LC-MS/MS法快速分析保健食品中非法添加的11種降壓類化學成分

摘 要：目的：建立液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（Liquid Chromatograph Tandem Mass Spectrometer，LC-MS/MS）法快速分析保健食品中非法添加的11種降壓類化學成分的方法。方法：采用Kinetex 2.6 μm Phenyi-Hexyi 100 ?（100 mm×2.1 mm，5.0 μm）色譜柱進行分離，以0.01%甲酸水-乙腈為流動相梯度洗脫，流速為0.4 mL·min-1，離子源為ESI，正負離子檢測模式，對降壓類保健食品中非法添加的11種化學成分進行定性定量檢測。結(jié)果：11種化學成分在1.0～250.0 ng·mL-1線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（r）均大于0.997，檢出限在0.004 2～0.170 0 ng·g-1，定量限在0.013～0.520 ng·g-1，在0.20 μg·g-1、1.25 μg·g-1和10.00 μg·g-1 3個加標水平下的回收率分別為74.9%～118.8%、82.1%～116.0%、93.5%～106.3%，連續(xù)6針精密度為1.3%～9.9%，日內(nèi)精密度為1.9%～14.5%。結(jié)論：該方法操作容易，結(jié)果準確，適用于降壓類保健食品中非法添加硝苯地平等11種化學成分的定性定量分析。

關(guān)鍵詞：保健食品；降壓類化學成分；高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

Rapid Analysis of 11 Antihypertensive Chemical Components Illegally Added in Health Food by LC-MS/MS Method

XU Fan， WU Leilei， CHU Tingting， SHI Xiaoyu

（Shiyan Institute of Food and Drug Inspection， Shiyan 442000， China）

Abstract： Objective： To establish a rapid method for the analysis of 11 antihypertensive chemical components illegally added in health food by liquid chromatograph tandem mass spectrometer （LC-MS/MS）. Method： The separation was performed on Kinetex 2.6 μm Phenyi-Hexyi 100 ? （100 mm×2.1 mm， 5.0 μm） column， and gradient elution was performed on 0.01% formic acid-acetonitrile as mobile phase at the flow rate of 0.4 mL·min-1. The ion source was ESI and the positive and negative ion detection mode was adopted. Qualitative and quantitative detection of 11 chemical components illegally added in antihypertensive health food was carried out. Result： The linear relationship between the 11 chemical components was good in the range of 1.0 ng·mL-1 to 250.0 ng·mL-1， the correlation coefficient （r） was greater than 0.997， the detection limit was 0.004 2～0.170 0 ng·g-1， and the quantitation limit was 0.013～0.520 ng·g-1. At 0.20 μg·g-1， 1.25 μg·g-1 and 10.00 μg·g-1， the recoveries were 74.9%～118.8%， 82.1%～116.0% and 93.5%～106.3%， respectively. The precision of 6 consecutive needles was 1.3%～9.9%. The intraday precision is 1.9%～14.5%. Conclusion： The method is easy to operate， accurate and suitable for qualitative and quantitative analysis of 11 chemical components such as nifedipine illegally added in antihypertensive health food.

Keywords： health foods; antihypertensive chemical compositions; liquid chromatograph tandem mass spectrometer

高血壓是一種嚴重危害人類健康的慢性病之一，如不及時干預可引起全身大部分器官器質(zhì)性改變[1]，嚴重時可致人死亡。雖然降壓類化學成分起效迅速，療效確切，市場應(yīng)用廣泛，但長期應(yīng)用會不同程度地損害肝、腎等器官[2]。目前，在各類保健食品中添加化學成分的現(xiàn)象逐漸受到社會的關(guān)注[3]。在利益的驅(qū)使下，部分不良商家會在保健食品中大量非法添加降壓類化學成分，導致消費者超量服用降壓類藥物，給身體帶來不可預計的傷害[4]。液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（Liquid Chromatograph Tandem Mass Spectrometer，LC-MS/MS）法靈敏度高，分析時間短、范圍廣，分離能力強，自動化程度高，在檢驗檢測行業(yè)應(yīng)用廣泛。本文建立LC-MS/MS法快速分析保健食品中非法添加的11種降壓類化學成分的方法，為市場監(jiān)管提供可靠的技術(shù)支持[4-5]。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器設(shè)備

降壓類保健茶，市場購買。

11種降壓化學成分標準物質(zhì)為阿替洛爾、鹽酸可樂定、鹽酸哌唑嗪、硝苯地平、利血平、尼群地平、尼索地平、非洛地平、尼莫地平、氫氯噻嗪和卡托普利，純度均大于99%，中國食藥檢院；甲醇、乙腈（質(zhì)譜級），美國默克公司；甲酸、甲酸銨（質(zhì)譜級），上海安譜實驗科技有限公司；實驗用水均為購置的娃哈哈純凈水。

AB SCIEX 4500 QTRAP高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（配有ESI源，正負離子同時掃描），美國AB SCIEX公司。

1.2 標準溶液制備

精密稱取11種降壓化學成分標準物質(zhì)適量，加甲醇分別制成0.5 mg·mL-1的標準物質(zhì)儲備液。再分別吸取各標準物質(zhì)儲備液0.01 mL，于同一10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度線，得濃度為0.5 μg·mL-1的混合標準儲備液。

1.3 樣品制備

取供試品適量，研細，精密稱取一次服用劑量，（液體樣品需蒸干），置50 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲溶解，放冷，加甲醇定容，搖勻，即得。

1.4 色譜條件

色譜柱：Kinetex 2.6 μm Phenyi-Hexyi 100 ?（100 mm×2.1 mm，5.0 μm）；柱溫：40 ℃；流動相A：0.01%甲酸水溶液；流動相B：甲醇；流速：0.4 mL·min-1。梯度洗脫程序：0～1.0 min，5%B；1.0～1.5 a6434d91264b5b7d5da61b7f4890d4d6min，5%B→35%B；1.5～6.0 min，35%B→95%B；6.0～8.0 min，95%B；8.0～8.1 min，95%B→5%B；8.1～11.0 min，5%B；進樣量：2 μL。

1.5 質(zhì)譜條件

離子源：ESI源；監(jiān)測模式：正、負離子多離子反應(yīng)監(jiān)測模式；監(jiān)測離子對及相關(guān)電壓參數(shù)設(shè)定見表1；氣簾氣壓力：35 psi；噴撞氣壓力：9 psi；離子化電壓：正離子模式掃描電壓5 500 V、負離子模式掃描電壓-4 500 V；離子源溫度：550 ℃；噴霧氣壓力：55 psi；輔助加熱氣壓力：55 psi。

1.6 測定方法

分別取供試品溶液和標準物質(zhì)溶液2 μL，注入液質(zhì)聯(lián)用儀，按標準曲線法計算11種降壓化學成分含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

查閱化合物的分子式，在正、負離子掃描模式下，先手動進樣濃度為100 ng·mL-1的混合標準物質(zhì)溶液，查找11種化學成分的母離子及相應(yīng)的2～3個子離子，再分別優(yōu)化各成分的去簇電壓和碰撞能，優(yōu)化結(jié)果見表1。

2.2 方法學驗證

2.2.1 線性范圍、檢出限和定量限

在空白基質(zhì)中加入適量混合標準溶液，按照1.3樣品制備方法，制備濃度為1.0 ng·mL-1、2.5 ng·mL-1、12.5 ng·mL-1、50.0 ng·mL-1、100.0 ng·mL-1、200.0 ng·mL-1和250.0 ng·mL-1的混合標準系列溶液，按照色譜和質(zhì)譜條件進行實驗。以濃度為橫坐標，定量離子峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。由表2可知，11種降壓類成分在1.0～250.0 ng·mL-1線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（r）均大于0.997。表明該方法具有較高的靈敏度，能滿足日常所需的檢驗要求。

2.2.2 回收率和精密度

在空白基質(zhì)中分別添加0.20 μg·g-1、1.25 μg·g-1和10.00 μg·g-1 3個濃度水平的11種降壓化學成分的混合標準溶液，進行回收實驗，結(jié)果見表3。每個加標水平連續(xù)進樣6次，計算峰面積相對標準偏差（Relative Standard Deviation，RSD），得到連續(xù)6針的精密度，另每隔2～3 h進樣一次，共進樣6次，分別計算峰面積相對標準偏差，得到其日內(nèi)精密度。11種降壓類成分在低、中、高3種濃度下的回收率分別為74.9%～118.8%，82.1%～116.0%，93.5%～106.3%；連續(xù)6針精密度均小于10%，日內(nèi)精密度均小于15%，表明該方法的重復性和準確性良好。

3 結(jié)論

本實驗建立了LC-MS/MS法快速分析保健食品中非法添加的11種降壓類化學成分的檢測方法。該方法使用液質(zhì)常用的溫和流動相，運行時間為11 min，快速簡便。該方法的重現(xiàn)性好，靈敏度以及回收率高，具有較高的可靠性和適用性。

參考文獻

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[2]魏志雄，劉丹丹.LC-MS/MS法檢測降壓類中成藥及保健食品中非法添加的7種化學藥[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2014，10（11）：12-14.

[3]靳青果.兩種方法檢測降糖類和減肥類保健品中的化學降糖藥物效果分析[J].北方藥學，2015，12（9）：156-157.

[4]項昭保，伍曉玲，汪程遠，等.色譜及其聯(lián)用技術(shù)在保健食品非法添加藥物檢測中的應(yīng)用研究進展[J].食品工業(yè)科技，2019，40（19）：338-344.

[5]杜秋瑤，張云峰，王繼芬，等.超高效液相色譜-三重四極桿復合線性離子阱質(zhì)譜法同時測定指印中36種降壓藥[J].色譜，2022，40（2）：182-189.

作者簡介：徐凡（1988—），女，湖北十堰人，碩士，工程師。研究方向：食品藥品化妝品檢驗檢測以及食品藥品化妝品標準研發(fā)。