油菜菌核病的室內(nèi)藥劑篩選

摘要：本文對(duì)17種市場(chǎng)上常見(jiàn)的防治真菌型病害農(nóng)藥對(duì)油菜核盤(pán)菌的抑制作用進(jìn)行了室內(nèi)測(cè)定。結(jié)果表明，供試17種藥劑中有16種對(duì)油菜核盤(pán)菌菌落生長(zhǎng)具有抑制作用；12種藥劑在200倍液下對(duì)菌絲生長(zhǎng)抑制率達(dá)99%以上，8種藥劑在1 000倍液下對(duì)菌絲生長(zhǎng)抑制率達(dá)90%以上，其中以含有效成分400 g/L異菌脲·氟啶胺和45%咪鮮胺的效果最好，EC50值分別為0.01 mg/L和0.03 mg/L。400 g/L異菌脲·氟啶胺和45%咪鮮胺可作為防治油菜菌核病的潛在備用藥劑。

關(guān)鍵詞：油菜菌核??；防治藥劑；室內(nèi)篩選

中圖分類(lèi)號(hào)：S435.654 文獻(xiàn)識(shí)別碼：A 文獻(xiàn)編號(hào)：1005-6114（2024）06-039-04

油菜菌核病是我國(guó)油菜的主要病害，是由核盤(pán)菌［Sclerotinia sclerotiorum（Lib.）de Bary］引起的組織壞死，油菜感染病害后一般減產(chǎn)10%～50%，嚴(yán)重者達(dá)80%以上［1-3］。由于沒(méi)有抗核盤(pán)菌的種質(zhì)資源，目前生產(chǎn)上對(duì)于油菜菌核病的防治主要是依賴(lài)于化學(xué)農(nóng)藥［4-6］。然而，化學(xué)農(nóng)藥連續(xù)多年的使用導(dǎo)致使核盤(pán)菌產(chǎn)生了抗藥性，因此，需要不斷篩選和開(kāi)發(fā)新型菌核病防治藥劑。為此，本研究在明確該病的主要病原菌基礎(chǔ)上，對(duì)市場(chǎng)上常用的防治真菌病害的藥劑進(jìn)行了室內(nèi)抑菌測(cè)定試驗(yàn)，以期為篩選出對(duì)油菜菌核病具有良好防治效果的藥劑提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)用的油菜核盤(pán)菌采集自宜昌市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院枝江四崗試驗(yàn)基地發(fā)病的油菜植株莖稈。無(wú)菌環(huán)境下將收集的菌核浸入1%次氯酸鈉中10 s，然后再浸入70%酒精中1 min，最后用無(wú)菌水洗滌3次，用無(wú)菌濾紙吸干表面水分，再用無(wú)菌刀切開(kāi)，轉(zhuǎn)至PDA培養(yǎng)基平板上，于20℃黑暗條件下培養(yǎng)3 d，然后將新生長(zhǎng)出的菌絲轉(zhuǎn)移到PDA平板上純化，轉(zhuǎn)接3次以后得到純化的菌株，在PDA平板上培養(yǎng)備用。

稱(chēng)取各藥劑溶入無(wú)菌水（對(duì)不易溶解的藥劑，可添加其他助溶劑）制成母液。

1.2 供試藥劑

選擇市場(chǎng)上常見(jiàn)的抑制真菌型病害的藥劑，具體見(jiàn)表1。

1.3 主要儀器設(shè)備

電子天平（精度0.1 mg）、生物培養(yǎng)箱、培養(yǎng)皿、接種器、打孔器、移液器、酒精燈等。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 17種藥劑不同倍液對(duì)核盤(pán)菌的抑制

選取17種市場(chǎng)上常見(jiàn)的農(nóng)藥，以200倍液、1 000倍液、5 000倍液的濃度制成含藥PDA培養(yǎng)基，倒入直徑9 cm培養(yǎng)皿中，每皿倒入25 mL，制成含藥培養(yǎng)基平板進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.4.2 藥劑濃度梯度對(duì)核盤(pán)菌的抑制

根據(jù)1.4.1試驗(yàn)結(jié)果以及農(nóng)藥經(jīng)濟(jì)價(jià)格，選擇部分農(nóng)藥進(jìn)行濃度梯度試驗(yàn)。將母液按照等比數(shù)列稀釋成5個(gè)濃度，從稀釋好的藥液中吸取1 mL加入到100 mL融化的PDA培養(yǎng)基中，混合均勻后倒入直徑9 cm培養(yǎng)皿中，每皿倒入25 mL，制成含藥培養(yǎng)基平板測(cè)藥劑有效中濃度EC50。

用直徑為5 mm滅菌打孔器將備用菌株置于含有不同濃度藥劑的PDA培養(yǎng)基平板中，每個(gè)培養(yǎng)皿中心一個(gè)菌餅，另設(shè)不含藥劑的PDA培養(yǎng)基為對(duì)照，于25℃恒溫培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)3 d后，采用十字交叉法（將直尺經(jīng)過(guò)菌落生長(zhǎng)中心，測(cè)得相互垂直的兩邊菌落直徑的長(zhǎng)度）測(cè)量各處理的菌落直徑。每個(gè)處理4次重復(fù)。

1.5 藥劑防效計(jì)算

按照公式（1）和（2）計(jì)算藥劑對(duì)菌絲的生長(zhǎng)抑制率。

（1）D=D1-D2

其中：D為菌落增長(zhǎng)直徑，D1為菌落直徑，D2為菌餅直徑；

（2）I=（D0-D1）×100/D0

其中：I為菌絲生長(zhǎng)抑制率，D0為空白對(duì)照菌絲生長(zhǎng)直徑，D1藥劑處理菌絲生長(zhǎng)直徑。

將菌絲生長(zhǎng)抑制率轉(zhuǎn)換為幾率值，并計(jì)算藥劑濃度的對(duì)數(shù)值。以藥劑濃度對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)、抑制率的幾率值為縱坐標(biāo)，用最小二乘法計(jì)算抑制率的幾率值和藥劑濃度對(duì)數(shù)值之間的線性回歸，求出各藥劑對(duì)供試菌株的毒力回歸方程和抑制50%菌落有效的藥物濃度EC50。

1.6 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、整理采用WPS Office（2011版）軟件，差異顯著性分析采用SPSS軟件。

2 結(jié)果與分析

2.1 17種藥劑不同倍液對(duì)核盤(pán)菌的抑制效果

試驗(yàn)結(jié)果表明，與空白對(duì)照（CK）相比，供試17種藥劑中有16種對(duì)核盤(pán)菌菌落生長(zhǎng)有明顯的抑制作用（表2）。不同藥劑對(duì)菌落抑制作用有差異，其中含有效成分氟唑菌酰羥胺、異菌脲·氟啶胺、啶酰菌胺、腐霉利、異菌脲、多菌靈、菌核凈、戊唑醇、咪鮮胺等12種藥劑在200倍液下的菌絲生長(zhǎng)抑制率在99%以上，含有效成分氟唑菌酰羥胺、異菌脲·氟啶胺、啶酰菌胺、腐霉利、多菌靈、咪鮮胺等8種藥劑在1 000倍液下的菌絲生長(zhǎng)抑制率在90%以上，以含有效成分異菌脲·氟啶胺和咪鮮胺藥劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制作用最好，在5 000倍液下的菌絲生長(zhǎng)抑制率仍能達(dá)到96%和98%以上。含有相同有效成分的不同商品藥劑如異菌脲、多菌靈、咪鮮胺等的抑制率出現(xiàn)差別，有的甚至達(dá)到顯著差異。

2.2 7種藥劑不同濃度梯度的抑菌作用

根據(jù)1.4.1試驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合文獻(xiàn)常用藥劑及用藥成本，選用含有效成分異菌脲·氟啶胺、咪鮮胺、啶酰菌胺、多菌靈、腐霉利、異菌脲和菌核凈等7種藥劑進(jìn)行梯度濃度抑菌試驗(yàn)。結(jié)果表明，與對(duì)照相比，7種藥劑濃度越大，對(duì)菌落抑制作用越明顯（表3）。其中以含有效成分異菌脲·氟啶胺和咪鮮胺的防治效果最好，EC50值分別為0.01 mg/L和0.03 mg/L，其次為啶酰菌胺、多菌靈和腐霉利，而異菌脲和菌核凈的藥效結(jié)果一般。

3 結(jié)論與討論

本研究對(duì)常見(jiàn)17種藥劑對(duì)油菜核盤(pán)菌抑制作用進(jìn)行了測(cè)定，發(fā)現(xiàn)含有效成分400 g/L異菌脲·氟啶胺和45%咪鮮胺的對(duì)菌核病菌絲生長(zhǎng)的抑制作用最明顯，可作為優(yōu)先推薦進(jìn)一步在大田試驗(yàn)。此外有效成分相同而商品名稱(chēng)不同的殺菌劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制作用出現(xiàn)差別，部分達(dá)到顯著差異，推測(cè)與不同廠家的生產(chǎn)工藝和添加劑類(lèi)型不同有關(guān)。下一步將對(duì)異菌脲·氟啶胺和咪鮮胺藥劑在不同地區(qū)的大田應(yīng)用效果、防治時(shí)期及藥劑安全性進(jìn)行深入研究，以便為示范推廣提供數(shù)據(jù)支撐。

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