豬腸道疾病的診斷方法

文│顏琦 （山東省郯城縣楊集畜牧獸醫(yī)站）

樊鸞（山東省郯城縣港上畜牧獸醫(yī)站）

腸道疾病是養(yǎng)豬生產(chǎn)中最重要的經(jīng)濟問題之一，其中新生仔豬腹瀉和斷奶仔豬腹瀉是最常見的豬腸道疾病，與死亡率高、生長速度緩慢和治療費用增加有關(guān)。在新生仔豬期到斷奶后階段，多種腸道病原體感染可同時發(fā)生，導(dǎo)致復(fù)雜的臨床癥狀，正確的診斷方法可以區(qū)分腹瀉的傳染性和非傳染性原因。但大多數(shù)引起豬腸道疾病的病原體是豬腸道正常微生物群的一部分，因此對潛在病原體的檢測并不等同于對疾病的診斷，只是揭示一種可能的病因。

豬腸道中含有約800種細菌，其中潛在病原體，如梭狀芽孢桿菌、大腸桿菌和沙門氏菌，只有在特定情況下才會致病。研究表明，對來自新生仔豬腹瀉、斷奶仔豬腹瀉和臨床健康仔豬的糞便樣本進行了一組腸道病原體檢測，采用分子方法和細菌學(xué)方法檢測致病性大腸桿菌、C型產(chǎn)氣莢膜梭菌、A型產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素、輪狀病毒（A型、B型和C型）、豬流行性腹瀉病毒和傳染性胃腸炎病毒的存在情況，其中A型輪狀病毒是惟一與腹瀉存在統(tǒng)計學(xué)相關(guān)聯(lián)的病原體，其他病原體在病豬和健康豬之間沒有顯著差異。豬腸道疾病的診斷需要幾種診斷技術(shù)的結(jié)合，其中一些方法（如定量細菌學(xué)和定量實時PCR等）可以證明一種病原體的顯著存在。但在許多情況下僅分離病原體不能作出結(jié)論性診斷，需要通過證明毒力因子（如編碼毒素的基因）來確認致病性。組織學(xué)診斷將典型病癥與某種病原體分離聯(lián)系起來，以及使用免疫組織化學(xué)技術(shù)驗證與病變相關(guān)的特定抗原。血清學(xué)診斷一般不可靠，在大多數(shù)豬腸道疾病診斷中幾乎沒有什么用處。因此，診斷方法必須考慮病原體的生物學(xué)、病原體被檢測到的解剖位置，以及可用的和適當?shù)脑\斷工具來證明病原體和疾病狀態(tài)之間的相關(guān)性。

一、豬腸道疾病的臨床表現(xiàn)

豬腸道疾病最重要的臨床表現(xiàn)是腹瀉，糞便顏色（黃色、灰色、帶血等）和稠度（水樣、奶油狀等）的變化可以幫助臨床醫(yī)生進行鑒別診斷。嘔吐是腸道疾病的另一種重要的臨床癥狀，通常與病毒感染有關(guān)。每窩受影響的仔豬數(shù)以及受影響母豬的胎次也對腸道疾病的診斷有幫助，一般來說，由地方性病原體引起的腸道疾病往往主要影響母豬第一胎所產(chǎn)的仔豬，而新病原體的引入會導(dǎo)致廣泛的暴發(fā)。

二、剖檢

根據(jù)臨床評估最有效的方法是選擇3～5頭未接受過抗菌藥物治療但出現(xiàn)相應(yīng)臨床癥狀的豬，最好是急性感染且具有代表性臨床癥狀。通過剖檢對病變進行大體形態(tài)學(xué)診斷，并收集樣本進行進一步的診斷，樣本包括小腸、結(jié)腸、回盲瓣和腸系膜淋巴結(jié)。僅根據(jù)觀察到的宏觀表現(xiàn)無法作出明確診斷，但剖檢可以為診斷方向提供有用的信息，如腸炎類型（卡他性、纖維性、壞死性等）、病變部位（小腸和大腸）及其分布（局灶性、彌漫性、節(jié)段性等）可以幫助診斷。

正確采樣是剖檢診斷過程中的關(guān)鍵，并保證后續(xù)實驗室診斷的結(jié)果是可靠的。選擇要取樣的動物、數(shù)量和類型，與觀察到的臨床癥狀和剖檢病變的關(guān)系是正確取樣的關(guān)鍵。樣本收集后必須被正確保存。由于死亡后腸道會迅速發(fā)生自溶，因此從死亡動物身上獲得的組織通常不適合進行組織病理學(xué)分析。小腸（特別是回腸和空腸）和大腸樣本應(yīng)保存在不同的容器或袋子中，遠離其他組織，以免造成污染，新鮮樣品保存溫度應(yīng)在4℃，并應(yīng)在24小時內(nèi)送達實驗室。

三、豬主要腸道疾病的診斷方法

1.腸道大腸桿菌病。新生仔豬腸道大腸桿菌病是由產(chǎn)腸毒素的大腸桿菌（E. coli）引起的，該大腸桿菌具有被稱為菌毛的表面蛋白，菌毛使微生物能黏附在小腸上皮細胞刷狀邊界上的特定受體上。豬腸道對大腸桿菌菌毛的易感性隨著日齡的增長而降低，這是由于隨著動物年齡的增長，位于小腸上皮細胞上的受體數(shù)量減少、活性降低。大多數(shù)引起新生仔豬腸道大腸桿菌病的大腸桿菌菌株能產(chǎn)生熱穩(wěn)定的腸毒素STa，導(dǎo)致電解質(zhì)和液體分泌性腹瀉。新生仔豬腸道大腸桿菌病最常見于0～4天的仔豬，由于缺乏被動免疫的保護，母豬第一胎的仔豬更容易感染。發(fā)病率平均為30%～40%，但在一些豬群中可能高達80%，致死率最高達70%。腹瀉可能非常輕微，沒有脫水跡象，也可能大量腹瀉，其特征包括糞便呈堿性、水狀至奶油狀稠度、獨特的氣味、白色至黃色，可能是各種深淺的棕色。感染的新生仔豬通常情緒低落，食欲下降，可能會嘔吐或被毛粗糙、臟亂和潮濕，死亡通常發(fā)生在腹瀉發(fā)作后12～24小時，也存在死亡發(fā)生在出現(xiàn)腹瀉之前的病例。在嚴重的情況下，脫水可導(dǎo)致體重損失30%～40%，仔豬可出現(xiàn)眼窩凹陷和骨質(zhì)突出，肛門和會陰可能因接觸堿性糞便物質(zhì)而發(fā)紅。脫水不太嚴重的仔豬繼續(xù)飼喂干凈的飲水，如果治療得當只需經(jīng)受很小的影響就能恢復(fù)。

剖檢能觀察到小腸通常腫脹，輕度水腫和充血，腹瀉內(nèi)容物有特征性氣味。腸系膜淋巴結(jié)腫大、充血。這些病變即使不是典型的，也可以說明患腸道大腸桿菌病。顯微鏡病變包括小腸上皮細胞刷狀邊緣的多灶性、棒狀嗜堿性細菌聚集，在淺表固有層可觀察到輕度絨毛萎縮和中性粒細胞數(shù)量增加。

腸道大腸桿菌病的診斷是基于對腸道管腔內(nèi)容物（首選）、糞便或直腸拭子樣本的細菌學(xué)檢查。通過細菌學(xué)分離與腹瀉病情暴發(fā)有關(guān)的致病性大腸桿菌菌株，對其進行定量（無論是否純培養(yǎng)），鑒定毒力因子（通常通過PCR），以及作為補充分析的組織病理學(xué)。對從小腸（回腸和空腸）高濃度或近乎純培養(yǎng)物中分離的致病性大腸桿菌進行定量分析可知豬只患腸道大腸桿菌病。而通過PCR鑒定編碼分離菌株菌毛和毒素的毒力基因?qū)Υ_定其在觀察到的臨床疾病中的作用至關(guān)重要。

2.梭菌病。

（1）C型產(chǎn)氣莢膜梭菌。C型產(chǎn)氣莢膜梭菌感染在世界各地的豬場普遍發(fā)生，導(dǎo)致致命壞死性、出血性腸炎，主要發(fā)生在新生仔豬身上。C型產(chǎn)氣莢膜梭菌感染的臨床癥狀可能是急性的、亞急性的或慢性的，疾病進展受以下因素影響，仔豬的免疫狀態(tài)，受影響仔豬的年齡（過急性和急性疾病主要在出生后的前3天內(nèi)影響仔豬），菌株毒力。急性感染的仔豬虛弱，不愿移動，體溫過低，腹部皮膚可能在死前變暗。急性感染的仔豬可在感染后8～22小時出現(xiàn)出血性腹瀉，表現(xiàn)出抑郁，甚至快速死亡。亞急性或慢性感染的仔豬表現(xiàn)出非出血性腹瀉（糞便顏色為黃色至灰色、呈黏液狀）、生長減慢并消瘦，這些仔豬通常在幾周后死亡。

在急性病例中，剖檢能觀察到小腸的病變包括節(jié)段性黏膜壞死、出血、肺氣腫和黏膜纖維蛋白壞死滲出物。在大多數(shù)情況下，病變僅限于空腸，一般可延伸到回腸。此外，尿酸鹽晶體在腎中的沉積很常見。初始黏膜壞死后具有顯著腸道炎癥反應(yīng)的黏膜纖維蛋白脫落和黏膜的顯著壞死，可發(fā)展至腸壞死和纖維蛋白性腹膜炎，是亞急性或慢性病的主要病變。

新生仔豬C型產(chǎn)氣莢膜梭菌病的診斷可以基于存在出血性腹瀉，快速死亡，節(jié)段性、出血性或纖維蛋白壞死性腸炎。對腸道內(nèi)容物或糞便進行定量細菌學(xué)檢查，以確認C型產(chǎn)氣莢膜梭菌病的最終診斷。在血液瓊脂上，37℃厭氧環(huán)境培養(yǎng)24小時，C型產(chǎn)氣莢膜梭菌和所有其他類型的產(chǎn)氣莢膜梭菌一樣，通常形成特征性雙溶血區(qū)，再使用多重PCR檢測主要毒素基因，對菌株進行基因分型。

（2）A型產(chǎn)氣莢膜梭菌。A型產(chǎn)氣莢膜梭菌是豬腸道正常微生物群的一員，被認為是新生仔豬腸道疾病的原因，偶爾會引起斷奶豬的腸道疾病。導(dǎo)致臨床疾病的條件是腸道內(nèi)存在大量A型產(chǎn)氣莢膜梭菌，腸道內(nèi)容物和毒素產(chǎn)生量達到108～109 CFU/克。A型產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)生CPA毒素，一些菌株也會產(chǎn)生CPB2毒素。A型產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的腸道疾病與仔豬非出血性、黏液樣腹瀉有關(guān)。

目前，還沒有標準可以確切診斷患A型產(chǎn)氣莢膜梭菌腸道疾病，但可以從以下標準進行，原因不明的非出血性腹瀉，使用定量細菌學(xué)從小腸中分離大量A型產(chǎn)氣莢膜梭菌，毒素基因檢測。

3.輪狀病毒。輪狀病毒是引起仔豬腹瀉的重要原因，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了從A～J的10個輪狀病毒群，其中5個（A、B、C、E和H）已在豬群中報道。發(fā)病率被估計為20%，死亡率高達15%。臨床癥狀包括大量黃白色水樣腹瀉，伴有未消化的奶，嗜睡、嘔吐和厭食，并伴有較差的平均日增重和快速消瘦。仔豬腹瀉（7日齡及以下）可持續(xù)1～10天，而日齡大的仔豬腹瀉通常不那么嚴重，持續(xù)時間短。

輪狀病毒A型、B型和C型引起的病癥相似，胃可能會腫脹，含有未消化的奶，而小腸和大腸由于絨毛萎縮和過度擴張而表現(xiàn)出腸壁變薄，管腔中積聚有水樣、黃色或灰色糞便。顯微鏡下，在感染豬只的空腸和回腸中觀察到微觀損傷，如絨毛與隱窩長度比降低、絨毛萎縮、上皮空泡化和上皮脫落。

輪狀病毒引起的臨床癥狀在臨床上無法與其他腸道病原體引起的癥狀區(qū)分開，因此診斷需要實驗室檢測。RT-PCR和RT-qPCR通常用于從糞便或胃內(nèi)容物中檢測和鑒定輪狀病毒A型、B型和C型。