TET2重塑CXCR4 DNA甲基化對急性心肌梗死小鼠心肌組織自噬、炎癥反應(yīng)及凋亡的影響

毛山 周明 段班燕 曹政 李軍

摘要 目的： 探究急性心肌梗死（AMI）過程中內(nèi)皮細(xì)胞 tet甲基胞嘧啶雙加氧酶2（TET2）對趨化因子受體4（CXCR4）DNA甲基化的影響以及對AMI小鼠心肌組織自噬、炎癥反應(yīng)及組織細(xì)胞凋亡的影響機(jī)制，為臨床探究AMI發(fā)展的分子機(jī)制提供理論依據(jù)。 方法： 8周齡雄性C57/BL6小鼠50只，制備AMI模型，尾部注射TET2、CXCR4過表達(dá)質(zhì)粒；蛋白免疫印跡（Western Blot）法檢測心肌組織TET2、CXCR4、微管相關(guān)蛋白3（LC3）、P62、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病.2基因 （Bcl.2）關(guān)聯(lián)X蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶3（Caspase.3）、 Bcl.2表達(dá)；甲基化檢測CXCR4 DNA甲基化水平；酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測心肌組織內(nèi)炎性因子白細(xì)胞介素.6（IL.6）、腫瘤壞死因子.α（TNF.α）、白細(xì)胞介素.1β（IL.1β）水平；原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)（TUNEL）檢測各組心肌組織細(xì)胞凋亡指數(shù)。 結(jié)果： 與假手術(shù)組比較，模型組心肌組織內(nèi)TET2、CXCR4均表達(dá)上調(diào)，TET2、CXCR4均在心肌組織內(nèi)過表達(dá)，TET2過表達(dá)促進(jìn)CXCR4表達(dá)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜0.05）；與模型組比較，TET2 mimic組CXCR4啟動子區(qū)域DNA甲基化程度降低，CXCR4蛋白表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜0.05）；與假手術(shù)組比較，模型組小鼠心肌組織自噬蛋白LC3、抑制細(xì)胞凋亡蛋白Bcl.2表達(dá)下調(diào)，炎性因子IL.6、TNF.α、IL.1β水平、自噬蛋白P62、促細(xì)胞凋亡蛋白Bax、cleaved Caspase.3表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜0.05）；TET2、CXCR4過表達(dá)進(jìn)一步下調(diào)LC3、Bcl.2蛋白表達(dá)，上調(diào)炎性因子IL.6、TNF.α、IL.1β水平，P62、Bax、cleaved Caspase.3蛋白表達(dá)；TET2、CXCR4二者聯(lián)合體現(xiàn)出最低LC3、Bcl.2蛋白表達(dá)，最高炎性因子IL.6、TNF.α、IL.1β水平以及P62、Bax、cleaved Caspase.3蛋白表達(dá)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜0.05）。 結(jié)論： AMI發(fā)展中，TET2通過降低CXCR4 DNA甲基化，促進(jìn)CXCR4基因表達(dá)，進(jìn)而抑制AMI小鼠心肌組織自噬，上調(diào)炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡程度，促進(jìn)疾病發(fā)展。

關(guān)鍵詞 ?急性心肌梗死；tet甲基胞嘧啶雙加氧酶2；趨化因子受體4；DNA甲基化；自噬；炎癥反應(yīng)；凋亡

doi： ?10.12102/j.issn.1672.1349.2024.09.007

Effects of CXCR4 DNA Methylation Remodeled by TET2 on Autophagy， Inflammation and Apoptosis of Myocardial Tissue in Mice with Acute Myocardial Infarction

MAO Shan， ZHOU Ming， DUAN Banyan， CAO Zheng， LI Jun

Taihe Hospital， Shiyan 442000， Hubei， China， E.mail： geshan2786397679@163.com

Abstract Objective： To explore the effect of tet methylcytosine dioxygenase 2（TET2） on DNA methylation of C.X.C motif receptor 4（CXCR4） during acute myocardial infarction（AMI），and the mechanism of its effect on myocardial autophagy，inflammation and apoptosis in AMI mice. ?Methods： Fifty 8.week.old male C57/BL6 mice ?AMI model were prepared，TET2 and CXCR4 overexpressing plasmids were injected into the tail.The expressions of TET2，CXCR4，microtubule associated protein 3（LC3），P62，B.cell lymphoma/leukemia.2 gene（Bcl.2） associated X protein（Bax），Caspase.3，and Bcl.2 in cardiac tissue were detected by Western Blot.The methylation level of CXCR4 DNA was detected.The levels of inflammatory factors interleukin.6（IL.6），tumor necrosis factor.α（TNF.α） and interleukin.1β（IL.1β） in myocardial tissue were detected by enzyme.linked immunosorbent assay（ELISA）.Terminal deoxyribonucleotidyl transferase（TdT）.mediated dUTP nick end labeling（TUNEL） was used to detect apoptosis index of myocardial tissue in each group. ?Results： Compared with sham operation group，the expressions of TET2 and CXCR4 ?up.regulated in myocardial tissue of model group，and both TET2 and CXCR4 ?overexpressed in myocardial tissue，and overexpression of TET2 promoted CXCR4 expression（ P ＜0.05）.Compared with model group，DNA methylation of CXCR4 promoter region decreased and CXCR4 protein expression increased in TET2 mimic group（ P ＜0.05）.Compared with sham operation group，expressions of autophagy protein LC3 and apoptosis inhibiting protein Bcl.2 ?down.regulated in myocardial tissue of mice in model group，and levels of inflammatory factors IL.6，TNF.α，IL.1β，autophagy protein P62，pro.apoptotic protein Bax，cleaved Caspase.3 ?up.regulated（ P ＜0.05）.Overexpression of TET2 and CXCR4 further down.regulated the expression of LC3 and Bcl.2 proteins，up.regulated the levels of inflammatory factors IL.6，TNF.α，IL.1β，and expression of P62，Bax，cleaved Caspase.3 proteins.TET2 and CXCR4 ?showed the lowest LC3 and Bcl.2 protein expression，the highest inflammatory factors IL.6，TNF.α，IL.1β levels，P62，Bax，cleaved Caspase.3 protein expression（ P ＜0.05）. ?Conclusion： In the development of AMI，TET2 can promote CXCR4 gene expression by reducing CXCR4 DNA methylation，thereby inhibiting myocardial autophagy in AMI mice，up.regulating inflammatory response and apoptosis，and promoting the development of the disease.

Keywords ?acute myocardial infarction; tet methylcytosine dioxygenase 2; C.X.C motif receptor 4; DNA methylation; autophagy; inflammatory response; apoptosis

急性心肌梗死（acute mycardial infarction，AMI）是臨床上常見的心血管疾病之一，AMI起病較急，病死率高，病人預(yù)后差，一直是科研工作者研究的重大課題 之一 ?［1.2］ 。心肌梗死后出現(xiàn)的組織損傷會迅速地激活免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，梗死的心肌組織產(chǎn)生的促炎性因子如白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子等進(jìn)一步激活白細(xì)胞整合素，從而吸引大量的炎性細(xì)胞進(jìn)入到梗死區(qū)域。炎癥反應(yīng)是心臟修復(fù)的必經(jīng)過程，可以促進(jìn)梗死心肌組織的清除及心室重塑，然而過度的炎癥反應(yīng)又會加重組織的損傷，促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡，影響心臟修復(fù) ?［3.4］ 。自噬在維持心臟正常結(jié)構(gòu)和功能方面有重要作用，有效的自噬反應(yīng)可促進(jìn)心肌細(xì)胞對抗氧化應(yīng)激性損傷，發(fā)揮保護(hù)作用，缺乏自噬或低效率的自噬可導(dǎo)致心臟擴(kuò)大及心肌受損，進(jìn)一步加重心肌細(xì)胞凋亡等。因此，心肌組織自噬、炎癥反應(yīng)、心肌細(xì)胞凋亡及趨化因子水平均為研究AMI作用機(jī)制的有效切入點(diǎn) ?［5］ 。

DNA甲基化、乙?；⑻腔约傲姿峄缺碛^遺傳學(xué)在諸多疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，調(diào)控基因表達(dá)，DNA的甲基化在AMI的病理機(jī)制中具有重要作用 ?［6.7］ 。研究顯示，趨化因子受體4（CXCR4）在炎癥或損傷的組織中表達(dá)上調(diào)，同時可吸引免疫細(xì)胞到炎癥組織參與炎癥反應(yīng)，目前關(guān)于CXCR4甲基化在AMI中的調(diào)控機(jī)制尚不清楚 ?［8.10］ 。 tet甲基胞嘧啶雙加氧酶2（tet methylcytosine dioxygenase 2，TET2）作為一種重要的表觀遺傳修飾酶，在抗感染炎癥免疫應(yīng)答及炎癥消退過程中發(fā)揮重要作用 ?［11］ 。病原體微生物入侵后，TET2在炎癥免疫活化中被誘導(dǎo)升高，促進(jìn)免疫細(xì)胞的分化擴(kuò)增和免疫應(yīng)答；炎癥后期，可反饋性地抑制炎性因子的轉(zhuǎn)錄和分泌，促進(jìn)炎癥消退，所以，TET2是炎癥類疾病重要的候選基因之一 ?［12.13］ 。TET2在表觀遺傳學(xué)中的調(diào)控作用可觀，可以通過基因的甲基化來調(diào)控下游靶向基因的表達(dá)，致廣泛的DNA甲基化，進(jìn)而對疾病發(fā)生發(fā)展過程起到調(diào)控作用。本研究探討TET2對CXCR4 DNA甲基化及基因表達(dá)的影響，分析TET2/CXCR4軸對AMI小鼠心肌組織自噬、炎癥反應(yīng)及凋亡的影響機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實驗對象

8周齡雄性C57/BL6小鼠50只，購自湖北省實驗動物中心，實驗動物許可證號：SCXK（鄂）2023.0089。術(shù)前小鼠均自由飲水、進(jìn)食，分籠飼養(yǎng)，溫度25～27 ℃及濕度40%～50%。

1.2 主要實驗試劑

胎牛血清、胰蛋白酶購自上海鈺博生物科技有限公司；甘油明膠封片劑、二喹啉甲酸（BCA）蛋白濃度測定盒、十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS.PAGE）凝膠設(shè)備、電泳緩沖液、聚偏二氟乙烯（PVDF）膜、增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法（ECL）檢測試劑盒等均購 自美國Gibco公司；白細(xì)胞介素（IL）.6、腫瘤壞死因子.α （TNF.α）、IL.1β酶聯(lián)免疫吸附法（euzymelinked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒購自阿拉丁化學(xué)試劑有限公司；兔抗鼠TET2抗體、CXCR4抗體、兔抗鼠B細(xì)胞淋巴瘤/白血病.2（Bcl.2）相關(guān)X蛋白（Bax）、兔抗鼠Bcl.2、兔抗鼠cleaved 半胱氨酸蛋白酶.3（Caspase.3）、兔抗鼠微管相關(guān)蛋白3（LC3）抗體、兔抗鼠P62抗體、甘油醛.3.磷酸脫氫酶（GAPDH）抗體均購自美國ABC公司；辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記二抗購自上海碧云天有限公司；Lipofectamine2000、TET2、CXCR4模擬物及陰性對照均購自上海吉瑪公司。

1.3 主要實驗儀器

流式細(xì)胞儀、全自動生化檢測儀、實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT.PCR）測試儀、RT.100酶標(biāo)儀、Mini PRO 型電泳儀及轉(zhuǎn)膜儀、電泳槽、凝膠成像系統(tǒng)、超凈工作臺、倒置顯微鏡均購自美國Beckman公司，臺式高速離心機(jī)、微量可調(diào)節(jié)儀器等均購自美國Beckman公司；小動物呼吸機(jī)購自蘇州化學(xué)設(shè)備有限公司。

1.4 實驗分組

50只8周齡雄性C57/BL6小鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法將其分為假手術(shù)組、模型組、TET2 過表達(dá)質(zhì)粒（mimic）組、CXCR4 mimic組、TET2＋CXCR4 mimic組，每組10只。

1.5 AMI的建立 ?［14］

除假手術(shù)組外，各實驗組小鼠連接心電圖，氣管插管，連接小動物呼吸機(jī)，通氣，頻率控制在150次/min，其呼氣、吸氣的時間比為5∶4；于左胸第3肋間或第4肋間開胸，暴露心臟，在左心耳與肺動脈圓錐間，以左冠狀動脈主干為標(biāo)志，采用8.0號縫線針穿刺結(jié)扎左前降支（LAD）；觀察小鼠心電圖，以心電圖Ⅱ?qū)?lián)出現(xiàn)ST段抬高及肉眼觀察結(jié)扎區(qū)域以下組織變白等心肌缺血表現(xiàn)確定為結(jié)扎成功的標(biāo)志；之后逐層關(guān)胸。假手術(shù)組小鼠只開胸，不結(jié)扎LAD。

1.6 藥物干預(yù)

在AMI模型建立后，每天給予各組小鼠尾部靜脈注射相應(yīng)的TET2 mimic（5 μmol/L）、CXCR4 mimic（5 μmol/L）；干預(yù) 周期為2周，術(shù)后處死小鼠，留取心肌組織用于后續(xù)實驗。

1.7 ELISA檢測炎性因子IL.6、TNF.α、IL.1β水平

收集小鼠心肌組織懸浮液20 μL，采用ELISA法在酶標(biāo)儀于450 nm波長處檢測IL.6、TNF.α、IL.1β因子水平。

1.8 ?DNA斷裂的原位末端標(biāo)記（TUNEL）檢測細(xì)胞凋亡

在酶介導(dǎo)的作用下，采用熒光素化的dUTP標(biāo)記與DNA斷裂的3.OH末端，采用過氧化物酶連接到DNA的斷點(diǎn)，加入熒光顯色劑和4′，6.二脒基.2.苯基吲哚（DAPI）顯色；于波長465～495 nm處在熒光顯微鏡下對心肌細(xì)胞的凋亡進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；根據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)分析，活細(xì)胞核呈彌散均勻熒光，出現(xiàn)細(xì)胞凋亡時，細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見濃染致密的顆粒塊狀綠色熒光；最后計算心肌細(xì)胞平均凋亡指數(shù)（AI）。

1.9 CXCR4 DNA甲基化檢測

重亞硫酸鹽處理DNA后，未甲基化的細(xì)胞嘧啶變?yōu)槟蜞奏?，而甲基化的胞嘧啶始終不變。由此設(shè)計兩對甲基化特異性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（MSP）引物，通過在線甲基化軟件分析確定CXCR4基因啟動子與外顯子區(qū)域存在多個CpG島。CXCR4.MSP.M正向引物為5′.CTCCTGGACCTGGACCTGGGA.3′，反向引物為 5′.ACTGGGACCTGGACCTGGGAT.3′；CXCR4.MSP.U 正向引物為5′.ACTGGACCTGGACCTGGGAAT.3′，反向引物為5′.TCCTGGACCTGGGACCTGAATG.3′；引物序列由上海吉馬公司合成。

取腎臟組織，制備組織懸浮液，采用Trizol法提取總RNA，采用紫外分光光度計測定RNA濃度，參照反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA合成cDNA，嚴(yán)格按照RT.PCR檢測試劑盒說明書的配置反應(yīng)體系，將其置于實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測儀檢測；RT.PCR反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性5 min，循環(huán)1次，95 ℃預(yù)變性15 s，60 ℃下退火60 s，72 ℃延伸30 s，循環(huán)40次，待PCR反應(yīng)結(jié)束后亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換DNA后再進(jìn)行純化。采用2 ?－ΔΔCt 法計算CXCR4 DNA甲基化的相對表達(dá)量。

1.10 蛋白免疫印跡（Western Blot）法檢測相關(guān)蛋白表達(dá)

取材后加入放射免疫沉淀法裂解緩沖液（radio immunoprecipitation assay lysis buffer，RIPA）進(jìn)行組織勻漿裂解，提取蛋白質(zhì)，上樣蛋白緩沖溶液，進(jìn)行SDS.PAGE電泳分離蛋白，將檢測蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，采用5%的脫脂牛奶封閉2.5 h，非離子型去污劑（TBST）清洗3次；將PVDF膜與一抗在5 ℃下孵育過夜，采用TBST清洗；PVDF膜與熒光二抗孵育1.5 h，經(jīng)TBST清洗后采用紅外成像系統(tǒng)進(jìn)行掃描，采用Image軟件進(jìn)行灰度分析；其中一抗稀釋比例為： TET2為1∶1 000，CXCR4為1∶1 000，Bax為1∶1 500， Bcl.2為1∶1 000，cleaved Caspase.3為1∶1 000，LC3為1∶1 500，P62為1∶1 500。

1.11 統(tǒng)計學(xué)處理

采用GraphPad Prism 8.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x ?± s ）表示，兩組間比較采用 t 檢驗，多組間比較采用One.way ANOVA分析。以 P ＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 ?各組小鼠心肌組織內(nèi)TET2、CXCR4蛋白表達(dá)比較

與假手術(shù)組比較，模型組小鼠心肌組織內(nèi)TET2、CXCR4蛋白表達(dá)上調(diào)（ P ＜0.05）；TET2、CXCR4在心 肌組織內(nèi)過表達(dá)，TET2過表達(dá)促進(jìn)CXCR4表達(dá) （ P ＜0.05）。詳見圖1、圖2。

2.2 TET2重塑AMI小鼠心肌組織內(nèi)CXCR4 DNA甲基化相對表達(dá)量

MSP實驗顯示，與模型組比較，TET2 mimic組CXCR4啟動子區(qū)域DNA甲基化程度降低，CXCR4蛋白表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜0.05）。詳見圖3、圖4。

2.3 TET2重塑CXCR4 DNA甲基化對心肌組織自噬的影響

與假手術(shù)組比較，模型組小鼠心肌組織自噬蛋白 LC3表達(dá)下調(diào)，P62表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜ 0.05）；TET2、CXCR4過表達(dá)下調(diào)LC3，上調(diào)P62，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜0.05）；TET2、CXCR4二者過表達(dá)進(jìn)一步下調(diào)LC3表達(dá)，進(jìn)一步上調(diào)P62表達(dá)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜0.05）。詳見圖5、圖6。

2.4 TET2重塑CXCR4 DNA甲基化對心肌組織炎癥反應(yīng)的影響

與假手術(shù)組比較，模型組小鼠心肌組織炎性因子IL.6、TNF.α、IL.1β水平升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜0.05）；TET2、CXCR4過表達(dá)上調(diào)IL.6、TNF.α、IL.1β水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜0.05）；TET2、CXCR4二者過表達(dá)進(jìn)一步上調(diào)IL.6、TNF.α、IL.1β因子水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜0.05）。詳見表1。

2.5 TET2重塑CXCR4 DNA甲基化對心肌組織凋亡的影響

2.5.1 細(xì)胞凋亡

與假手術(shù)組比較，模型組小鼠心肌組織凋亡指數(shù)上調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜0.05）；TET2、CXCR4過 表達(dá)進(jìn)一步上調(diào)凋亡指數(shù)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜ 0.05）；TET2、CXCR4二者過表達(dá)進(jìn)一步提升心肌組織凋亡指數(shù)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜0.05）。詳見圖7、圖8。

2.5.2 凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)

與假手術(shù)組比較，模型組小鼠心肌組織內(nèi)促凋亡 蛋白Bax、cleaved Caspase.3表達(dá)上調(diào)，抑凋亡蛋白Bcl.2表達(dá)下調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜0.05）；與模型組比較，TET2、CXCR4過表達(dá)進(jìn)一步上調(diào)Bax、cleaved Caspase.3表達(dá)，下調(diào)Bcl.2表達(dá)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜0.05）；TET2、CXCR4二者過表達(dá)進(jìn)一步提升心肌組織內(nèi)Bax、cleaved Caspase.3表達(dá)，降低Bcl.2表達(dá)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P ＜0.05）。詳見圖9、圖10。

3 討 論

心室重塑是導(dǎo)致機(jī)體心功能失代償最為重要的機(jī)制，且多種因子參與心肌細(xì)胞的炎癥、凋亡及自噬等過程 ?［15］ 。心肌梗死后心室重塑的重要表現(xiàn)為心肌的纖維化和細(xì)胞凋亡，如何有效地減少心肌細(xì)胞凋亡，降低炎癥反應(yīng)，有效地控制心室重塑，仍然是臨床治療的難題之一，探索心肌梗死發(fā)生發(fā)展的有效靶點(diǎn)藥物具有重要的意義 ?［16］ 。目前，TET2已經(jīng)被證實是維持胚胎纖維細(xì)胞多項功能的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子靶點(diǎn)，在多種組織中廣泛表達(dá) ?［17］ 。TET2基因的多個突變位點(diǎn)與造血系統(tǒng)的惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)；TET2基因突變與炎癥反應(yīng)的免疫調(diào)控密切相關(guān)，提示TET2可能參與心肌梗死發(fā)展及心室重塑的病理過程 ?［18.19］ 。本研究對AMI小鼠進(jìn)行TET2過表達(dá)慢病毒尾部注射處理，結(jié)果顯示，TET2在AMI小鼠體內(nèi)成功過表達(dá)，且TET2的過表達(dá)可明顯促進(jìn)AMI的病理發(fā)展過程，是AMI發(fā)展的促進(jìn)性因子。

DNA甲基化是基因表達(dá)的調(diào)控方式之一，研究表明，TET家族可通過介導(dǎo)DNA甲基化表達(dá)來調(diào)控其基因的含量表達(dá) ?［20］ 。TET基因家族在胚胎發(fā)育過程中就與造血系統(tǒng)疾病、實體瘤的進(jìn)展密切相關(guān)，同時在預(yù)后判斷中發(fā)揮積極作用。然而，目前相關(guān)學(xué)者對TET家族基因調(diào)控的下游靶點(diǎn)以及關(guān)于TET基因家族自身表達(dá)的調(diào)控機(jī)制認(rèn)識都相對局限，關(guān)于TET家族成員及其所介導(dǎo)的DNA甲基化在機(jī)體生長發(fā)育與疾病發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)機(jī)制尚需進(jìn)一步研究 ?［21］ 。CXCR4是G蛋白偶聯(lián)受體家族的成員之一，與磷脂酰肌醇3激酶、核轉(zhuǎn)錄因子κB、活化的T細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路等密切相關(guān) ?［22］ 。CXCR4甲基化已經(jīng)被證實可以充分參與到血液系統(tǒng)疾病中，同時與炎癥免疫源性疾病的發(fā)展密切相關(guān)，盡管目前CXCR4 DNA的甲基化在諸多疾病中被相繼報道，但是其在AMI發(fā)展過程中作用的報道較少 ?［23］ ?；诖耍狙芯刻接懥薚ET2重塑CXCR4 DNA甲基化的相關(guān)研究，結(jié)果顯示，TET2基因的過表達(dá)可以促進(jìn)CXCR4的表達(dá)，同時TET2過表達(dá)組CXCR4啟動子區(qū)域DNA甲基化程度降低，CXCR4蛋白表達(dá)升高，提示TET2通過抑制CXCR4 DNA甲基化來升高CXCR4基因在AMI小鼠心肌組織中的表達(dá)，進(jìn)而對其心室重塑的病理學(xué)特征進(jìn)行調(diào)控。

AMI發(fā)生后，心肌組織周圍會有IL.1β、TNF.α、IL.6 等炎性因子浸潤，誘導(dǎo)炎性細(xì)胞的趨化性行為，進(jìn)一步擴(kuò)散至損傷的心肌組織。強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)可導(dǎo)致心肌組織細(xì)胞的凋亡加重，梗死區(qū)域面積擴(kuò)大 ?［24］ 。本研究結(jié)果顯示，TET2、CXCR4過表達(dá)均可以進(jìn)一步提高AMI小鼠心肌組織的炎癥反應(yīng)，IL.1β、TNF.α、IL.6水平明顯升高，同時可以升高心肌組織細(xì)胞的凋亡能力，升高凋亡指數(shù)、促進(jìn)凋亡蛋白Bax及cleaved Caspase.3蛋白的表達(dá)，提示TET2通過抑制CXCR4 DNA甲基化來促進(jìn)AMI小鼠心肌組織炎癥反應(yīng)的程度，加重心肌組織細(xì)胞凋亡，促進(jìn)疾病的發(fā)展。研究表明，自噬在維持機(jī)體心臟正常結(jié)構(gòu)和功能方面具有重要作用，可充分降解自身受損細(xì)胞器和部分蛋白質(zhì)等，進(jìn)而可實現(xiàn)再循環(huán)利用 ?［25］ 。有效的自噬作用可使心肌細(xì)胞應(yīng)對外來損傷，在心肌梗死后心室重塑過程中起到保護(hù)作用。而缺乏自噬或降低效率的自噬均可進(jìn)一步加重AMI后心室重塑現(xiàn)象，使其心功能進(jìn)一步受損 ?［26］ 。本研究結(jié)果顯示，TET2、CXCR4過表達(dá)均可以降低心肌細(xì)胞的自噬能力，抑制LC3的表達(dá)，促進(jìn)P62表達(dá)，提示TET2通過抑制CXCR4 DNA甲基化來抑制AMI小鼠心肌組織自噬程度，加重心肌組織細(xì)胞凋亡，促進(jìn)疾病的發(fā)展。

綜上所述，在AMI的發(fā)展過程中，TET2通過降低CXCR4 DNA甲基化，促進(jìn)CXCR4基因表達(dá)，進(jìn)而抑制AMI小鼠心肌組織自噬，上調(diào)炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡程度，促進(jìn)疾病發(fā)展；TET2通過CXCR4 DNA甲基化在心肌梗死后心室重塑過程中發(fā)揮重要作用，有望從表觀遺傳的角度為治療心肌梗死后心室重塑提供理論依據(jù)和藥物作用靶點(diǎn)。

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（收稿日期：2022.10.29）

（本文編輯 鄒麗）