膠體金法快速檢測食品中的米酵菌酸

米酵菌酸（Moniliformin）是一種由真菌產生的有毒物質，常見于多種糧食作物中，尤其是玉米。它屬于酸性環(huán)肽類化合物，具有強烈的毒性和致癌性。米酵菌酸的存在對食品安全構成潛在威脅，因此需要對食品中的米酵菌酸含量進行監(jiān)測和控制。米酵菌酸的攝入對人體健康造成多種不良影響，包括肝臟損傷、腎臟損傷、免疫系統(tǒng)抑制以及神經系統(tǒng)毒性等。因此，對于食品中米酵菌酸的檢測和限制成為了食品安全監(jiān)管的重要內容。目前，常用的米酵菌酸檢測方法包括高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）和質譜法（MS）等。這些方法通常需要復雜的實驗操作和較長的分析時間，限制了其在大規(guī)模食品安全監(jiān)測中的應用。近年來，一些新型的快速檢測方法也被開發(fā)出來，如膠體金免疫層析法和光學傳感器等。這些方法具有操作簡便、快速高效的特點，能夠實現對食品中米酵菌酸的快速篩查和定量分析。

1.材料與方法

1.1 材料與試劑

四川木耳、米漿、玉米饅頭：農貿市場、飯店、批發(fā)市場；膠體金檢測卡：山東美正生物科技有限公司；米酵菌酸檢測試紙卡：山東美正生物科技有限公司；米酵菌酸標準品（98%）：廣州化學試劑廠；乙腈（色譜級）：Fisher公司；實驗室用水：miili-QA10超純水機；二水合磷酸二氫鈉：山東凱米科新材料有限公司；十二水合磷酸氫二鈉（質譜級）：山東凱米科新材料有限公司。

1.2 儀器與設備

YPNSY-12攜式樣品濃縮儀：金壇區(qū)西城新瑞儀器廠；B114127491分析天平：美國梅特勒公司；LD-3離心機：德國艾本德股份公司。

1.3 實驗方法

1.3.1實驗原理

本方法采用膠體金法分析原理。將待測樣品中的米酵菌酸進行提取，比較檢測線（T線）與控制線（C線）的顏色變化。①檢測線的顏色較淺或者消失，樣品中存在米酵菌酸；②檢測線的顏色與控制線相似或者更深，樣品中不存在米酵菌酸。

1.3.2實驗方法

取四川木耳、米漿、玉米饅頭剪碎成<1cm碎片，倒入15mL離心管并稱?。?.00±0.05）g樣品，加入5mL的提取液，并蓋上離心管蓋，使用渦旋儀進行渦動振蕩1min。從原包裝袋中取出試紙條，使用一次性微型吸管吸取樣品提取液，并垂直緩慢滴加3滴（約100μL）到試紙條S孔中，確保滴加完畢后立即開始計時。10min后，根據顏色變化，確定樣品中所含物質的存在與否。

1.3.3判定結果

本文采用比色法，通過比較檢測線（T線）與控制線（C線）顏色。T線=C線顯色/T線>C線，判為陰性（-）；T線<C線/T=0，判為陽性（+）；C線=0，試紙條上的控制線沒有顯色，無法判斷樣品中是否含有待測物。

圖1 比色法判定

1.3.4評價方式

將取食品空白基質60份，用于建立快速檢測方法并進行驗證評價。為評估方法的性能，將設置0、7.5、15、30μg/kg樣品，每個濃度水平設置20個樣品進行驗證評價。將檢測不同濃度水平的樣品，并觀察檢測線（T線）與控制線（C線）的顏色變化。通過比較不同濃度水平樣品的檢測結果，確定方法的靈敏度，即能夠檢測到的最低濃度水平。使用建立的快速檢測方法對空白樣品進行測試，以確定是否存在誤報。通過將建立的快速檢測方法與已有的參考方法對比，評估兩種方法之間的一致性。

1.3.5交叉反應

制備各500g四川木耳、米漿、玉米饅頭的空白基質樣品，①分別添加脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON）、玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZOf798b559384ab20cb0d259a0346de73cfd6a6f085a4e0c314a9c559530cc74daN）、黃曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFTB1）和赭曲霉毒素A（OchratoxinA，OTA）毒素類物質。②分別添加十二烷酸、十六烷酸、十四烷酸、油酸脂肪酸類結構類似物7.5μL。對樣品進行前處理使提取物與檢測卡上的抗體發(fā)生特異性反應，觀察檢測線（T線）和控制線（C線）的顯色變化，判斷是否存在交叉反應。計算公式如下：

交叉反應率=目標物質檢出限×100%/干擾物質檢出陽性時的最小濃度

2.結果與分析

2.1 制樣方式優(yōu)化

取四川木耳、米漿、玉米饅頭，將其分成兩份。一份將被剪碎成<1cm碎片，另一份使用組織搗碎機勻漿。稱取2g樣品進行實驗。將樣品剪碎成小碎片，減少米粉、米漿和玉米饅頭的內容物，并降低對顯色結果的干擾。此外，剪碎樣品的方式也將避免加樣孔堵塞的問題，確保實驗的順利進行。

2.2 提取時間優(yōu)化

提取時間對陰性樣品幾乎沒有影響。在1min、2min、5min、10min和30min內范圍內，目標物的提取效果較好。30min后長時間的提取導致目標物的穩(wěn)定性下降。最佳的提取時間范圍是2-5min，目標物被有效地提取且受到環(huán)境因素影響較小。如提取時間超過30min，需重新取樣處理，以確保準確的結果。

2.3 提取劑優(yōu)化

提取劑提取結果如表1所示。甲醇會提取出更多的雜質，從而導致假陰性結果的產生。水的存在可以改善乙腈的溶解性，使其更好地溶解目標物。因此，采用80%乙腈-水溶液作為提取溶劑可以提高提取效果。

2.4 加樣量優(yōu)化

加樣量結果如表2所示。當加樣量為50μL時，加樣量較少待測液無法充分地在層析過程中擴散和分離。當加樣量為150μL時，加樣量超過層析過程所需的最佳量，導致一些待測液的殘留。當加樣量為80μL-100μL時，80μL加樣孔相比于100μL加樣孔微干燥，加樣量較少，待測液在層析過程中更快地擴散和分離，故選擇加樣量為100μL。

2.5 檢出限測定

在米酵菌酸含量為0μg/kg濃度下，膠體金免疫層析法未能檢測到任何米酵菌酸的存在。當濃度達到7.5μg/kg時米酵菌酸濃度未達足夠水平，T線顯示相對較弱。當濃度達到15μg/kg時米酵菌酸濃度達足夠水平，T線明顯淺于C線。表明膠體金法能夠有效檢測到米酵菌酸。

2.6 交叉反應

在進行交叉反應試驗時，添加結構類似物和真菌毒素類物質標準品，并將其濃度設置為15μg/kg。使用膠體金檢測卡和米酵菌酸檢測卡來進行結果判定，如表3所示。結果表明，膠體金檢測卡與米酵菌酸檢測卡無陽性反應。

2.7 與參比方法檢測結果的比對

如表4所示，兩種方法的檢測結果基本一致。膠體金法在檢測米酵菌酸方面具有與傳統(tǒng)方法相媲美的準確性和可靠性。與GB5009.189-2013標準中的高效液相色譜法相比，本文膠體金法檢測結果與之符合（100%）。

結論

本研究基于膠體金法技術原理，針對食品中風險較高的米酵菌酸建立一種快速檢測方法。該方法米酵菌酸檢出限為15μg/kg，符合國家標準要求。膠體金免疫層析法具有操作簡便、快速高效的特點，適用于大規(guī)模食品安全監(jiān)測。本研究的結果為食品行業(yè)提供了一種可靠的方法來檢測食品中的米酵菌酸含量，有助于保障公眾的食品安全。未來，將進一步優(yōu)化該方法，并探索其在其他有害物質檢測中的應用，以提高食品安全監(jiān)測的效率和準確性。

作者簡介

王倩倩（1986.11-），女，漢族，山東榮成人，本科，中級；研究方向：食品、農產品檢測，食品質量與安全。