不同廠家維生素B₁片有關(guān)物質(zhì)對(duì)比與研究

【摘要】目的：統(tǒng)一規(guī)范維生素B1片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，優(yōu)化有關(guān)物質(zhì)檢測方法，簡化操作，保證試驗(yàn)結(jié)果真實(shí)可靠。方法：采用AiChrom-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm），以3.764 g/L己烷磺酸鈉（磷酸調(diào)節(jié)pH值為3.1）為流動(dòng)相A，甲醇∶乙腈（1∶1）為流動(dòng)相B，梯度洗脫，對(duì)維生素B1有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行分離；采用加校正因子的主成分自身對(duì)照法對(duì)維生素B1中的8個(gè)已知雜質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。結(jié)果：維生素B1與有關(guān)物質(zhì)分離良好。17家企業(yè)生產(chǎn)的維生素B1片檢出11種雜質(zhì)。結(jié)論：建立的方法專屬性良好，可有效地分離和測定維生素B1片中的有關(guān)物質(zhì)。本研究為維生素B1有關(guān)物質(zhì)雜質(zhì)譜的研究提供科學(xué)參考。

【關(guān)鍵詞】維生素B1；有關(guān)物質(zhì)；雜質(zhì)

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.06.011

【基金項(xiàng)目】江西省藥品監(jiān)督管理局科研項(xiàng)目（2023JS22）。

Comparison and Study of Substances Related to Vitamin B1 Tablets from Different Manufacturers

ZHENG Lupan1， HE Yafen1， FANG Wenchao1， DING Jinyou1， ZHANG Jihong2*

（1.Drug Testing Branch of Shangrao Inspection， Testing and Certification Institute， Shangrao 334000， China； 2.Product Quality Testing Branch of Shangrao Inspection， Testing and Certification Institute， Shangrao 334000， China）

Abstract： Purpose： To standardize the quality standards of vitamin B1 tablets， optimize the detection methods of related substances， simplify operations， and ensure the authenticity and reliability of test results. Method： An Ai-Crom-C18 chromatographic column （4.6 mm×250 mm， 5μm） is used， with 3.764 g/L sodium hexanesulfonate （pH adjusted to 3.1 with phosphoric acid） as the mobile phase A， Methanol∶Acetonitrile （1∶1） as mobile phase B， gradient elution， to separate vitamin B1 related substances； Qualitative and quantitative analysis of 8 known impurities in vitamin B1 was conducted using principal component self comparison method with added correction factors. Result： Vitamin B1 was well separated from related substances. Eleven impurities were detected in vitamin B1 tablets produced by 17 companies. Conclusion： The established method has good specificity and can effectively isolate and determine the relevant substances in vitamin B1 tablets. This study provides scientific reference for the study of impurity spectra of vitamin B1 related substances.

Keywords： Vitamin B1； regarding substances； impurity

0引言

維生素B1又稱為鹽酸VB1、鹽酸硫胺或硫胺素，化學(xué)名：氯化4-甲基-3-[（2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基）甲基]-5-（2-羥基乙基）噻唑鎓鹽酸鹽。國內(nèi)最早以“鹽酸硫銨片”收載于《中華人民共和國藥典》1953年版，自《中華人民共和國藥典》1963年版起收載為“維生素B1片”。查閱相關(guān)文獻(xiàn)及各國藥典得知，目前國內(nèi)外藥典對(duì)維生素B1片有關(guān)物質(zhì)的控制限度相對(duì)寬松，只有《中華人民共和國藥典》2020年版二部對(duì)單個(gè)雜質(zhì)和總雜質(zhì)進(jìn)行控制[1-2]。因此，為更好地控制該品種質(zhì)量，本研究優(yōu)化了檢測方法，并分別利用本法及現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)給出的檢測方法對(duì)17個(gè)不同廠家生產(chǎn)的維生素B1片進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢測和對(duì)比分析，為研究統(tǒng)一規(guī)范維生素B1片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，優(yōu)化有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，并對(duì)維生素B1片有關(guān)物質(zhì)雜質(zhì)譜的研究提供科學(xué)的數(shù)據(jù)參考。

1儀器和試藥

1.1儀器

Uitimate3000戴安高效液相色譜儀（賽墨飛世爾）；BS124S電子天平（德國Sartorius）；BP211D型電子天平（德國Sartoriu公司）；XMTD-7000電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）；Ai-Chrom-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；Agilent XDB-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm）。

1.2試藥

維生素B1對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，100390-201806，97.0%）；EP雜質(zhì)D（氧硫胺99.08%）；EP雜質(zhì)E（硫代硫胺99.87%）；EP雜質(zhì)C（氯硫胺99.33%）；EP雜質(zhì)G（乙酰硫胺99.80%）；EP雜質(zhì)A（硫胺素硫酸酯99.0%）；EP雜質(zhì)H（酮二硫代氨基甲酸酯99.0%）；EP雜質(zhì)F（乙基硫胺99.0%）；維生素B1片（分別為廠家A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N、O、P、Q）；甲醇、乙腈、己烷磺酸鈉均為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純?cè)噭?/p>

2方法和結(jié)果

2.1樣品的配制

2.1.1供試品溶液的制備

精密稱取30片，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于維生素B1 10 mg），置于10 mL量瓶中，加溶液I適量超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.2對(duì)照溶液的制備

精密量取供試品溶液1 mL，置于100 mL量瓶中，加溶液I稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.3系統(tǒng)適用性溶液的制備

分別精密稱取對(duì)照品EP雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D、雜質(zhì)E、雜質(zhì)F、雜質(zhì)G、雜質(zhì)H和維生素B1適量，制成質(zhì)量濃度為20μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。溶液I為流動(dòng)相A∶流動(dòng)相B（85∶15）。

2.2色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以3.764 g/L己烷磺酸鈉（磷酸調(diào)節(jié)pH值3.1）為流動(dòng)相A，甲醇∶乙腈（1∶1）為流動(dòng)相B；梯度洗脫：0～15 min，85%A；15～45 min，80%A；45～58 min，60%A；58～64 min，60%A；64～65 min，85%A；流速：1 mL· min-1；檢測波長：248 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)見圖1。

2.3專屬性試驗(yàn)

取企業(yè)A生產(chǎn)的維生素B1片適量（約相當(dāng)于維生素B110 mg），置于10 mL量瓶中，分別加入相應(yīng)溶液，進(jìn)行酸破壞溶液（0.1 mol/L鹽酸1 mL），堿破壞溶液（0.01%氫氧化鈉1 mL），氧化破壞溶液（3%過氧化氫1 mL），光破壞溶液（4000 lx光強(qiáng)），高溫破壞溶液（50℃水浴）等降解試驗(yàn)。維生素B1降解情況：酸破壞溶液、堿破壞溶液及光破壞溶液均未檢出新雜質(zhì)；在氧化條件下，維生素B1迅速降解產(chǎn)生了3個(gè)較大的雜質(zhì)，分別為未知雜質(zhì)J、未知雜質(zhì)N和未知雜質(zhì)X，同時(shí)也產(chǎn)生了雜質(zhì)D、雜質(zhì)G和4個(gè)未知雜質(zhì)等6個(gè)較小雜質(zhì)；在高溫條件下，未知雜質(zhì)L和已知雜質(zhì)G峰面積均有增大的趨勢(shì)。結(jié)果表明，該方法能有效分離維生素B1片中雜質(zhì)及相關(guān)降解產(chǎn)物[3-5]。

2.4線性、檢測線及定量限的考察

分別精密稱取雜質(zhì)A、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D、雜質(zhì)E、雜質(zhì)F、雜質(zhì)G、雜質(zhì)H、維生素B1對(duì)照品適量，加溶劑制成質(zhì)量濃度為600μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精密吸取上述混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0 mL、0.1 mL、0.4 mL、0.6 mL、1.0 mL、1.2 mL，置于10 mL量瓶中，制成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，各組分峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，相關(guān)系數(shù)均達(dá)到0.999以上，線性良好。取維生素B1對(duì)照適量，加溶劑稀釋制成質(zhì)量濃度約為0.1/μg·mL對(duì)照品溶液，分別精密量取1μL、3μL、5μL、15μL注入液相色譜儀中。維生素B1檢測限為0.89 ng，定量限為2.691 ng。

2.5樣品測定

分別按“2.1”方法處理17家企業(yè)生產(chǎn)的維生素B1片，按“2.2”的色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，加校正因子的主成分自身對(duì)照法計(jì)算各有關(guān)物質(zhì)含量，17個(gè)廠家結(jié)果見表1。17家企業(yè)樣品共檢出11種雜質(zhì)，其中有5家企業(yè)樣品檢出單個(gè)雜質(zhì)含量超出雜質(zhì)鑒定限0.2%。

3結(jié)束語

根據(jù)國內(nèi)現(xiàn)有維生素B1片檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的有關(guān)物質(zhì)檢查uZ0mEmQQi2w1CgJ1x4BLmQ==方法進(jìn)行檢測，維生素B1出峰較快，有關(guān)雜質(zhì)不能有效分離，且對(duì)單個(gè)雜質(zhì)尚未限定。以雜質(zhì)鑒定限0.2%為單個(gè)雜質(zhì)限度，1.0%為總雜質(zhì)限度對(duì)單個(gè)雜質(zhì)及總雜質(zhì)進(jìn)行控制。據(jù)統(tǒng)計(jì)，依據(jù)法定標(biāo)準(zhǔn)檢測17家企業(yè)生產(chǎn)的維生素B1片有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)均在法定限度范圍內(nèi)。根據(jù)該方法檢測，分別有企業(yè)M、企業(yè)L和企業(yè)K生產(chǎn)的維生素B1片檢出單個(gè)雜質(zhì)超出限定范圍0.2%[6-7]。由此可知，目前的法定檢測方法不易區(qū)分制劑維生素B1片的質(zhì)量優(yōu)劣，難以控制產(chǎn)品質(zhì)量的變化，可能會(huì)導(dǎo)致內(nèi)在質(zhì)量的誤判。本研究建立的檢測方法專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度好、穩(wěn)定性良好，各組分均呈良好的線性關(guān)系，符合《中華人民共和國藥典》2020年版四部“分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”，為評(píng)價(jià)不同廠家生產(chǎn)的維生素B1片質(zhì)量優(yōu)劣提供有力依據(jù)，也為液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測定維生素B1有關(guān)物質(zhì)雜質(zhì)譜的研究提供一些參考價(jià)值。

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【作者簡介】

鄭露盼，女，1990年出生，助理工程師，學(xué)士，研究方向?yàn)槭称匪幤焚|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

通信作者：張繼紅，女，1979年出生，主管藥師，碩士，研究方向?yàn)槭称匪幤焚|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，149747048@qq.com。

（編輯：侯睿琪）