羊布魯氏菌病原分離診斷和綜合防治措施

文│楊正帥 （山東省臨沂市羅莊區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

我國(guó)作為養(yǎng)殖大國(guó)，綿羊、山羊等養(yǎng)殖數(shù)量較大，國(guó)家統(tǒng)計(jì)局統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，2022年我國(guó)養(yǎng)羊業(yè)不斷發(fā)展，不僅為消費(fèi)者提供了優(yōu)質(zhì)的羊肉及相關(guān)產(chǎn)品，而且也是農(nóng)牧民的主要經(jīng)濟(jì)來(lái)源之一，為國(guó)家鄉(xiāng)村振興產(chǎn)業(yè)的發(fā)展奉獻(xiàn)了力量。但隨著養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展，導(dǎo)致羊只患布魯氏菌病的風(fēng)險(xiǎn)增大。因此，在使用科學(xué)準(zhǔn)確的診斷方式診斷羊布魯氏菌病的基礎(chǔ)上，尋求有效的治療方法和科學(xué)的防控措施十分必要。

布魯氏菌病是養(yǎng)殖業(yè)中較為常見(jiàn)的人畜共患性傳染病之一，不僅會(huì)對(duì)牛羊畜禽的生產(chǎn)和健康造成威脅，還會(huì)威脅消費(fèi)者的生命安全，因此，做好羊布魯氏菌病的診斷和防控工作具有重要意義。本文從羊布魯氏菌病病原的分離診斷、養(yǎng)殖實(shí)踐中的治療及綜合防控措施3個(gè)方面進(jìn)行闡述，以期能為廣大養(yǎng)殖戶健康養(yǎng)羊提供參考和借鑒，保證羊只的健康及消費(fèi)者的生命安全。

一、羊布魯氏桿菌概述

布魯氏桿菌屬于革蘭氏陰性，能感染哺乳動(dòng)物，不會(huì)產(chǎn)生芽孢的小桿菌，主要包括馬、狗、林鼠、綿羊等6個(gè)類型，其中羊、牛、豬最為常見(jiàn)且也能感染人。羊布魯氏桿菌可感染不同品種、不同年齡階段、不同性別的羊，尤其是在母羊中發(fā)病率更高。患病羊主要表現(xiàn)為多汗、發(fā)燒、關(guān)節(jié)腫痛、乏力、精神萎靡，妊娠母羊表現(xiàn)為流產(chǎn)、死胎且陰道紅腫伴隨子宮內(nèi)膜炎、乳房炎，甚至不孕等疾病，分泌水樣乳汁且凝結(jié)成塊，公羊表現(xiàn)為睪丸炎、附睪炎等，此病成為地方流行性疾病，且一年四季均可發(fā)病。

二、診斷方法

1.病原分離培養(yǎng)。此方法是診斷布魯氏菌病的金標(biāo)準(zhǔn)，但也存在操作復(fù)雜、實(shí)驗(yàn)室要求較高、易被污染、檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)等問(wèn)題。其原理是通過(guò)采集患病羊的血液、骨髓、其他體液等在培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，從而分離得到布魯氏桿菌。用一次性采血器采集患病羊頸部血液，并將其在無(wú)菌條件下注入雙相血培養(yǎng)基冷藏，接著在生物安全等級(jí)為3級(jí)及以上的實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng)，所需條件為37℃、濃度為10%的CO2培養(yǎng)箱，普通菌種3～4天即可生長(zhǎng)出菌落。

2.血清學(xué)檢測(cè)。常用的血清學(xué)檢測(cè)包括酶聯(lián)免疫吸附、虎紅平板凝集、試管凝集試驗(yàn)等。

（1）酶聯(lián)免疫吸附。此方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、檢測(cè)時(shí)間短等優(yōu)勢(shì)。其原理主要是在ELISA板上包被菌體抗原，將處理過(guò)的血清滴入板中，若滴入的血清中含有布魯氏桿菌的抗體，則會(huì)在板內(nèi)形成抗原抗體的復(fù)合物，然后再加入酶標(biāo)進(jìn)行顏色反應(yīng)；最后使用酶標(biāo)儀檢測(cè)出OD值從而計(jì)算出關(guān)于抗體的數(shù)量。

（2）虎紅平板凝集。此方法具有操作簡(jiǎn)單、成本較低、可批量檢測(cè)、準(zhǔn)確度高的特點(diǎn)，但可能存在假陽(yáng)性。其原理是當(dāng)抗原與抗體結(jié)合后會(huì)形成凝集物，根據(jù)凝集程度進(jìn)行判斷。此方法一般作為初篩，若檢測(cè)結(jié)果表現(xiàn)為陽(yáng)性，再使用試管凝集試驗(yàn)進(jìn)行二次檢測(cè)，從而有效降低假陽(yáng)性的發(fā)生率，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

（3）試管凝集試驗(yàn)。此方法為我國(guó)法定的檢測(cè)布魯氏菌病的方法，既可以定性也可以定量和半定量；其精確度高于虎紅平板凝集試驗(yàn)，也具有穩(wěn)定性強(qiáng)、敏感性高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。其原理為顆?？乖谶m當(dāng)電解質(zhì)條件下可以與一定比例的抗體進(jìn)行特異性結(jié)合，即發(fā)生凝集反應(yīng)，當(dāng)此反應(yīng)在體外進(jìn)行時(shí)所導(dǎo)致的凝集現(xiàn)象為試管凝集試驗(yàn)。

3.分子生物學(xué)診斷。常見(jiàn)的包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)等。

（1）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。此方法具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，且隨著技術(shù)手段的進(jìn)步，又衍生出了熒光定量PCR、多重PCR技術(shù)等。其原理是在95℃高溫下使雙鏈DNA變性解螺旋為單鏈，然后在60℃條件下引物與單鏈DNA互補(bǔ)配對(duì)，接著在DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度72℃條件下形成互補(bǔ)鏈，通過(guò)循環(huán)往復(fù)擴(kuò)增出DNA分子。

（2）環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增。此方法具有檢測(cè)時(shí)間短、敏感性高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，且檢測(cè)結(jié)果具有可視化的特點(diǎn)。其原理是在65℃條件下DNA處于動(dòng)態(tài)平衡，引物互補(bǔ)配對(duì)時(shí)另一條DNA鏈就會(huì)變成單鏈，通過(guò)利用4種不同的特異性引物識(shí)別靶基因的6個(gè)特定區(qū)域并在DNA聚合酶的作用下，以外側(cè)引物區(qū)段的3’末端為起點(diǎn)，與模板DNA互補(bǔ)配對(duì)，啟動(dòng)鏈置換DNA合成。

三、治療方案

1.非妊娠的羊只可以使用青霉素＋鏈霉素以肌內(nèi)注射的方式進(jìn)行治療。

2.妊娠母羊，若病情較輕可以肌內(nèi)注射10～30毫克的孕酮進(jìn)行治療；病情嚴(yán)重的需要考慮使用藥物進(jìn)行催產(chǎn)和墮胎，同時(shí)使用濃度為0.1%的高錳酸鉀溶液進(jìn)行子宮清洗，直至陰道無(wú)分泌物流出。

四、綜合防控措施

由于布魯氏菌病屬于人畜共患性傳染病，一旦發(fā)病不僅會(huì)威脅羊只健康，若消費(fèi)者接觸了患病羊或食用帶菌產(chǎn)品也可能會(huì)造成感染。因此，廣大養(yǎng)殖戶、政府部門在飼養(yǎng)過(guò)程中一定要加強(qiáng)布魯氏菌病防控工作，降低此病的發(fā)生率，甚至達(dá)到完全凈化。

1.政府方面。

（1）加強(qiáng)宣傳。由于廣大養(yǎng)殖戶專業(yè)素養(yǎng)參差不齊，對(duì)布魯氏菌病無(wú)清晰了解，因此，基層部門、防疫部門應(yīng)做好布魯氏菌病宣傳工作，使其認(rèn)識(shí)到此病的危害性，從思想上重視此病的防控。首先，可以成立專門的宣傳隊(duì)伍，定期為各地區(qū)養(yǎng)殖戶進(jìn)行關(guān)于布魯氏菌病防控知識(shí)的講解，并定期設(shè)置考核，檢驗(yàn)養(yǎng)殖戶的接受程度。然后可以充分利用新媒體，如抖音、快手、直播等，將關(guān)于布魯氏菌病的相關(guān)知識(shí)制作成短視頻，能多次播放，加深理解。

（2）加大檢疫力度。在飼養(yǎng)過(guò)程中，廣大養(yǎng)殖戶可能存在僥幸心理，為了減少工作量，不定期進(jìn)行布魯氏菌病檢疫工作，加大此病發(fā)生、傳播的風(fēng)險(xiǎn)。因此，為了對(duì)廣大養(yǎng)殖戶起到督促作用，政府部門應(yīng)加大檢疫力度，并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果實(shí)行一定的獎(jiǎng)懲制度。其具體工作主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面。

對(duì)轄區(qū)內(nèi)的養(yǎng)殖場(chǎng)定期進(jìn)行抽檢，對(duì)有問(wèn)題的羊及時(shí)進(jìn)行淘汰或撲殺，并責(zé)令養(yǎng)殖場(chǎng)實(shí)施整改。

做好羊只屠宰前的產(chǎn)地檢疫工作，制定完善的檢疫流程，嚴(yán)格執(zhí)行，對(duì)檢疫合格的羊只才能運(yùn)輸?shù)酵涝讏?chǎng)，對(duì)檢疫陽(yáng)性的要進(jìn)行無(wú)害化處理。

制定科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难蛑徽{(diào)運(yùn)方案，對(duì)新引入的羊要具備完善的檢疫證明，并做好引種前的檢疫、引種后的隔離飼養(yǎng)等工作，避免在引種過(guò)程中造成疫病傳播。

做好羊只屠宰檢疫，實(shí)施定點(diǎn)屠宰、集中屠宰等，責(zé)令關(guān)停小作坊式的屠宰場(chǎng)，并對(duì)每只屠宰的羊只進(jìn)行詳細(xì)登記，注明來(lái)源，提升產(chǎn)品質(zhì)量。

（3）增加經(jīng)費(fèi)投入。充足的經(jīng)費(fèi)投入是做好布魯氏菌病防控工作的重要條件，因此政府部門要設(shè)置專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)。其一，在經(jīng)濟(jì)條件允許的情況下，設(shè)置陽(yáng)性羊只無(wú)害化處理的經(jīng)費(fèi)補(bǔ)貼，降低養(yǎng)殖戶的損失。其二，設(shè)置相關(guān)保險(xiǎn)服務(wù)和保險(xiǎn)方案，一旦出現(xiàn)陽(yáng)性羊只，在養(yǎng)殖戶強(qiáng)制捕殺和無(wú)害化處理后進(jìn)行補(bǔ)貼，防止養(yǎng)殖戶出現(xiàn)私自售賣的情況。其三，為基層畜牧獸醫(yī)工作站配備較為先進(jìn)的布魯氏菌病檢測(cè)設(shè)備，并提高基層工作人員的薪資待遇，從而保證人員充足，并調(diào)動(dòng)其工作積極性，提高此病的防治質(zhì)量。

2.養(yǎng)殖戶方面。

（1）定期消毒。完善、嚴(yán)格的消毒制度可以有效預(yù)防多種疾病的發(fā)生。首先，每天定時(shí)打掃圈舍，清除羊只糞、尿等排泄物，破壞適合病菌繁殖的環(huán)境。然后要定期消毒，在消毒前用水沖洗污物，之后選擇不同的消毒方式進(jìn)行消毒，如對(duì)于飼草料等使用深埋或焚燒的方式進(jìn)行消毒，墻面、地面、圍欄等使用2%的火堿溶液進(jìn)行噴灑消毒，金屬用具使用火焰燃燒的方法進(jìn)行消毒。

（2）科學(xué)管理。首先，要堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，盡量不從其他區(qū)域引種，避免引種過(guò)程中造成布魯氏菌病的傳播；然后，設(shè)施齊全，配備良好的通風(fēng)系統(tǒng)、飲水池、飼料槽、保溫、風(fēng)扇等設(shè)備，為羊只提供一個(gè)溫濕度適宜、空氣干凈的圈舍；最后，科學(xué)飼喂，根據(jù)各階段羊只的生長(zhǎng)發(fā)育特點(diǎn)進(jìn)行分群、分欄飼養(yǎng)，并為其提供搭配合理、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)全面、適口性良好的飼草料，并定期補(bǔ)充微量元素、維生素、礦物質(zhì)等，提高羊只自身免疫力和抵抗力。

（3）防護(hù)到位。工作人員應(yīng)做好自身防護(hù)，預(yù)防感染。進(jìn)入養(yǎng)殖區(qū)需要穿戴專門的工作服、口罩、手套等，在需要治療、接產(chǎn)時(shí)嚴(yán)禁直接用手接觸，并做好消毒處理工作。工作過(guò)程中不小心受傷需要及時(shí)使用碘伏、酒精等進(jìn)行多次深層消毒，避免病菌入侵。此外，流產(chǎn)胎兒、死亡羔羊等要收集到指定地點(diǎn)進(jìn)行無(wú)害化處理，避免隨意丟棄，且處理后需要對(duì)地面、圈舍進(jìn)行消殺，避免造成布魯氏菌病的傳播。

五、結(jié)語(yǔ)

綜上所述，羊布魯氏菌病是一種人畜共患病，會(huì)對(duì)羊只、消費(fèi)者的健康造成威脅。因此，養(yǎng)殖戶需要掌握對(duì)布魯氏桿菌的診斷方式，出現(xiàn)異常情況后及時(shí)判斷并采取有效的治療措施，通過(guò)政府部門和養(yǎng)殖戶共同努力，從源頭防止此病的發(fā)生，保證養(yǎng)羊業(yè)的安全性和穩(wěn)定性。