不同產(chǎn)地煨葛根的鑒定及含量測定

胡靜 位為晴 鄧倩

摘要? 采用顯微鑒別法對四川、安徽、湖北3個(gè)產(chǎn)地煨葛根外觀形狀及內(nèi)部組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步鑒定，利用薄層色譜法（TLC）鑒定煨葛根中的主要有效成分葛根素，通過高效液相色譜法（HPLC）對它們的含量進(jìn)行檢測，比較分析3個(gè)產(chǎn)地煨葛根中有效成分葛根素的含量及其差異性。結(jié)果表明，3個(gè)產(chǎn)地煨葛根中均含有葛根素，四川產(chǎn)地樣品藥材葛根素含量優(yōu)于安徽和湖北產(chǎn)地，但不同產(chǎn)地的煨葛根中葛根素含量均符合《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)葛根素的含量與產(chǎn)地有一定關(guān)系。

關(guān)鍵詞? 煨葛根；產(chǎn)地；顯微鑒別法；薄層色譜法；高效液相色譜法；含量測定

中圖分類號? R284.1? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼? A? 文章編號? 0517-6611（2024）09-0157-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2024.09.035

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Identification and Content Determination of Simmered Radix Puerariae from Different Producing Areas

HU Jing，WEI Wei-qing，DENG Qian

（School of Chemical and Pharmaceutical Engineering，Hefei Normal University，Hefei，Anhui 230601）

Abstract? The microscopic identification method was used to preliminarily identify the external shape and internal organizational structure of simmered Radix Puerariae from Sichuan，Anhui and Hubei Provinces.Thin-layer chromatography （TLC） was applied to identify the main active ingredient puerarin in simmered Radix Puerariae，and high-performance liquid chromatography （HPLC） was used to detect the puerarin content，the content and differences of the active ingredient puerarin in simmered Radix Puerariae from three producing areas were compared and analyzed.The results showed that puerarin was present in all three producing areas of simmered Radix Puerariae.The puerarin content in the samples from Sichuan region was higher than that from Anhui and Hubei regions.However，the puerarin content in simmered Radix Puerariae from different regions met the standards of the Chinese Pharmacopoeia，and there was a certain correlation between the puerarin content and the producing areas.

Key words? Simmered Radix Puerariae; Producing areas; Microscopic identification method; Thin layer chromatography; High performance liquid chromatography;Content determination

基金項(xiàng)目? 安徽省藥食同源天然資源開發(fā)與利用工程實(shí)驗(yàn)室開放基金項(xiàng)目（YSTY2022018）；安徽省大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（S202314098087）；合肥師范學(xué)院質(zhì)量工程項(xiàng)目（2022szsfkc01，2023jyxm07）。

作者簡介? 胡靜（1980—），女，安徽合肥人，副教授，博士，從事藥劑學(xué)研究。

收稿日期? 2023-08-03；修回日期? 2023-12-07

在我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)臨床上葛根主要有生葛根和煨葛根2種規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)存在形式，煨葛根就是對生葛根采用中藥煨法炮制后得到的中藥材［1］。經(jīng)過中藥炮制后煨葛根在明顯提高止瀉作用的同時(shí)，還降低了藥物的不良反應(yīng)，對藥性有緩和作用?，F(xiàn)代研究成果表明葛根經(jīng)過中藥炮制煨法前后其所含成分的類別沒有發(fā)生改變，而且其所含絕大部分成分（包括葛根素）的含量增加，葛根煨制后藥物臨床上的治療作用增強(qiáng)［2］。

由于產(chǎn)地不同，同一種藥材通常會因?yàn)榈赜驓夂蚝偷乩砦恢玫牟煌顾幬锏寞熜в休^大的差異性［3］。葛根生產(chǎn)地域分布十分廣泛，主要產(chǎn)于江蘇、浙江、云南、貴州、山東、安徽、河北、四川、廣東、湖北、湖南、重慶、河南等地［4］。由于煨葛根相對生葛根來說藥物的治療效果增強(qiáng)，不良反應(yīng)減少，且《中國藥典》上對葛根經(jīng)過其他炮制方法處理得到的炮制物都有較為清晰明了的炮制規(guī)章及參考，但對煨葛根有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的鑒定數(shù)據(jù)幾乎沒有［5］。而煨葛根中有效成分葛根素的含量會影響藥物的療效，從而影響治療的效應(yīng)性，為了能夠獲得質(zhì)量比較平穩(wěn)、藥物治療效果比較良好的藥材，筆者對不同產(chǎn)地（四川、安徽、湖北）的煨葛根（相同條件下同種煨制方法處理）進(jìn)行鑒定及含量比較研究。

1? 材料與方法

1.1? 試驗(yàn)材料

1.1.1? 試材。試驗(yàn)所用的煨葛根樣品藥材詳細(xì)信息如表1所示。

葛根素對照品（批號111692-201501），在中國藥品生物制品檢定所購買；葛根素對照藥材（批號111692-201501），在中國藥品生物制品檢定所購買。

1.1.2? 試劑。甲醇，純度級別為色譜純；三氯甲烷、30%乙醇、水合氯醛試液，均為分析純。

1.1.3? 儀器。試驗(yàn)所需的大型儀器如表2所示。基本儀器為硅膠G薄層板（批號201905031），購買于青島海洋化工廠分廠。

1.2? 試驗(yàn)方法

1.2.1? 不同產(chǎn)地煨葛根的顯微鑒別。

該試驗(yàn)是以2020年版《中國藥典》為參考，采用顯微鑒別法［6］對各煨葛根樣品藥材粉末進(jìn)行顯微鑒別研究。將各個(gè)批次的煨葛根樣品藥材分別經(jīng)中藥研磨機(jī)研磨至粉碎，使樣品藥材粉末通過4號篩，取少量的樣品粉末擱置在載玻片上，然后用滴管滴加1～2滴水合氯醛試液，在顯微鏡下檢視并拍照。

1.2.2? 不同產(chǎn)地煨葛根的薄層色譜鑒別。

1.2.2.1? 供試品溶液的配制。

稱取10個(gè)批次的煨葛根樣品藥材粉末各0.8 g于15 mL試管中，分別加入10 mL甲醇，放置2 h，用抽濾裝置濾過，將濾液放在蒸發(fā)皿中蒸發(fā)至干，將殘?jiān)糜? mL試管中，向殘?jiān)屑尤爰状?.5 mL使其溶解，則得到供試品溶液（共10組）。

1.2.2.2? 對照藥材溶液的配制。

稱取葛根對照藥材粉末0.8 g置于15 mL試管中，加入10 mL甲醇，放置2 h，用抽濾裝置濾過，將濾液置于蒸發(fā)皿中蒸干，將殘?jiān)糜? mL試管中，向殘?jiān)屑尤爰状?.5 mL使其溶解，則對照藥材溶液配制完成（1組）。用a標(biāo)示。

1.2.2.3? 對照品溶液的配制。

用電子天平準(zhǔn)確稱取葛根素對照品0.001 0 g，置于10 mL容量瓶中，加入適量甲醇，配制成含1 mg/mL葛根素的溶液，作為對照品溶液（1組）。用b標(biāo)示。

1.2.2.4? 薄層色譜鑒別。先將硅膠G薄層板置于105～110 ℃烘箱下活化30 min。再分別吸取所配制的溶液（10組供試品溶液、1組對照藥材溶液、1組對照品溶液）各10 μL，點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上，使成條狀。以三氯甲烷-甲醇-水（7.00∶2.50∶0.25）為展開劑，將硅膠G薄層板置紫外光燈（365 nm）下檢視，并記錄薄層色譜圖像［7］。

1.2.3? 不同產(chǎn)地煨葛根的含量測定。

1.2.3.1? 色譜條件。

色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以甲醇-水（25∶75）為流動相，流速設(shè)置為1.0 mL/min，柱溫為35 ℃。試驗(yàn)檢測葛根素的波長設(shè)置為250 nm。

1.2.3.2? 供試品溶液的配制。

分別將3個(gè)產(chǎn)地的煨葛根藥材樣品粉末過3號篩，取約0.1 g樣品，加入50 mL 30%乙醇，加熱回流30 min，加入30%乙醇補(bǔ)足損失的重量，振蕩至均勻，取續(xù)濾液作為供試品溶液（共10組）。

1.2.3.3? 對照品溶液的配制。

用電子天平準(zhǔn)確稱取葛根素對照品適量，加入30%乙醇適量配制成80 μg/mL的溶液，則得到對照品溶液（1組）。

1.2.3.4? 葛根素含量測定。

依據(jù)《中國藥典》，不同產(chǎn)地煨葛根樣品中的葛根素含量采用高效液相色譜法［8-9］進(jìn)行測定。

精密吸取各供試品溶液10 μL、對照品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，按“1.2.3.1”色譜條件，以葛根素對照品作為參照物，測定10批樣品，確定1個(gè)特征峰。

1.2.3.5? 精密度試驗(yàn)。

精密吸取葛根素對照品溶液（即80 μg/mL），按照“1.2.3.1”色譜條件進(jìn)樣10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定葛根素的峰面積。

1.2.3.6? 重現(xiàn)性試驗(yàn)。

取煨葛根藥材樣品粉末（編號YP-WGG-01-001），過3號篩，取約0.1 g，共5份，分別加入50 mL 30%乙醇，加熱回流30 min，加入30%乙醇補(bǔ)足損失的重量，振蕩至均勻，取續(xù)濾液作為供試品溶液。用高效液相色譜儀測定其葛根素特征峰的峰面積。

1.2.3.7? 線性關(guān)系考察。

取葛根素對照品溶液（即80 μg/mL）1、2、3、4、5、6 mL于10 mL容量瓶中定容至10 mL，即濃度分別為8、16、24、32、40、48 μg/mL。將葛根素對照品溶液10 μL注入液相色譜儀，按照“1.2.3.1”色譜條件測定峰面積，以峰面積值取lg為底的對數(shù)值為縱坐標(biāo)、對照品濃度取lg為底的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 不同產(chǎn)地煨葛根顯微鑒別分析? 顯微鑒別試驗(yàn)結(jié)果（圖1～10）顯示，不同產(chǎn)地煨葛根樣品中，煨葛根粉末顏色均為淡棕色，均含有淀粉粒和具緣紋孔導(dǎo)管等典型的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。該試驗(yàn)結(jié)果與《中華人民共和國藥典：中藥材顯微鑒別彩色圖鑒》［10］上葛根藥材的相關(guān)顯微圖片相比對，鑒定所做試驗(yàn)樣品的藥材為煨葛根藥材。

2.2? 不同產(chǎn)地煨葛根薄層色譜鑒別

按照“1.2.2.4”方法操作，得到薄層色譜圖（圖11）。由圖11可知，供試品（即3個(gè)產(chǎn)地的煨葛根藥材樣品）色譜中，在與葛根對照藥材色譜以及葛根素對照品色譜兩者相對應(yīng)的位置上，顯現(xiàn)了相同顏色的熒光條斑。各個(gè)斑點(diǎn)的分離效果均較好，亮點(diǎn)突出可見。說明試驗(yàn)樣品的各煨葛根藥材中均含有葛根有效成分葛根素。

2.3? 不同產(chǎn)地煨葛根的含量測定

2.3.1? 精密度試驗(yàn)。按照“1.2.3.5”方法操作，得出5組樣品中葛根素含量峰面積分別為2 454.609、2 473.996、2 474.793、2 479.427、2 482.747 mAU·min，平均峰面積為2 473.114 mAU·min，標(biāo)準(zhǔn)偏差為9.785 mAU·min，葛根素的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.40%，說明系統(tǒng)隨機(jī)誤差比較低，精密度良好，試驗(yàn)過程中所用的高效液相色譜儀測量數(shù)值相對來說較為穩(wěn)定。

2.3.2? 重現(xiàn)性試驗(yàn)。

按照“1.2.3.6”方法操作，試驗(yàn)表明（表3），葛根素的平均峰面積為4 056.958 mAU·min，標(biāo)準(zhǔn)偏差為42.042 mAU·min，煨葛根藥材樣品的RSD為1.04%，小于《中國藥典》中所規(guī)定的數(shù)值（2.0%），說明重現(xiàn)性良好。

2.3.3? 線性關(guān)系考察。按照“1.2.3.7”方法操作，試驗(yàn)結(jié)果見圖12。由圖12可知，葛根素的回歸方程為y=0.921 1x+1.616 4（R2= 0.995 3），表明葛根素在8～48 μg/mL呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.3.4? 含量比較分析。

利用各煨葛根樣品藥材測定的峰面積相關(guān)數(shù)據(jù)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.921 1x+1.616 4具體求得各煨葛根樣品藥材中含有葛根素的量，結(jié)果見表4。由表4可知，所試驗(yàn)的樣品中，四川產(chǎn)地煨葛根藥材YP-WGG-01-001～004中葛根素含量分別為7.20%、6.30%、6.34%、4.76%，安徽產(chǎn)地煨葛根藥材YP-WGG-01-005～007中葛根素含量分別為0.15%、0.16%、0.17%，湖北產(chǎn)地煨葛根藥材YP-WGG-01-008～010中葛根素含量分別為2.84%、3.14%、2.63%。試驗(yàn)結(jié)果表明，煨葛根中有效成分葛根素的含量與地域是存在聯(lián)系的，不同產(chǎn)地的煨葛根中葛根素的含量有差異。

3? 結(jié)論

該研究對四川、安徽、湖北3個(gè)產(chǎn)地的煨葛根藥材進(jìn)行

鑒定及含量比較，3個(gè)產(chǎn)地煨葛根中均含有葛根素，四川產(chǎn)地

樣品藥材葛根素含量優(yōu)于安徽和湖北產(chǎn)地。但均符合《中國藥典》中規(guī)定藥材中所含有葛根素的量不得少于2.4%的標(biāo)準(zhǔn)。葛根素的含量是與產(chǎn)地有明顯關(guān)系的。該研究為煨葛根藥材研究提供了一定的數(shù)據(jù)參考，也為評價(jià)臨床上葛根的藥物療效質(zhì)量提供了一個(gè)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

［1］

高立新.中藥炮制的煨法［J］.咸寧學(xué)院學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2009，23（1）：7.

［2］ 裘維瀚，戴輝，胡泓，等.葛根煨制前后成分的比較研究［J］.中成藥，2013，35（10）：2213-2217.

［3］ 王黎，高蘇亞，李華.不同產(chǎn)地葛根的HPLC指紋圖譜及質(zhì)量評價(jià)研究［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（18）：10782-10784，10801.

［4］ 段海燕，程銘恩，彭華勝，等.野葛塊根的異常結(jié)構(gòu)解剖學(xué)研究［J］.中國中藥雜志，2015，40（22）：4364-4369.

［5］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020.

［6］ 中藥檢驗(yàn)技術(shù)綜述［J］.生命科學(xué)儀器，2003（Z1）：19-21.

［7］ 鄧哲，荊文光，劉安．薄層色譜法在當(dāng)前中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的應(yīng)用探討［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2019，25（7）：201-206.

［8］ 馮景春，王芹，馮開.高效液相色譜法的應(yīng)用與發(fā)展前景［J］.廣東化工，2014，41（12）：192，174.

［9］ 孫會敏，田頌九.高效液相色譜法簡介及其在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用［J］.齊魯藥事，2011，30（1）：38-42.

［10］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：中藥材顯微鑒別彩色圖鑒［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2009.