食品中副溶血性弧菌檢驗能力驗證結(jié)果與分析

【摘要】為了提升實驗室食品中副溶血性弧菌的檢測能力，增強實驗室競爭能力，確保出具的檢測結(jié)果具有準確性和有效性，本實驗室參加了中國食品藥品檢定研究院組織的食品中副溶血性弧菌檢驗能力驗證。根據(jù)能力驗證作業(yè)指導書與GB 4789.7—2013《食品安全國家標準食品微生物學檢驗副溶血性弧菌檢驗》的要求，分別對TF04390009-47、TF04390009-48兩份待測樣品進行培養(yǎng)分離與鑒定，兩份待測樣品均未檢出副溶血性弧菌，能力驗證結(jié)果獲得滿意評價，本實驗室具備食品中副溶血性弧菌檢測能力。

【關鍵詞】食品；副溶血性弧菌；能力驗證

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.06.002

Results and Analysis of Vibrio Parahaemolyticus Testing Capacity Validation in Foodstuffs

YE Yuhua， YANG Chunyan， ZOU Lan， FAN Qiming

（Guizhou Qianxinan Inspection and Testing Center， Xingyi 562400， China）

Abstract： In order to improve the laboratory’s ability to detect Vibrio parahaemolyticus in food， enhance the competitiveness of the laboratory， and ensure the accuracy and validity of the test results， the laboratory participated in the capacity validation of Vibrio parahaemolyticus in food organized by the ChinaAcademy of Food and Drug Testing and Research （CAFDR）.According to the operational guide for proficiency testing and the requirements of GB 4789.7—2013 National food safety standard-Microbiological examination of food-Examination of vibrio parahaemolyticus， the two samples to be tested， TF04390009-47 and TF04390009-48， were cultured， isolated and identified， and no Vibrio parahaemolyticus was detected in either of the two samples， and the results of the proficiency testing were evaluated satisfactorily. The laboratory has the ability to detect vibrio parahaemolyticus in food.

Keywords： food； vibrio parahaemolyticus； proficiency testing

0引言

副溶血性弧菌是一種革蘭氏陰性海洋細菌，廣泛存在于海水、海底沉積物以及魚蝦貝蟹等海產(chǎn)品中，其特點是必須在含鹽環(huán)境中生長。其在高鹽培養(yǎng)基上（2%～8%）生長良好，在無鹽培養(yǎng)基上不能生長，故被稱為嗜鹽性弧菌，為我國常見的食源性致病菌。由該菌引起的食物中毒案例在世界各地均有報道，受害最嚴重的國家和地區(qū)主要包括日本、韓國與我國沿海地區(qū)。國家食源性疾病監(jiān)測網(wǎng)及國家食品安全信息監(jiān)測系統(tǒng)統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，2002年至2007年間暴發(fā)的細菌性食物中毒事件中，副溶血性弧菌居首位1aVPHQg16ZU5aiMjcXxFeQ==，在沿海地區(qū)所占比例在60%以上。人體感染副溶血性弧菌后，臨床表現(xiàn)出腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐、發(fā)熱、糞便呈水樣等急性腸胃炎癥狀，重癥患者可能出現(xiàn)脫水、休克昏迷甚至死亡。因此，快速準確檢測食品中是否含有副溶血性弧菌，對于保障人民飲食安全具有重要意義。在我國食品安全國家標準中，副溶血性弧菌已作為預包裝即食生制動物性水產(chǎn)品中必檢項目。為提高對食品副溶血性弧菌的檢測能力和水平，本實驗室參加了中國食品藥品檢定研究院組織的食品中副溶血性弧菌檢驗能力驗證。

1材料與方法

1.1待測樣品

NIFDC-PT-439食品中副溶血性弧菌檢驗能力驗證樣品共2份，第一份編號為TF04390009 - 47，第二份編號為TF04390009-48。每份待測樣品包括一個西林瓶菌株，以及一個與相同編碼的魚蛋白粉，均由中國食品藥品檢定研究院提供。

1.2培養(yǎng)基及試劑

3%氯化鈉堿性蛋白胨水、硫代硫酸鹽-檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖（TCBS）瓊脂、弧菌顯色培養(yǎng)基、3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂、3%氯化鈉三糖鐵瓊脂、氧化酶試劑，均購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；嗜鹽性試驗用胰胨水、副溶血性弧菌成套生化鑒定管，均購自青島海博生物技術有限公司；革蘭氏染色液，購自安徽省巢湖市弘慈醫(yī)療器械有限公司；實驗用水為無菌水。

1.3標準菌株

副溶血性弧菌FSCC 232009（H0078DX），購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。

1.4儀器

電熱恒溫培養(yǎng)箱（DHP-9082，上海一恒科學儀器有限公司），立式壓力蒸汽滅菌器（LDZM-80KCS，上海申安醫(yī)療器械廠），電子天平（JM-A10002，余姚市紀銘稱重校驗設備有限公司），生物顯微鏡（H6303，重慶光電儀器有限公司），生物安全柜（BSC-IIA2，蘇州安泰空氣技術有限公司）。

1.5方法

參照能力驗證作業(yè)指導書與GB 4789.7—2013《食品安全國家標準食品微生物學檢驗副溶血性弧菌檢驗》進行實驗。

1.5.1樣品前處理

根據(jù)作業(yè)指導書提示，分別對兩份待測樣品進行單獨處理。在生物安全柜中以無菌操作的方式打開裝有菌株的西林瓶，將西林瓶內(nèi)小球放入225 mL已滅菌的3%NaCl堿性蛋白胨水中，充分溶解，然后再將與西林瓶相同編碼的魚蛋白粉樣品加入上述3%NaCl堿性蛋白胨水中，充分均質(zhì)混勻，即制成1∶10的樣品勻液。

1.5.2增菌

將制備的1∶10樣品勻液在36℃±1℃下培養(yǎng)8～18 h。樣品增菌時，對副溶血性弧菌標準菌菌株用3%NaCl堿性蛋白胨水進行復蘇，作為陽性對照，與樣品同步操作。

1.5.3分離培養(yǎng)

對培養(yǎng)的增菌液用接種環(huán)在液面下1 cm處蘸取一環(huán)增菌液，分別劃線接種于TCBS平板與弧菌顯色平板上，在36℃±1℃下培養(yǎng)18～24 h。

TF04390009-47待測樣品分離培養(yǎng)結(jié)果見表1。

TF04390009-48待測樣品分離培養(yǎng)結(jié)果見表2。

2結(jié)果與分析

2.1TF04390009-47待測樣品鑒定結(jié)果

由于TCBS平板與弧菌顯色平板上均無任何菌落生長，故未檢出副溶血性弧菌。

2.2TF04390009-48待測樣品鑒定結(jié)果

結(jié)果見表3與表4。待測樣品在TCBS平板與弧菌顯色平板上均呈現(xiàn)可疑菌落特征，挑取可疑菌落，劃線接種于3%NaCl胰蛋白胨大豆瓊脂平板上，在36℃±1℃下培養(yǎng)18～24 h。挑取純培養(yǎng)的單個菌落進行生化鑒定，結(jié)果為：氧化酶實驗為陽性；革蘭氏染色鏡檢為陰性；3%NaCl賴氨酸脫羧酶實驗為陽性；3%NaCl半固體動力實驗為陽性；V-P實驗為陽性；3%NaCl三糖鐵瓊脂斜面產(chǎn)酸，底層產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣，不產(chǎn)硫化氫；3%NaCl甘露醇實驗為陽性；3%NaCl ONPG實驗為陰性；嗜鹽性實驗中，無鹽胰胨水中不生長，6%NaCl胰胨水中生長，8%NaCl胰胨水中生長，10%NaCl胰胨水中生長。綜合以上生化鑒定結(jié)果及可疑菌落特征，可判定TF04390009-48待測樣品未檢出副溶血性弧菌。

3討論

能力驗證是利用實驗室間比對確定實驗室檢測能力的一種活動。通過實驗室間比對，對評定實驗室檢測能力、驗證檢測方法有效性、識別實驗室間差異與存在的問題、增強客戶信心、改善實驗室管理具有十分重要的作用[6]。本次能力驗證樣品為2份，通過增菌、分離培養(yǎng)與生化鑒定，樣品TF04390009-47與TF04390009-48均未檢出副溶血性弧菌，結(jié)果評價為滿意，說明本實驗室具備檢測副溶血性弧菌的能力。

另外，在進行檢測時應注意：1）收到樣品后應立即按照作業(yè)指導書進行檢測，若不能及時檢測，應置于2～8℃冰箱內(nèi)冷藏。2）實驗中在對兩份樣品進行操作時，應分別單獨在生物安全柜中操作。使用標準菌株時，應先操作待測樣品，再操作標準菌株，避免樣品混淆及樣品與標準菌株的交叉污染。3）為保證實驗結(jié)果的準確性，在TCBS、弧菌顯色培養(yǎng)基上劃線分離培養(yǎng)時，可多做幾組平行，方便菌落特征比較，避免偶然性因素對結(jié)果的干擾。4）若條件允許，可采用特異性強的熒光PCR技術與國標方法同時操作，避免嗜鹽性試驗時出現(xiàn)假陽性結(jié)果，增加實驗結(jié)果說服力。

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【作者簡介】

葉玉華，男，1982年出生，工程師，研究方向為食品、農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測。

（編輯：李鈺雙）