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    化學(xué)發(fā)光分析儀測光系統(tǒng)的研究

    2024-12-09 00:00:00尚曉京趙鵬仇凌燕
    中國新技術(shù)新產(chǎn)品 2024年14期
    關(guān)鍵詞:濾光片精密度

    摘 要:全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(化學(xué)發(fā)光POCT)是我司獨(dú)立研發(fā)的體外診斷儀器,與相應(yīng)的試劑配合使用,用于人體樣本中待測物的定量分析;測光系統(tǒng)是發(fā)光POCT儀器的核心系統(tǒng),直接影響儀器的檢測結(jié)果的精密度,本文概述了POCT儀器測光系統(tǒng)的測試原理、機(jī)構(gòu)組成以及影響因素等,并根據(jù)影響因素提出幾種不同的解決方案。根據(jù)各個(gè)方案的試驗(yàn)結(jié)果選取最佳方案在儀器上推廣,最終取得了很好的臨床效果。

    關(guān)鍵詞:POCT;測光系統(tǒng);測光杯;濾光片;精密度

    中圖分類號(hào):R 446 " " " " " " 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

    床旁檢測(Point Of Care Testing,POCT)是檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)發(fā)展的新領(lǐng)域,是在患者旁邊開展使用的檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)技術(shù)[1]。隨著國民經(jīng)濟(jì)水平的提高、國家醫(yī)療分級(jí)診療方案的提出以及急救醫(yī)學(xué)的發(fā)展,POCT儀器在小型化和檢驗(yàn)快速化方面有了新的要求;但在保證儀器小型化和檢驗(yàn)快速化的要求下,必然會(huì)影響測量結(jié)果的精密度;因此保證測光系統(tǒng)高精密度就顯得格外重要[2]。

    1 測光系統(tǒng)組成

    測光系統(tǒng)是化學(xué)發(fā)光免疫分析儀的核心部分,整體結(jié)構(gòu)如圖1所示;主要由PMT(光電倍增管)、測光杯及其中的發(fā)光復(fù)合物、測光控制結(jié)構(gòu)等構(gòu)成。PMT是一種具有極高靈敏度和超快時(shí)間響應(yīng)的光探測器件,主要用于探測微弱發(fā)射源的弱光信號(hào),在測光系統(tǒng)中用來檢測發(fā)光復(fù)合物發(fā)光的微弱信號(hào)值,其中的發(fā)光復(fù)合物是包被的磁性微粒與患者體液中物質(zhì)和項(xiàng)目特異性的試劑結(jié)合形成發(fā)光復(fù)合物,發(fā)光復(fù)合物作為待測物儲(chǔ)存在測光杯容器內(nèi);測光控制結(jié)構(gòu)是由測光窗口切換電機(jī)和窗口切換傳感器及其相應(yīng)的結(jié)構(gòu)件組成的,用來控制切換光信號(hào)進(jìn)入PMT的路徑;發(fā)光復(fù)合物發(fā)出的微弱信號(hào)在程序的控制下通過不同的路徑進(jìn)入PMT信號(hào)接收端,并輸出光信號(hào)值。由于采用了基于辣根過氧化物酶和魯米諾的間接化學(xué)發(fā)光法,發(fā)光復(fù)合物發(fā)出光的波長均在430nm左右,因此可以認(rèn)為該波段光子是能被PMT接收到的量,直接決定了PMT輸出信號(hào)值的大小,保證發(fā)光物發(fā)出的光子能被PMT準(zhǔn)確接收是測光系統(tǒng)的核心技術(shù)[3]。

    2 理論分析

    檢測系統(tǒng)的精密度可以用多組檢測值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差CV表示,如公式(1)所示。

    (1)

    式中:S為多組試樣檢測值的標(biāo)準(zhǔn)偏差;i為某組試樣;n為試樣總數(shù);Xi為某組試樣檢測值;K為PMT檢測線性系數(shù);為多組檢測值的平均值。

    由公式(1)可知,影響CV的主要因素是檢測平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差值S;因此,標(biāo)準(zhǔn)偏差S越小,檢測信號(hào)值的平均值越大,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差CV就越小,檢測系統(tǒng)的精密度就越高;而標(biāo)準(zhǔn)偏差的大小直接由PMT本身屬性決定;無論是模擬信號(hào)的光電倍增管還是數(shù)字信號(hào)的光電倍增管,其特性都隨著檢測的信號(hào)值的增大,其檢測的穩(wěn)定性越好、精密度越高。目前,常用的方法是通過增加試劑的用量來增加發(fā)光復(fù)合物的量和挑揀使用精密度更高一級(jí)的PMT,但是這2種方法不僅增加了試劑消耗量和檢測系統(tǒng)的成本,而且在實(shí)際使用中的效果也不理想;因此,考慮在試劑和PMT型號(hào)不變的情況下增大進(jìn)入PMT檢測端的光子數(shù)成為關(guān)鍵。理論上,如果發(fā)光混合物發(fā)出的光子在由測光杯傳播到PMT檢測端的過程中沒有損失,那么PMT檢測到的信號(hào)值為待測發(fā)光混合物發(fā)出的全部光子數(shù),但在實(shí)際工作中,由于受各種因素的影響,PMT實(shí)際檢測到的信號(hào)值遠(yuǎn)低于待測發(fā)光混合物發(fā)出的實(shí)際發(fā)光信號(hào)值;對(duì)我司現(xiàn)有的化學(xué)發(fā)光免疫分析儀測光系統(tǒng)來說,待測樣本在一些項(xiàng)目的界值附近被PMT檢測到的信號(hào)值衰減嚴(yán)重,導(dǎo)致檢測精密度不能滿足需求;針對(duì)測光系統(tǒng)分析其影響信號(hào)值衰減的因素主要包括測光杯、檢測距離、濾波片以及外界光。因此根據(jù)這些因素進(jìn)行分析并設(shè)計(jì)試驗(yàn),根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果、成本等因素選取最佳的解決方案。

    3 解決方案

    試驗(yàn)材料:配比好的標(biāo)定發(fā)光復(fù)合物溶液信號(hào)值約為4×105,黑色測光杯,白色測光杯,內(nèi)白外黑雙色測光杯,430nm窄帶濾光片,全自動(dòng)免疫發(fā)光分析儀,移液槍。

    試驗(yàn)方案:12個(gè)測光杯標(biāo)記為1組試樣,利用儀器對(duì)待測測光杯的暗值進(jìn)行檢測,使用移液槍在試樣測光杯中添加配比好的標(biāo)定發(fā)光復(fù)合物,儀器再對(duì)信號(hào)值進(jìn)行檢測;PMT測光鏡頭與測光杯中發(fā)光復(fù)合物的距離為13mm(如圖2所示),每組統(tǒng)計(jì)12個(gè)試驗(yàn)數(shù)據(jù)的平均值作為每組試樣中PMT檢測到的最終數(shù)據(jù)。

    3.1 測光杯

    測光杯用來儲(chǔ)存待檢測的發(fā)光復(fù)合物,其在結(jié)構(gòu)上利用杯口上沿的雙環(huán)特征和測光頭進(jìn)行嵌套的方式保證測光系統(tǒng)整體的物理密封性;測光系統(tǒng)要求避免外界光進(jìn)入PMT檢測端,技術(shù)指標(biāo)為暗值(PMT在測光杯為空時(shí)的測量值)小于或等于1000;不同顏色的測光杯對(duì)光的吸收性和反射性不同,為了研究測光杯顏色對(duì)檢測結(jié)果的影響,需要對(duì)黑色、內(nèi)白外黑雙色測光杯進(jìn)行研究分析。

    3.1.1 黑色測光杯

    黑色測光杯的優(yōu)勢是避光性能良好,可以有效阻止外界所有波段光進(jìn)入測光杯內(nèi)部,從而保證PMT檢測到的光子數(shù)不受外界影響,是測光杯的首選顏色。但是,黑色的測光杯同樣會(huì)使發(fā)光復(fù)合物發(fā)出的光信號(hào)在達(dá)到PMT接收端之前被杯壁吸收一大部分,從而直接導(dǎo)致信號(hào)值嚴(yán)重衰減。為了研究黑色測光杯測光系統(tǒng)的實(shí)際影響,試驗(yàn)采用黑色測光杯測試12組的暗值后,加入相同量的標(biāo)準(zhǔn)發(fā)光復(fù)合物,在室溫下再進(jìn)行檢測;由表1可知,儀器測光系統(tǒng)輸出的暗值均滿足要求,輸出的信號(hào)值平均值為7.3萬,衰減了約80%的光信號(hào),且由于信號(hào)值偏低,因此導(dǎo)致測量結(jié)果的變異系數(shù)CV較大、精密度較差。試驗(yàn)表明,黑色測光杯對(duì)光信號(hào)值的衰減較大,不能滿足測光系統(tǒng)的實(shí)際要求。

    3.1.2 內(nèi)白外黑雙色測光杯

    雖然黑色測光杯避光性能好,但是黑色對(duì)光吸收率也高,導(dǎo)致PMT檢測到的信號(hào)衰減嚴(yán)重;而白色測光杯對(duì)光的吸收較弱,反射性較好,但是不能完全阻擋外界光的射入;結(jié)合2種顏色測光杯的優(yōu)劣勢,設(shè)計(jì)了內(nèi)白外黑的雙色測光杯,2種測光杯為嵌套結(jié)構(gòu)裝配在一起,外側(cè)的黑色杯子能保證避免外界光的進(jìn)入,內(nèi)測的白色杯子保證發(fā)光復(fù)合物發(fā)出的光能夠盡可能的傳播到PMT信號(hào)檢測端;試驗(yàn)測試了12組試樣,由表2可知,測試暗值均滿足要求,且PMT檢測到的平均信號(hào)值為335505.3,約為總信號(hào)值的83%,信號(hào)值衰減較少;PMT檢測到的數(shù)據(jù)變異系數(shù)CV較小,檢測精密度較好。

    試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn),試樣17和試樣22的檢測信號(hào)值數(shù)據(jù)出現(xiàn)異常,檢測到的信號(hào)值遠(yuǎn)低于其他幾組試樣的信號(hào)值,重新更換測光杯測試,試樣17和試樣22檢測信號(hào)值恢復(fù)正常。觀察異常數(shù)據(jù)的測光杯后發(fā)現(xiàn),其內(nèi)部白色測光杯部分有一側(cè)面隱約露黑,切開后發(fā)現(xiàn)該側(cè)面厚度嚴(yán)重偏薄,該現(xiàn)象表明內(nèi)白外黑雙色測光杯測量值不穩(wěn)定的原因很可能是由杯子加工性能不達(dá)標(biāo)造成的。內(nèi)白外黑雙色測光杯在實(shí)際生產(chǎn)中主要有2種方式:1)使用雙色模具注塑得到,直接出模就是最終的內(nèi)白外黑雙色測光杯;這種方式工藝效率比較高,但是易受加工環(huán)境的影響,可能會(huì)出現(xiàn)白色內(nèi)壁壁厚不均和色差明顯的問題,不同的供應(yīng)商,甚至同一家供應(yīng)商提供的產(chǎn)品都會(huì)有較大的差異,這就會(huì)導(dǎo)致測光數(shù)據(jù)存在較大的差異。2)黑白測光杯分別通過模具生產(chǎn)完后進(jìn)行裝配,裝配工序一般為手工組裝完成,組裝的樣品具有一定的差異,會(huì)導(dǎo)致測光數(shù)據(jù)不穩(wěn)定,且生產(chǎn)效率較低。因此內(nèi)白外黑測光杯受供應(yīng)商加工工藝和加工能力的影響較大,產(chǎn)品需要良好的質(zhì)量控制方案,同時(shí)設(shè)計(jì)上也要考慮增加內(nèi)部的白色測光杯杯壁的厚度,減少白色杯壁厚度不均對(duì)測試結(jié)果造成的影響。

    綜上所述,內(nèi)白外黑測光杯既能避免外界光的影響,又能減少信號(hào)值的衰減;根據(jù)實(shí)際情況,可以采用黑白杯子嵌套裝配的結(jié)構(gòu)。

    3.2 測光距離

    測光距離是指發(fā)光反應(yīng)物液面到PMT檢測鏡頭的距離,根據(jù)PMT自身的測光特性,測光距離越遠(yuǎn)信號(hào)值衰減越嚴(yán)重[4-5],為了研究該因素對(duì)檢測信號(hào)值的影響,試驗(yàn)采用黑色測光杯,并利用特殊的透明隔板調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)光復(fù)合物在測光杯中的高度,以縮短測光距離;受限于測光系統(tǒng)結(jié)構(gòu)實(shí)際的空間局限性,本次試驗(yàn)設(shè)定測光距離為系統(tǒng)結(jié)構(gòu)所允許的最小距離為10mm,測試數(shù)據(jù)見表3。

    從試驗(yàn)組數(shù)據(jù)上可以看出,測試信號(hào)值的平均值為17784,約為設(shè)定總信號(hào)值的44%,信號(hào)值衰減比黑色測光杯子小,精密度略有提升;因此,縮短測光距離可以提高測試信號(hào)值,但是提高的幅度很有限;在考慮該方案時(shí),可以在PMT和測光杯相對(duì)位置不變的情況下,采取加大測光杯口徑或者增加發(fā)光復(fù)合物的體積等措施來縮短測光距離,達(dá)到減小信號(hào)值衰減的目的。

    3.3 430nm窄帶濾光片配合白色測光杯

    白色測光杯良好的反射性使其對(duì)信號(hào)值的衰減影響較小,但是白色測光杯的透光性使其容易受到外界光的干擾,造成暗值超標(biāo),因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)光溶液的發(fā)光波長約為430nm的特點(diǎn),在PMT測光鏡頭前增加430nm的窄帶濾光片,使其既能允許標(biāo)準(zhǔn)發(fā)光復(fù)合物的發(fā)光信號(hào)透過濾光片進(jìn)入PMT接收端,又能盡可能地阻止透過白色測光杯的外界光進(jìn)入PMT接收端;雖然加載濾光片后進(jìn)入測光杯的外界光源中其他波段的光被過濾掉,但是仍然有少量波長在430nm附近的外界光會(huì)通過濾光片進(jìn)入PMT接收端,這就可能導(dǎo)致測量暗值超標(biāo),從而會(huì)對(duì)檢測數(shù)據(jù)造成一定影響。為了驗(yàn)證使用濾波片對(duì)檢測結(jié)果的影響,試驗(yàn)選取透光性較差的聚苯乙烯白色測光杯進(jìn)行試驗(yàn)。

    由表4可知,檢測暗值整體上滿足要求,但是比較接近臨界值(1000);如果實(shí)驗(yàn)室中光線過強(qiáng),暗值則會(huì)出現(xiàn)超標(biāo)的風(fēng)險(xiǎn),測試信號(hào)值平均為206678,約為標(biāo)準(zhǔn)值的50%,相比內(nèi)白外黑的雙色測光杯衰減有所增加,精密度也有所降低;其原因是430nm的窄帶濾光片對(duì)波長430nm附近的光透過率達(dá)不到100%,從而抑制了一部分光信號(hào)的透過,因此使用濾光片時(shí)需要充分考慮其通透率。

    4 結(jié)果討論

    綜上所述,黑色測光杯會(huì)導(dǎo)致發(fā)光復(fù)合物的信號(hào)值衰減較大,不能滿足測光系統(tǒng)現(xiàn)有使用要求,內(nèi)白外黑雙色測光杯能最大限度地減小信號(hào)值衰減(接近標(biāo)準(zhǔn)值),測量精密度相對(duì)較高,且只需要對(duì)耗材測光杯進(jìn)行結(jié)構(gòu)修改,不影響測光系統(tǒng)整體結(jié)構(gòu)。但是采用該方案時(shí)須控制耗材工藝質(zhì)量、采用自動(dòng)化裝配,并適當(dāng)增加白色內(nèi)壁的壁厚,減少測光杯之間的差異;其余幾套方案都對(duì)減少信號(hào)值衰減的效果很有限,使用濾波片的方案結(jié)構(gòu)簡單,但是對(duì)測光杯的透光性有一定的要求且需要避免實(shí)驗(yàn)室中光線的強(qiáng)度過大,測光距離受制于測光系統(tǒng)結(jié)構(gòu)兒改變幅度較小。因此根據(jù)實(shí)際情況考慮,最終選取內(nèi)黑外白的嵌套反應(yīng)杯結(jié)構(gòu)的方案,并在心肌三項(xiàng)臨床使用中取得了很好的效果。

    5 結(jié)語

    測光系統(tǒng)是全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀(發(fā)光POCT)的核心技術(shù),準(zhǔn)確把握測光系統(tǒng)的各項(xiàng)影響參數(shù),保證檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度,及時(shí)提高儀器測量數(shù)據(jù)的精密度[6]。POCT檢測對(duì)疾病診斷、治療、預(yù)防及健康和亞健康監(jiān)測將會(huì)有廣闊的應(yīng)用前景。該儀器可以彌補(bǔ)傳統(tǒng)臨床實(shí)驗(yàn)室流程煩瑣不能實(shí)施床旁檢測的缺點(diǎn),實(shí)現(xiàn)了儀器小型化、操作程序簡便化以及檢測現(xiàn)場實(shí)時(shí)化等特點(diǎn)化[7-9]。

    參考文獻(xiàn)

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    32(11):115-119.

    通信作者:尚曉京(1987—),男,河南許昌人,工程師,碩士研究生,研究方向?yàn)獒t(yī)療器械研發(fā)設(shè)計(jì)工作。

    電子郵箱:shangxiaojing@autobio.com.cn。

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