雞大腸桿菌病和慢性呼吸道病混感的診斷與防治研究

當(dāng)前家禽養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)已經(jīng)成為帶動區(qū)域經(jīng)濟健康發(fā)展的有力支撐，規(guī)?；仪蒺B(yǎng)殖場的建設(shè)數(shù)量在不斷增加。雞養(yǎng)殖業(yè)作為家禽養(yǎng)殖業(yè)的重要組成，具有養(yǎng)殖周期短，成本投入低，經(jīng)濟回報高的特征，是很多養(yǎng)殖戶樂于從事的養(yǎng)殖行業(yè)。然而，近些年雞養(yǎng)殖業(yè)的整體發(fā)展現(xiàn)狀來看，隨著養(yǎng)殖規(guī)模的進(jìn)一步擴大，傳染性疾病的發(fā)生流行率顯著升高，外來傳染性疾病的引入使得風(fēng)險增高，給疾病的診斷和防控工作帶來了很大難題。從目前雞傳染性疾病的整體流行特點和流行趨勢來看，單一的傳染性疾病發(fā)生流行率逐年下降，很多疾病表現(xiàn)出混合感染、繼發(fā)感染，臨床癥狀十分復(fù)雜，疾病的診斷難度進(jìn)一步加大。大腸桿菌病和慢性呼吸道疾病是現(xiàn)代雞養(yǎng)殖領(lǐng)域發(fā)生流行率極高的兩類接觸性傳染性疾病，前者是由致病性大腸桿菌引起，后者屬于支原體感染，兩種疾病疊加之后會使得癥狀更加復(fù)雜，臨床診斷難度進(jìn)一步加大，同時也會加重病情，使得養(yǎng)殖場的發(fā)病率和死亡率進(jìn)一步升高。本次研究在對一個養(yǎng)殖場的實際發(fā)病病例進(jìn)行探討的基礎(chǔ)上，明確了雞大腸桿菌病和慢性呼吸道疾病的流行特點，然后分析了混合感染的診斷與防治過程，希望對更好地降低大腸桿菌病和慢性呼吸道疾病混合感染發(fā)生率有一定幫助。

一、混合感染病雞的病例分析

近兩年，在安徽省池州市貴池區(qū)的一個規(guī)?；u養(yǎng)殖場當(dāng)中突然爆發(fā)了一種傳染性疾病，短短一周時間該養(yǎng)殖場有9%以上的患病雞死亡，給養(yǎng)殖場帶來了較為嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。該類疾病先是在一個育成雞雞舍當(dāng)中發(fā)病，患病雞表現(xiàn)為呼吸急促，咳嗽氣喘，然后出現(xiàn)嚴(yán)重的腹瀉現(xiàn)象，采食量逐漸下降，精神萎靡不振，發(fā)病期間養(yǎng)殖戶嘗試使用了慶大霉素、土霉素等藥物進(jìn)行治療，臨床癥狀得到了進(jìn)一步的緩和，但是并不能夠徹底根除病情，一旦停藥養(yǎng)殖場的病情就會突然加重，再次使用藥物進(jìn)行治療的效果呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢?？吹蕉喾N藥物治療無效之后，才將病情上報當(dāng)?shù)孬F醫(yī)站，獸醫(yī)到達(dá)養(yǎng)殖場通過妥善有效的檢查和流行病學(xué)觀察，能夠發(fā)現(xiàn)該養(yǎng)殖場只進(jìn)行了重大傳染性疾病的免疫接種，并且疫苗免疫接種程序十分混亂，在雞舍當(dāng)中會存在年齡不同來源不同的雞群混合養(yǎng)殖的現(xiàn)象，整體養(yǎng)殖密度較大，環(huán)境污染較為嚴(yán)重，有大量糞便沒有得到有效清理，雞舍內(nèi)部的濕度相對較大。隨即對病死雞進(jìn)行進(jìn)一步解剖觀察，采集病料進(jìn)行了病原分離鑒定，在病料當(dāng)中分離到致病性大腸桿菌和支原體，由此可以判定大腸桿菌和支原體混合感染引發(fā)的傳染性疾病，在明確病原的基礎(chǔ)上制定了相應(yīng)的防治方案，很好地控制了病情，避免損失加大。

二、兩種雞疾病的流行病學(xué)

1、雞大腸桿菌病的流行病學(xué)

①病原學(xué)

雞大腸桿菌病是由大腸桿菌引起的一種細(xì)菌性疾病，主要影響雞的腸道。大腸桿菌病的病原屬于腸桿菌科大腸桿菌屬，根據(jù)抗原特性可分為多種血清型，其中與雞大腸桿菌病相關(guān)的血清型主要有O1、O2、O78、O81、O89等，不同血清型的大腸桿菌在生物學(xué)特性和致病性方面存在一定差異。大腸桿菌廣泛分布于自然界，可以在土壤、水源、飼料、腸道等環(huán)境中生存，具有較強的適應(yīng)性，可以在不同溫度、濕度、酸堿度等環(huán)境中存活和繁殖。在雞舍內(nèi)，大腸桿菌可通過糞便、羽毛、空氣等途徑傳播。從理化特點來看，大腸桿菌為革蘭氏陰性菌，無芽孢，多數(shù)菌株有鞭毛。在普通瓊脂平板培養(yǎng)基上，大腸桿菌呈灰白色、光滑、濕潤的菌落，該菌對干燥、陽光、消毒劑等具有一定的抵抗力，但在高溫、酸堿度變化等條件下容易死亡。

②流行病學(xué)

雞大腸桿菌病的傳染源主要是病雞和帶菌雞，病雞的糞便、呼吸道分泌物、血液等含有大量病原菌，是疾病傳播的主要來源，此外，污染的飼料、飲水、羽毛、雞舍等也是潛在的傳染源。從傳播渠道來看，大腸桿菌病毒可以通過糞-口途徑、呼吸道傳播、接觸傳播，造成疫情大范圍傳播蔓延。目前該種疾病可感染各種年齡和品種的雞，但以雛雞和免疫力較低的雞最為易感，雞群密度大、衛(wèi)生條件差、營養(yǎng)不良等因素均會導(dǎo)致雞的免疫力下降，增加感染的風(fēng)險。雞大腸桿菌病在雞場中廣泛存在，易引起地方性流行，疾病傳播速度較快，感染率較高。病程長短受感染菌株、雞的免疫力、環(huán)境條件等因素影響，在某些情況下，雞大腸桿菌病可引起雞群大量死亡，造成嚴(yán)重經(jīng)濟損失。

2、雞慢性呼吸道疾病的流行病學(xué)

①病原學(xué)

雞慢性呼吸道疾病的病原主要是雞敗血支原體屬于支原體科，是一種革蘭氏陰性微生物，大小介于細(xì)菌和病毒之間。支原體是一種細(xì)胞內(nèi)寄生病原體，能夠在雞的呼吸道上皮細(xì)胞內(nèi)生長繁殖，導(dǎo)致雞慢性呼吸道疾病。敗血支原體對環(huán)境條件的適應(yīng)能力較強，能夠在雞舍內(nèi)的環(huán)境中存活較長時間，尤其是在潮濕和溫暖的環(huán)境中。該病原體可以通過空氣傳播，因此在雞舍內(nèi)形成氣溶膠狀，隨空氣流動傳播給其他雞只。雞敗血支原體對干燥和高溫環(huán)境的抵抗力較弱。在干燥環(huán)境中，支原體通常會在幾個小時內(nèi)失去活性，常用的消毒劑如70%酒精、漂白粉和一些抗生素只能夠?qū)⑵浜芸煜麥?。然而在潮濕環(huán)境中，尤其是在雞舍內(nèi)的一些隱蔽潮濕處，支原體可能存活更長時間。

②流行病學(xué)

在養(yǎng)殖場中雞慢性呼吸道疾病的傳染源是雞敗血支原體，直接接觸、間接接觸、空氣傳播是造成該類疾病傳播流行的主要原因，比如病雞與健康雞直接接觸，如打斗、互啄等行為，可以導(dǎo)致病原體的傳播，病原也可以通過接觸被污染的物品如飼料、飲水、設(shè)備、工具等傳播，此外，病原體還可以通過空氣中的氣溶膠狀物質(zhì)傳播給其他雞只。從易感群體來講任何年齡品種的雞都容易受到病原入侵尤其是雛雞，因為幼齡雞的免疫系統(tǒng)尚未完全發(fā)育，更容易感染該病。從疾病的流行特點來看雞敗血支原體可以在雞群中長期存在和蔓延，即使是成年雞也可能成為攜帶者。雖然該病不受季節(jié)限制，但在寒冷、潮濕的季節(jié)里，雞舍內(nèi)的環(huán)境條件更適合支原體的生存和傳播，因此在這個季節(jié)里，雞慢性呼吸道疾病的發(fā)病率可能會更高。養(yǎng)殖場內(nèi)氣溫驟變、雞舍通風(fēng)不良、飼養(yǎng)密度過大、有害氣體過多等環(huán)境因素，以及疫苗免疫操作等都可能誘發(fā)或加重該病。

三、發(fā)病雞的臨床癥狀

發(fā)病初期雞群整體表現(xiàn)為精神不振、羽毛蓬松、無光澤，食欲減退，生長速度減緩。隨后病雞出現(xiàn)咳嗽、打噴嚏、呼吸急促、鼻涕等癥狀，嚴(yán)重時可聽到喘鳴音。伴隨呼吸道癥狀，患病雞還會出現(xiàn)腹瀉、排綠色或白色稀便伴有惡臭。雞體溫升高到39℃以上，嚴(yán)重時可能出現(xiàn)稽留熱。有的病雞頭部腫脹，觸摸有波動感，嚴(yán)重時可能出現(xiàn)頭部變形。

四、病理學(xué)變化

病死雞解剖之后能夠發(fā)現(xiàn)呼吸道黏膜，可見充血、水腫、潰瘍等炎癥變化，黏膜上皮細(xì)胞變性、脫落，伴有中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤。支氣管和肺部組織出現(xiàn)炎癥表現(xiàn)為支氣管壁增厚、黏膜充血、潰瘍，肺部出現(xiàn)實變，肺泡腔內(nèi)充滿炎性細(xì)胞和滲出物。肝細(xì)胞腫脹、變性、壞死，可見肝臟內(nèi)有大小不一的出血點和壞死灶，脾臟充血、腫脹，出現(xiàn)出血性梗死。腎小球充血、腎小管上皮細(xì)胞變性、脫落。同時，可見腎臟內(nèi)有大小不一的出血點和壞死灶。腸道出現(xiàn)炎癥表現(xiàn)為腸黏膜充血、水腫、潰瘍等炎癥變化。

五、實驗室診斷

1、涂片染色鏡檢

選擇腫大、有明顯病變的肝臟，肺臟、氣囊、腦組織，將采集的病料放在干凈的載玻片上，加入1～2滴生理鹽水或無菌蒸餾水，用滅菌的玻棒輕輕壓碎病料，制作成均勻的涂片。將涂片在空氣中自然晾干，或用酒精燈火焰固定。選擇使用革蘭氏染色劑進(jìn)行染色處理，用革蘭氏染色液A液（結(jié)晶紫）染色30s，用水沖洗。然后用革蘭氏染色液B液（碘液）染色30s，用水沖洗，再用革蘭氏染色液C液（95%酒精）脫色，直至背景顏色變淡，用水沖洗。在顯微鏡下觀察涂片，觀察細(xì)菌的形態(tài)、大小、排列等特征。顯微鏡條件下能夠發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性染色呈現(xiàn)棒狀的桿菌，中等大小成對排列或者單個存在兩端鈍圓染色比較明顯，同時在可視區(qū)域當(dāng)中還會看見形態(tài)并不是很顯著的革蘭氏陰性染色的病原微生物呈現(xiàn)多種形態(tài)，為了判定病原類型選擇使用姬姆薩對病料進(jìn)行了重新染色。將樣本涂抹在玻璃片上，并覆蓋一個薄薄的蓋玻片，用冷酒精（70%）固定樣本1～2min，將固定后的玻片放入姬姆薩染液中，通常姬姆薩染液是由天青、伊紅和次甲藍(lán)混合而成的染料，染色時間為2～5min，染色后，用蒸餾水輕輕沖洗玻片。然后進(jìn)行脫水處理，先使用95%酒精脫水，每次2min，共3次，再用無水酒精脫水，每次2min，共3次，最后用二甲苯透明化，每次2min，共3次，然后使用中性樹膠或加拿大樹膠封片。在光學(xué)顯微鏡下觀察染色后的樣本，調(diào)整鏡頭，尋找病原。在姬姆薩染色后的樣本下能夠發(fā)現(xiàn)病原體多色性，具有不同的顏色變化，如紫紅色、粉紅色，形態(tài)呈球形或橢圓形，有時呈絲狀或分支狀，大小約為0.2～1μm，較小，通常需要高倍鏡觀察。結(jié)合上述特征，可以判定病料當(dāng)中存在兩種病原懷疑是大腸桿菌和敗血支原體。

2、病雞樣本的分離培養(yǎng)

從病雞的肝臟、心臟、氣囊、輸卵管等病變組織中采集樣本，將采集的樣本加入無菌生理鹽水或PBS緩沖液中，進(jìn)行稀釋，然后將稀釋液轉(zhuǎn)移到無菌離心管中，以10000rpm的轉(zhuǎn)速離心10min，棄上清。將離心后的沉淀加入無菌的肉湯培養(yǎng)基（如LB培養(yǎng)基）中，輕輕吹打，使菌體重懸。將重懸的菌體按照1∶20稀釋。取適量的稀釋液接種到無菌的瓊脂平板上，將接種后的瓊脂平板放入培養(yǎng)箱中，在37°C下培養(yǎng)24h。在培養(yǎng)24h后，觀察瓊脂平板上的菌落形態(tài)，如顏色、形狀、大小等。在重置平板上大腸桿菌的菌落通常為圓形或橢圓形，邊緣整齊，顏色為白色或乳白色，質(zhì)地較為黏稠。必要時可以將分離得到的菌落轉(zhuǎn)移到麥康凱瓊脂平板上一般能夠形成粉紅色的致病菌菌落，由此可以判定病原類型。將分離得到的病原制作成稀釋液之后注射到小白鼠體內(nèi)，可以發(fā)現(xiàn)小白鼠注射18h之后就會死亡，并表現(xiàn)出肝周炎，由此可以判定分離得到的大腸桿菌具有致病性。

3、血清凝集試驗

石堰之前應(yīng)該準(zhǔn)備好各種試劑材料，包括了結(jié)晶紫抗原、待檢血清、稀釋液（如生理鹽水或PBS）、潔凈的檢測板（如玻璃板或特殊凝集試驗板）、滴管、計時器等。然后在潔凈的檢測板上滴加2滴結(jié)晶紫抗原（約0.025mL），然后取等量稀釋液與之混合均勻。取0.1μL待檢血清，加入含有抗原的檢測板中，繼續(xù)混合均勻，并涂散成直徑約2cm的液面。將檢測板放置在適當(dāng)溫度（通常為18～25℃）下，觀察2min內(nèi)是否出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。抗原與血清混合后，應(yīng)在2min內(nèi)觀察凝集結(jié)果。出現(xiàn)明顯凝集顆粒或凝集塊表示為陽性，不出現(xiàn)凝集表示陰性，介于陽性與陰性之間可能需要進(jìn)一步測試或復(fù)檢，本次采集的23份血清全部呈現(xiàn)凝集，由此可以判定養(yǎng)殖場當(dāng)中存在敗血支原體感染。

六、養(yǎng)殖場發(fā)病雞的治療措施

確定病情之后，應(yīng)該將發(fā)病養(yǎng)殖場進(jìn)行單獨隔離，并將未發(fā)病的雞群單獨清理出來，加強對污染圈舍的有效消毒，堅持每天使用0.01%的百毒殺帶雞消毒一次，周圍環(huán)境就可以選擇使用2%的氫氧化鈉進(jìn)行消毒，地面可以撒上生石灰進(jìn)行吸水，病死雞要進(jìn)行焚燒處理，并保持雞舍溫度適宜，加強通風(fēng)換氣。在雞的飲用水當(dāng)中添加鹽酸多西環(huán)素可溶性粉劑，飲用水添加6g/L，每天飲水2次，連續(xù)飲水5d。為緩解患病雞的呼吸道癥狀，可以上午在飼料當(dāng)中添加喉炎凈散（有效成分是板藍(lán)根、蟾蜍、人工牛黃、膽膏和甘草），按照每只雞使用0.15g添加到飼料當(dāng)中，每天使用一次，連續(xù)使用5d。下午選擇使用白頭翁散（有效成分是白頭翁、黃連、黃柏和秦皮），按照每只雞使用3g，添加到飼料當(dāng)中，每天使用一次，連續(xù)使用5d。按照上述防控方案對養(yǎng)殖場患病雞進(jìn)行了為期9d的治療，病情逐漸得到了很好的控制，患病雞的癥狀逐漸消退，恢復(fù)健康，養(yǎng)殖場發(fā)病逐漸停止，病程得到很好地控制。

七、混合感染病雞的預(yù)防措施

雞大腸桿菌病和慢性呼吸道疾病是雞場常見的兩種疾病，它們可以單獨發(fā)生，也可以混合感染。為了預(yù)防這兩種疾病的混合感染，要確保雞舍清潔、干燥，每天進(jìn)行糞便的清理，每周至少進(jìn)行一次消毒，消毒劑可以選擇0.1%的過氧乙酸、2%的來蘇爾、2%～5%的氫氧化鈉，10%的生石灰乳以殺滅大腸桿菌和支原體。為有效防范支原體感染，推薦使用雞毒支原體滅活疫苗40日齡以內(nèi)的雞每只使用0.25mL，40日齡以上的雞，每日使用0.5mL，蛋雞在產(chǎn)蛋前再強化免疫接種一次，每周均使用0.5mL，免疫期6個月，頸背部皮下或者大腿部肌肉注射。日常養(yǎng)殖期間還需要保證雞群營養(yǎng)均衡，避免飼料中缺乏維生素和礦物質(zhì)，并且在疫病發(fā)病高峰期，還可以額外增加維生素和礦物質(zhì)元素，增長雞群身體抵抗力。一般飼料中維生素 A、維生素 D3、維生素 E、維生素 K 和鈣、磷、鋅的添加量控制在 2，000～4，000 IU/kg、1，000～2，000 IU/kg、100～200mg/kg、100～200μg/kg、0.5%～1.0%/kg、0.3%～0.5%/kg、100～200mg/kg、1～2mg/kg。注意控制雞舍溫度、濕度和通風(fēng)，減少應(yīng)激因素。疫病高發(fā)期應(yīng)該堅持每個月對雞群進(jìn)行體檢，觀察其精神、食欲、呼吸等狀況，發(fā)現(xiàn)異常及時進(jìn)行診斷和處理。堅持封閉化的養(yǎng)殖管理方式嚴(yán)格控制雞場的人員和物品進(jìn)出，避免外來病原體的入侵，注重做好病死雞的無害化，當(dāng)發(fā)現(xiàn)雞群出現(xiàn)疫情時，應(yīng)立即隔離病雞，對癥治療，并查找疫情原因，防止疫情擴散。

綜上所述，雞大腸桿菌病與慢性呼吸道疾病的混合感染會對雞群的正常生長發(fā)育造成嚴(yán)重威脅。一方面病原入侵會導(dǎo)致機體的抵抗能力逐漸下降，使其他病原的入侵概率進(jìn)一步增加。另一方面養(yǎng)殖管理不合理，環(huán)境污染較為嚴(yán)重，也會給多種病原微生物的繁殖生長傳播提供條件。所以，為更好地預(yù)防大腸桿菌病與慢性呼吸道疾病混合感染，就需要將關(guān)注重點放在養(yǎng)殖場的飼養(yǎng)管理方面，要重視雞舍衛(wèi)生管理，切實控制好飼料和飲水質(zhì)量，調(diào)控好雞舍養(yǎng)殖環(huán)境，并結(jié)合傳染性疾病的發(fā)生流行趨勢，提前采取措施進(jìn)行有效防范，最大程度地避免傳染性疾病的傳播流行。

（作者單位：247107安徽省池州市貴池區(qū)秋江街道農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心）