高效液相色譜法測定食品中納他霉素的檢測方法分析

□ 朱盈蕊 李 琦 仵軍紅 鄭州市食品藥品檢驗所

高效液相色譜法測定食品中納他霉素的檢測方法分析

□ 朱盈蕊 李 琦 仵軍紅 鄭州市食品藥品檢驗所

本文建立了一種檢測食品中納他霉素的分析方法。樣品采用甲醇超聲提取，流動相為甲醇：11%（體積分數(shù)）乙酸溶液，流速為1.00 mL/ min，波長為305 nm，加標回收率為97.6%～104.2%，相對標準偏差小于6%，該方法簡單、快速，為納他霉素的進一步開發(fā)和利用提供依據(jù)。

納他霉素是一種無臭、無味，低劑量且安全性高的天然防腐劑，能顯著抑制酵母菌、霉菌真菌等，被廣泛應(yīng)用于乳酪、果汁、肉制品和糕點等食品中。我國《食品安全國家標準食品添加劑使用標準》（GB2760-2014）規(guī)定了不同食品中納他霉素的使用限量。為更好地保證此類食品安全，確保食品中防腐劑的使用在有效的控制范圍內(nèi)，建立一種快速、高效的檢測方法十分必要。

目前，對納他霉素的檢測方法主要有薄層層析法、分光光度法、加壓毛細管電色譜、高效液相色譜法和高效液相色譜串聯(lián)色譜法等。本文采用高效液相色譜法檢測糕點中納他霉素的含量，通過對前處理方法和色譜分離條件的優(yōu)化來達到檢測限量低、靈敏度高的目的。

試驗部分

儀器與試劑

Agilent 1260型液相色譜儀，配紫外檢測器，安捷倫科技有限公司；Techcomp CT14RD高速臺式冷凍離心機，天美（中國）科學(xué)儀器有限公司；VORTEX-5型渦旋混合器，江蘇海門其林貝爾儀器制造有限公司；ME201E電子天平，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司。

納他霉素標準儲備溶液：精密稱取納他霉素標準品（純度＞99%）0.010 0 g，用甲醇定容至100 mL，濃度為100 μg/mL。

納他霉素標準溶液：準確吸取標準儲備溶液1.00 mL于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，其濃度為1 μg/mL。分別準確量取1 μg/mL溶液0.25、0.50、1.25、2.50 mL和 5.00 mL于25 mL容量瓶中，用甲醇定容于刻度，作標準系列。

甲醇、乙酸為色譜純，其余試劑均為分析純，試驗用水為超純水，樣品購自本地超市。

試驗條件

C18反相色譜柱（5μm，4.6× 250 mm）；流動相為甲醇∶11%乙酸溶液=50∶50；流速為1.00 mL/min，波長為305 nm；進樣量為10 μL。

樣品處理

精確稱取5.00 g樣品，置于50 mL離心管中，加入30 mL甲醇，于渦旋混合器上混合均勻，超聲提取30 min，加水10 mL混合均勻后置于離心機上以10 000 r/min離心10 min，上清液過0.45 μm濾膜，濾液待上液相色譜測定。

結(jié)果與討論

色譜條件的優(yōu)化

納他霉素難溶于大部分有機溶劑，微溶于水，易溶于乙酸，試驗選擇甲醇-乙酸溶液為流動性，并對不同乙酸濃度和比例進行討論。由試驗可得,當甲醇和乙酸溶液比例為50∶50時，納他霉素達到最大響應(yīng)值；乙酸體積分數(shù)為11%時，納他霉素的峰型最佳。因此選擇甲醇∶11%乙酸溶液為50∶50的比例為流動性對納他霉素進行測定。

對納他霉素標準系列濃度進行測定，以納他霉素質(zhì)量濃度為橫坐標，相應(yīng)峰面積為縱坐標繪制標準曲線。結(jié)果表明：納他霉素質(zhì)量濃度在0.01～0.20 μg/mL，與其峰面積呈線性關(guān)系?；貧w方程為y=28.011 4c-4.334 7e-2，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 9。將對照品逐步稀釋，當稀釋至0.02 μg/mL以下時，納他霉素峰高在3倍基線噪聲以下，故0.02 μg/mL為其最低檢出濃度；按測定方法計算，定量檢出限為0.04 mg/kg。

方法的回收率

在兩種糕點空白樣品中添加3個濃度水平的納他霉素標準溶液，作加標回收率實驗，結(jié)果見表1。由表1可知，納他霉素在糕點中的加標回收率為93.6%～104.2%，相對標準偏差為為＜6%。

表1 納他霉素的回收率

結(jié)論

本方法采用高效液相色譜法測定納他霉素含量，選取糕點為實驗材料，通過優(yōu)化實驗條件，得納他霉素質(zhì)量濃度在為0.01～0.20 μg/mL范圍，與其峰面積呈線性關(guān)系。最低檢出濃度為0.02 μg/mL，定量檢出限為0.04 mg/kg，加標回收率為93.6%～104.2%，相對標準偏差＜6%。該方法操作簡單、快速，準確可靠，為食品中納他霉素的分析檢測提供了一定的參考依據(jù)。

存在問題及展望

納他霉素對真菌類有明顯的抑制作用，對細菌和乳酸菌效果不大，若專一使用納他霉素?zé)o法達到預(yù)期效果，因此與其他防腐劑協(xié)同使用應(yīng)是未來的重點研究方向。

納他霉素作為一種天然防腐劑以其安全、健康的特點而備受人們的關(guān)注，我國的納他霉素產(chǎn)業(yè)起步較晚，產(chǎn)量較低，普及率不高。隨著對其研究的逐步深入以及生產(chǎn)技術(shù)的逐步提高，會極大地推動納他霉素的普及使用，也能更好地發(fā)揮其防腐作用。

朱盈蕊（1986-），女，漢族，河南鄧州人，鄭州市食品藥品檢驗所，碩士研究生。研究方向：食品安全與分析。