用福林酚法測(cè)定總酚含量，使用蒸餾水配制0.20 mg·mL-1沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。精確量取沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL于6支試管中，并用蒸餾水定容至10 mL。分別吸取上述定容溶液0.1 mL于1.5 mL離心管中，加入福林酚試劑0.5 mL、反應(yīng)4 min，加入7.5%碳酸鈉0.4 mL，搖勻避光靜置60 min，在760 nm處測(cè)定吸光度。根據(jù)沒(méi)食子酸質(zhì)量濃度與吸光度的關(guān)系，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.5.2 正交試驗(yàn)確定不同采摘時(shí)期沙棗葉茶多酚最佳提取條件

稱取沙棗葉茶粉末0.1 g置于10 mL離心管內(nèi)，加入特定比例和濃度的乙醇溶液，使用超聲波輔助提取總酚?？紤]料液比（1︰80、1︰90、1︰100）、乙醇濃度（60%、70%、80%）、超聲時(shí)間（25、30、35 min）、溫度（55 ℃、60 ℃、65 ℃）等因素的影響，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)（表2）。提取液經(jīng)12 000 r·min-1離心10 min后取上清液，進(jìn)行總酚含量的測(cè)定，最終確定最佳提取工藝。

1.5.3 確定不同采摘時(shí)期沙棗葉茶多酚最佳反應(yīng)條件

1.5.3.1 樣品制備 取沙棗葉茶粉末0.2 g，按照以上測(cè)得的最佳提取條件操作。提取液經(jīng)12 000 r·min-1離心10 min，過(guò)濾分離上清液和濾渣;濾渣重復(fù)上述操作，放置于25 mL容量瓶中作為樣品溶液備用。

1.5.3.2 顯色反應(yīng)條件的優(yōu)化 從每種樣品溶液中精確吸取1 mL置于25 mL的容量瓶中。通過(guò)16組單因素試驗(yàn)，每種樣品溶液中只改變顯色劑的加入量（福林酚溶液，7.5%碳酸鈉溶液）和反應(yīng)時(shí)間，以此進(jìn)行顯色反應(yīng)條件的優(yōu)化，確定最佳顯色劑加入量和反應(yīng)時(shí)間。

1.5.4 沙棗葉茶總酚含量測(cè)定

稱取沙棗葉茶粉末0.2 g于10 mL離心管中，每種樣品沙棗葉茶粉末按最佳提取條件（顯色劑加入量、顯色劑反應(yīng)時(shí)間），在760 nm處測(cè)得吸光度。根據(jù)沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算不同采摘時(shí)期沙棗葉茶的總酚含量。

1.6 注意事項(xiàng)

在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)室條件（如溫度、濕度）應(yīng)保持一致，以避免環(huán)境因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。

1.7 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用Origin Lab OriginPro 2018、Microsoft Excel 2003對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理分析，確定黃酮與多酚的提取條件、最佳的顯色劑加入量和反應(yīng)時(shí)間、黃酮的乙醇定容濃度，優(yōu)化黃酮與多酚的提取工藝，計(jì)算沙棗葉茶總黃酮含量與總酚含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以波長(zhǎng)510 nm處的吸光度A為橫坐標(biāo)，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量濃度（g·L-1）為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性回歸方程為Y=0.139 6 x-0.111 3（R2=0.991 5）。結(jié)果（圖1a）表明，線性回歸方程具有良好的相關(guān)性，質(zhì)量濃度范圍在0.013 0～0.078 0 g·L-1時(shí)，線性關(guān)系良好。

以波長(zhǎng)760 nm處的吸光度A為橫坐標(biāo)，沒(méi)食子酸質(zhì)量濃度（g·L-1）為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性回歸方程為Y=0.612 3 x-0.053 3（R2=0.999 8）。結(jié)果（圖1b）表明，線性回歸方程具有良好的相關(guān)性，質(zhì)量濃度范圍在0.2～1.2 g·L-1時(shí)，線性關(guān)系良好。

2.2 沙棗葉茶黃酮和多酚的最佳提取條件

2.2.1 黃酮提取條件

黃酮類化合物是茶葉的主要有效成分之一，黃酮類化合物具有抗癌、抗炎鎮(zhèn)痛、抑菌抗病毒、抗氧化、治療動(dòng)脈粥樣硬化和糖尿病等作用[15，18-21]。近年來(lái)，對(duì)黃酮的提取成為研究熱點(diǎn)，目前已知對(duì)茶葉黃酮類化合物的提取方法有很多，包括紫外分光光度提取法、超聲波提取法、有機(jī)溶劑提取法、酶解法、超臨界流體萃取法、雙水相萃取法等[22]。

黃酮類化合物雖然有抗氧化等生理活性，但本身化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，在超聲提取過(guò)程中要注意超聲時(shí)間、溫度、料液比、提取溶劑選擇對(duì)黃酮的影響。黃酮在乙醇中的溶解度一般隨著超聲溫度的升高而增大，提取液黏度減小，提取速度加快。但溫度過(guò)高，一方面其活性成分易被破壞，雜質(zhì)的溶出量增加，影響黃酮的提取率;另一方面還會(huì)造成溶劑損失。研究表明，用乙醇提取黃酮，當(dāng)乙醇濃度偏低時(shí)，總黃酮含量及粗黃酮收率均較低，且提取液易腐敗變質(zhì)，原因是乙醇易揮發(fā)并且水的極性較大，當(dāng)?shù)蜐舛鹊囊掖既芤鹤鳛槿軇r(shí)易把蛋白質(zhì)、糖類等易溶于水的物質(zhì)浸提出來(lái)[23-24]。

該試驗(yàn)結(jié)果（表3）表明，黃酮類化合物的提取率隨著乙醇濃度的增加而提高，當(dāng)乙醇濃度達(dá)到體積分?jǐn)?shù)的80%時(shí)，提取率出現(xiàn)下降。可能原因是較高的乙醇濃度下，除黃酮外的其他可溶性物質(zhì)提取率隨之增加，導(dǎo)致黃酮的相對(duì)提取效率降低。此外，在高溫條件下黃酮的穩(wěn)定性降低，熱分解可能產(chǎn)生酚羥基，從而影響吸光度的測(cè)定，故超聲提取的時(shí)間和溫度應(yīng)適中控制。

2.2.2 多酚提取條件

多酚類化合物具有抗癌、抗氧化、抗菌防腐，治療骨質(zhì)疏松、心血管和眼部疾病等作用[12-14，25-28]。不同的酚類化合物具有不同的極性和化學(xué)特性，會(huì)影響其在特殊溶劑中的溶解度。一般選擇乙醇與水的混合物作為溶劑從植物中提取多酚[29]。提取方法受多酚本身的化學(xué)性質(zhì)、樣品粒徑及雜質(zhì)的影響。

提取時(shí)間、溫度、溶劑料液比、提取溶劑的選擇是影響活性物質(zhì)提取率的關(guān)鍵參數(shù)。超聲時(shí)間過(guò)長(zhǎng)和高溫會(huì)增加酚類化合物氧化的風(fēng)險(xiǎn)，降低提取物中的生物活性作用[30-31]，增加其他物質(zhì)的浸出率，因此，多酚類化合物可在較高溫度和較短時(shí)間內(nèi)有效提取（表4）。過(guò)長(zhǎng)的提取時(shí)間可能促使多酚類化合物發(fā)生氧化分解;隨著料液比的增加，提取劑與沙棗葉茶粉末的接觸更為充分，提高了多酚的提取率，但較多的提取溶劑量可能會(huì)導(dǎo)致多酚濃度被稀釋，降低提取率。

通過(guò)對(duì)不同時(shí)間段采收的沙棗葉茶進(jìn)行分析，可以觀察到季節(jié)性變化對(duì)黃酮含量有顯著影響。此外，雖然料液比的增大有利于提高黃酮提取率，但是可能會(huì)導(dǎo)致多酚濃度的稀釋，降低多酚提取率，因此，應(yīng)選擇適宜料液比以避免浸提效率降低或成本增加。綜合考慮提取效率和成本，建議采用中等乙醇濃度和適宜的料液比，同時(shí)控制適宜的浸提溫度和時(shí)間，以優(yōu)化沙棗葉茶中黃酮和多酚的提取過(guò)程。

通過(guò)上述分析，最終確定了沙棗葉茶中黃酮和多酚的最佳提取條件（表5、表6），而且深入理解了不同因素對(duì)提取過(guò)程的影響，為后續(xù)研究提供重要的科學(xué)依據(jù)。

2.3 沙棗葉茶最佳反應(yīng)條件對(duì)黃酮含量的影響

黃酮類物質(zhì)的測(cè)定采用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH比色法[32]，該方法主要基于NaNO2對(duì)黃酮類化合物的還原作用、Al（NO3）3的絡(luò)合作用、NaOH引起的顯色反應(yīng)，共同生成紅色化合物進(jìn)行比色測(cè)定[33]。該方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高，適用于復(fù)雜生物樣品中黃酮含量的快速測(cè)定。

該研究通過(guò)調(diào)整NaNO2、Al（NO3）3、NaOH溶液的用量及反應(yīng)時(shí)間進(jìn)行單因素試驗(yàn)，確定了最佳的顯色劑用量和反應(yīng)時(shí)間（表7），從而確保準(zhǔn)確測(cè)定不同采摘時(shí)期沙棗葉茶中的總黃酮含量。不同采摘時(shí)期的沙棗葉片由于生理狀態(tài)的差異，其黃酮含量也存在顯著差異。其中5月中旬采摘的沙棗葉片較幼嫩、含水量高，在炒青過(guò)程中容易失去大量水分，導(dǎo)致部分黃酮及其他活性物質(zhì)損失;相比之下，9月采摘的沙棗葉片更為成熟，含水量低，炒青過(guò)程中的水分蒸發(fā)較少，更有利于黃酮類物質(zhì)的保存（圖2）。分析表明，不同采摘時(shí)期的沙棗葉茶中黃酮含量對(duì)NaNO2、Al（NO3）3、NaOH試劑的反應(yīng)敏感度有所變化。

這些優(yōu)化的反應(yīng)條件不僅考慮了試劑的化學(xué)性質(zhì)和反應(yīng)機(jī)理，還充分考慮了沙棗葉片季節(jié)性生理狀態(tài)對(duì)黃酮含量的影響，確保了測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。

2.4 沙棗葉茶最佳反應(yīng)條件對(duì)多酚含量的影響

多酚是一類抗氧化性極強(qiáng)的化合物，是植物體內(nèi)具有多元酚結(jié)構(gòu)的次生代謝物[34]，該試驗(yàn)采用Folin-Ciocalteu法測(cè)定多酚含量。在堿性條件下，酚類物質(zhì)能與Folin-Ciocalteu試劑反應(yīng)，將鎢鉬酸還原（使W6+變?yōu)閃5+）生成藍(lán)色的絡(luò)合物，顏色深淺與多酚含量呈正相關(guān)[35-36]。

在Na2CO3溶液用量和反應(yīng)時(shí)間一定的情況下，福林酚試劑的用量對(duì)反應(yīng)結(jié)果會(huì)有影響，隨著福林酚試劑用量的變化，吸光度會(huì)不斷變化，福林酚試劑與總酚的反應(yīng)需要在堿性環(huán)境下進(jìn)行;隨著Na2CO3溶液濃度的增加，吸光度呈上升趨勢(shì)。項(xiàng)目組通過(guò)調(diào)整福林酚試劑和Na2CO3溶液的用量及反應(yīng)時(shí)間單因素試驗(yàn)，找出能夠最大化反應(yīng)吸光度的試劑用量和反應(yīng)時(shí)間（表8），從而確保能夠準(zhǔn)確測(cè)定不同采摘時(shí)期沙棗葉茶中的總多酚含量。

5月中旬采摘制作的沙棗葉茶反映了早季沙棗葉中多酚含量的測(cè)定需要較高的試劑濃度和較長(zhǎng)的反應(yīng)時(shí)間以達(dá)到穩(wěn)定的顯色效果;9月中旬與9月下旬沙棗葉的多酚含量可能因成熟度提高而增加（圖3）。表明，夏末的沙棗葉由于自然老化或其他生理變化，其多酚含量對(duì)福林酚和Na2CO3試劑的反應(yīng)敏感度有所變化。

顯色劑最佳反應(yīng)條件的確定不僅依據(jù)了化學(xué)反應(yīng)的基本原理，也考慮了沙棗葉在不同生長(zhǎng)階段的生理特性對(duì)多酚含量測(cè)定的影響，確保了測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。通過(guò)這種方法，可以更準(zhǔn)確地評(píng)估沙棗葉茶中多酚類化合物的含量，為后續(xù)的品質(zhì)評(píng)估和功效研究提供科學(xué)依據(jù)。

2.5 不同采摘時(shí)期對(duì)沙棗葉茶黃酮、多酚含量的影響

通過(guò)綜合分析圖4數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，不同采摘時(shí)期沙棗葉茶中黃酮含量和多酚含量表現(xiàn)出顯著差異。在0.1 g沙棗葉茶粉末樣本中，9月中旬采摘的沙棗葉茶黃酮含量最高，達(dá)到109.9 mg·g-1，表明9月中旬沙棗葉中黃酮類化合物的積累達(dá)到峰值。統(tǒng)計(jì)分析顯示，不同時(shí)間采摘的沙棗葉茶在總黃酮含量上的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.001）。同樣，對(duì)于總酚含量，0.2 g沙棗葉茶粉末樣本中5月中旬采摘的沙棗葉茶表現(xiàn)出最高值，為5.33 mg·g-1，表明早春時(shí)節(jié)沙棗葉中多酚類化合物的含量較高。不同采摘時(shí)期的沙棗葉茶的總酚含量差異同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.001）。

黃酮和多酚含量在不同采摘時(shí)期呈現(xiàn)的變化趨勢(shì)，可能與沙棗葉的生長(zhǎng)條件和生理狀態(tài)密切相關(guān)。沙棗嫩芽的生長(zhǎng)溫度需在5 ℃以上，而寧夏的溫帶大陸性氣候特點(diǎn)，特別是銀川地區(qū)的晝夜溫差大、夏季干旱少雨，導(dǎo)致土壤含水量偏低，這些條件與沙棗葉中酚類物質(zhì)和黃酮類物質(zhì)的生物合成路徑密切相關(guān)。酚類物質(zhì)和黃酮類物質(zhì)主要通過(guò)莽草酸和丙二酸途徑合成[37-38]，其前體物質(zhì)來(lái)源于植物的初生代謝，通過(guò)特定酶的催化作用產(chǎn)生多樣的次生代謝產(chǎn)物，促進(jìn)了黃酮和多酚類物質(zhì)合成關(guān)鍵酶的表達(dá)，例如Ⅲ型聚酮合酶家族的查爾酮合成酶[37，39]，其活性在干旱條件下上升。夏季長(zhǎng)日照和干旱的氣候條件促進(jìn)了黃酮類物質(zhì)的合成，從而影響了沙棗葉中這些活性成分的積累[40]。特別是9月中旬，隨著溫度的逐漸降低和沙棗葉的成熟，黃酮含量達(dá)到最高，而多酚含量雖然在5月中旬達(dá)到峰值，但在9月時(shí)仍保持在較高水平，表明沙棗葉在整個(gè)生長(zhǎng)周期中都具有較高的抗氧化活性成分。

這些發(fā)現(xiàn)揭示了沙棗葉采摘時(shí)期對(duì)其主要活性成分含量的影響，為沙棗葉茶的品質(zhì)評(píng)價(jià)和最佳采摘時(shí)間的確定提供了科學(xué)依據(jù)。同時(shí)，這些結(jié)果也強(qiáng)調(diào)了在沙棗葉茶的加工和利用中，應(yīng)考慮不同采摘時(shí)期對(duì)黃酮和多酚含量的影響，以優(yōu)化其健康功效和口感體驗(yàn)。

3 結(jié)論

該研究深入探討了不同采摘時(shí)期對(duì)沙棗葉茶中黃酮和多酚含量的影響。結(jié)果顯示，9月中旬采摘的沙棗葉茶黃酮含量顯著高于5月中旬和9月下旬采摘，而5月中旬采摘的沙棗葉茶總酚含量則顯著高于9月的兩個(gè)采摘時(shí)段。綜合考慮沙棗的生長(zhǎng)周期以及沙棗葉和果實(shí)的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，推薦在9月上旬到中旬采摘沙棗葉，以優(yōu)化沙棗葉中活性成分的含量，同時(shí)減少對(duì)沙棗果實(shí)生長(zhǎng)的影響。9月沙棗葉的營(yíng)養(yǎng)成分較為豐富，而且這一時(shí)期采摘不會(huì)對(duì)沙棗花期和果期產(chǎn)生不利影響，從而保護(hù)了沙棗的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。該研究不僅揭示了沙棗葉茶中活性成分含量的季節(jié)性變化，而且為農(nóng)業(yè)的實(shí)際生產(chǎn)提供了科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 王澤農(nóng). 茶葉生物化學(xué)[M]. 北京：農(nóng)業(yè)出版社，1980.

[2] TRUONG V L， JEONG W S. Antioxidant and anti-inflammatory roles of tea polyphenols in inflammatory bowel diseases[J]. Food science and human wellness， 2022， 11（3）： 502-511.

[3] CHEN D， DOU Q P. Tea polyphenols and their roles in cancer prevention and chemotherapy[J]. International journal of molecular sciences， 2008， 9（7）： 1196-206.

[4] HODGSON J M， CROFT K D. Tea flavonoids and cardiovascular health[J]. Molecular aspects of medicine，2010， 31（6）： 495-502.

[5] YAN Z， ZHONG Y， DUAN Y， et al. Antioxidant mechanism of tea polyphenols and its impact on health benefits[J]. Animal Nutrition， 2020， 6（2）： 115-23.

[6] HE H F， WEI K， YIN J， et al. Insight into Tea Flavonoids： Composition and Chemistry[J]. Food reviews international， 2021， 37（8）： 812-23.

[7] LI S M， ZHANG L， WAN X C， et al. Focusing on the recent progress of tea polyphenol chemistry and perspectives[J]. Food science and human wellness， 2022， 11（3）： 437-44.

[8] LI M， QIAN M Q， JIANG Q， et al. Evidence of Flavonoids on Disease Prevention[J]. ANTIOXIDANTS，2023， 12（2）： 527.

[9] DURAZZO A， LUCARINI M， SOUTO E B， et al. Polyphenols： A concise overview on the chemistry， occurrence， and human health[J]. Phytotherapy research， 2019， 33（9）： 2221-2243.

[10] 周宏林. 一種沙棘葉茶及其制備方法：105010589A [P]. 2015-11-04.

[11] 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì). 中國(guó)植物志（第52卷 第2分冊(cè)）[M]. 北京：科學(xué)出版社，1983.

[12] FENG J， ZHANG Y. The potential benefits of polyphenols for corneal diseases[J]. Biomedicine amp; Pharmacotherapy， 2023， 169： 115862.

[13] SU Z， YAO B， LIU G， et al. Polyphenols as potential preventers of osteoporosis： A comprehensive review on antioxidant and anti-inflammatory effects， molecular mechanisms，and signal pathways in bone metabolism[J]. The Journal of Nutritional Biochemistry， 2024， 123： 109488.

[14] PATRA S， PRADHAN B， NAYAK R， et al. Dietary polyphenols in chemoprevention and synergistic effect in cancer： Clinical evidences and molecular mechanisms of action[J]. Phytomedicine， 2021， 90： 153554.

[15] PANAHI Y， ALISHIRI G H， BAYAT N， et al. Efficacy of Elaeagnus Angustifolia extract in the treatment of knee osteoarthritis： a randomized controlled trial[J]. （1611-2156 （Print））.

[16] TIAN W， HUANG J， ZHANG W， et al. Harnessing natural product polysaccharides against lung cancer and revisit its novel mechanism[J]. Pharmacological Research， 2024， 199：" 107034.

[17] 阿依古力·司馬義，托乎它西古麗·肉孜. 淺談沙棗營(yíng)養(yǎng)成分及藥效研究[J]. 中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2020，26（10）：58-60.

[18] FARZAEI M H， BAHRAMSOLTANI R， ABBASABADI Z， et al. A comprehensive review on phytochemical and pharmacological aspects of Elaeagnus angustifolia L[J]. Journal of Pharmacy and Pharmacology， 2015， 67（11）： 1467-80.

[19] LIAO G， LIU W， DAI Y， et al. Beneficial effects of flavonoids on animal models of atherosclerosis： A systematic review and meta-analysis[J]. iScience， 2023， 26（11）： 108337.

[20] DENG M-G，LIU F， WANG K， et al. Association between dietary flavonoid intake and depressive symptoms： A cross-sectional research[J]. General Hospital Psychiatry， 2024， 86： 75-84.

[21] SUDHESH DEV S， FARGHADANI R， ZAINAL ABIDIN S A， et al. Flavonoids as receptor tyrosine kinase inhibitors in lung cancer[J]. Journal of Functional Foods， 2023， 110： 105845.

[22] 郭雪峰，岳永德. 黃酮類化合物的提取·分離純化和含量測(cè)定方法的研究進(jìn)展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007（26）：8083-8086.

[23] 夏新奎，楊海霞，宋清猛. 不同品種茶葉黃酮類化合物含量的比較分析[J]. 信陽(yáng)農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校學(xué)報(bào)，2008（3）：113-115.

[24] 姚小敏，覃成箭，羊金梅，等. 茶葉中總黃酮的提取、鑒別及其含量測(cè)定[J]. 右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005（6）：779-781.

[25] SANDOVAL-ACU?A C， FERREIRA J， SPEISKY H. Polyphenols and mitochondria： An update on their increasingly emerging ROS-scavenging independent actions[J]. Archives of Biochemistry and Biophysics， 2014， 559：" 75-90.

[26] PATRA S， PRADHAN B， NAYAK R， et al. Dietary polyphenols in chemoprevention and synergistic effect in cancer： Clinical evidences and molecular mechanisms of action[J]. Phytomedicine， 2021， 90.

[27] GROSSO G， GODOS J， CURRENTI W， et al. The effect of dietary polyphenols on vascular health and hypertension： Current evidence and mechanisms of action [J]. Nutrients， 2022， 14（3）.

[28] EFENBERGER-SZMECHTYK M， NOWAK A， CZYZOWSKA A. Plant extracts rich in polyphenols： antibacterial agents and natural preservatives for meat and meat products[J]. Critical reviews in food science and nutrition， 2021， 61（1）： 149-78.

[29] VURAL N， CAVULDAK?， AKAY M A， et al. Determination of the various extraction solvent effects on polyphenolic profile and antioxidant activities of selected tea samples by chemometric approach[J]. Journal of food measurement and characterization， 2020， 14（3）： 1286-305.

[30] MOJZER E B， HRNCIC M K， SKERGET M， et al. Polyphenols： Extraction methods， antioxidative action， bioavailability and anticarcinogenic effects[J]. Molecules，

2016， 21（7）： 901.

[31] KHOSRAVI-DARANI K， VASHEGHANI-FARAHANI E. Application of supercritical fluid extraction in biotechnology[J]. Critical reviews in biotechnology， 2005， 25（4）： 231-42.

[32] 何珺，顏仁梁，劉志剛. NaNO2-Al（NO3）3-NaOH比色法測(cè)定總黃酮應(yīng)用中的常見(jiàn)問(wèn)題[J]. 今日藥學(xué)，2009，19（12）：18-21.

[33] 劉立群. 有機(jī)理論與藥物分析[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，1984.

[34] 趙盈，於天，鄭志剛，等. 多酚在植物中的分布及其生物

活性研究進(jìn)展[J]. 中草藥，2023，54（17）：5825-5832.

[35] 杜丹丹，李建科. Folin-Ciocalteu比色法測(cè)定石榴皮多酚含量條件的優(yōu)化[J]. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2011，39（5）：190-196.

[36] MUSCI M， YAO S C. Optimization and validation of Folin-Ciocalteu method for the determination of total polyphenol content of Pu-erh tea[J]. International Journal of Food Sciences and Nutrition， 2017， 68（8）： 913-918.

[37] 林春草，陳大偉，戴均貴. 黃酮類化合物合成生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào)，2022，57（5）：1322-1335.

[38] 王玲平，周生茂，戴丹麗，等. 植物酚類物質(zhì)研究進(jìn)展[J]. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2010，22（5）：696-701.

[39] 諸姮，胡宏友，盧昌義，等. 植物體內(nèi)的黃酮類化合物代謝及其調(diào)控研究進(jìn)展[J]. 廈門大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)

版），2007（S1）：136-143.

[40] 趙瑩，楊欣宇，趙曉丹，等. 植物類黃酮化合物生物合成調(diào)控研究進(jìn)展[J]. 食品工業(yè)科技，2021，42（21）：454-463.

責(zé)任編輯：李曉瑞