大米免疫活性肽在小鼠體內(nèi)的作用機(jī)制

文詩雨

張芷萌1

吳 昊1

謝雨菲1

黃慶明2

廖 娟2

文 李1

(1. 長沙理工大學(xué)食品與生物工程學(xué)院,湖南 長沙 410014;2. 湖南助農(nóng)米業(yè)有限公司,湖南 益陽 413200)

生物活性肽可為機(jī)體提供基本營養(yǎng),還具備多種有益于人體健康的生物學(xué)功能,因此可以通過調(diào)節(jié)和改善生理功能來抑制慢性疾病[1]。來自于食物蛋白的生物活性肽是一類經(jīng)蛋白酶水解及分離純化后、具有特殊生物活性的多肽,其氨基酸殘基數(shù)目不等且相對(duì)分子質(zhì)量一般較小,由2～20個(gè)氨基酸組成[2]。研究[3-4]表明,食物源生物活性肽具有顯著高血壓抑制、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、降血糖血脂、降人體總脂蛋白膽固醇、抗腫瘤、體外抗菌、識(shí)別體外免疫異常細(xì)胞、抗疲勞、改善提高人體骨代謝和神經(jīng)活性調(diào)節(jié)能力等多種功能特性。

中國是水稻種植和消費(fèi)大國,其中湖南省為水稻種植大省。精白米加工會(huì)產(chǎn)生大量副產(chǎn)物——米糠,其中仍含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì),但在實(shí)踐中的利用率極低。國內(nèi)外對(duì)免疫活性肽的研究主要集中在大豆肽和一些動(dòng)物源肽,而有關(guān)植物肽——大米源生物活性肽的報(bào)道較少。大米胰蛋白酶解物可從蛋白及mRNA水平抑制RAW264.7細(xì)胞的炎癥因子表達(dá),通過阻礙p65入核及ERK的磷酸化,分別影響巨噬細(xì)胞的NF-κB及MAPK炎癥通路,從而實(shí)現(xiàn)抗炎作用顯示出免疫活性[5-6]。有研究[7]表明,通過計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法可進(jìn)行免疫活性成分的篩選。將先進(jìn)的組學(xué)技術(shù)與生物信息學(xué)分析相結(jié)合,有望闡明肽在體內(nèi)的新作用途徑[8]。研究擬在前期以大米源免疫活性肽GBP1細(xì)胞試驗(yàn)研究[5]的基礎(chǔ)上,深入探討GBP1進(jìn)入小鼠體內(nèi)后對(duì)小鼠體重、血清中細(xì)胞因子(IL-2、TNF-α、IFN-γ)、脾細(xì)胞增殖數(shù)和臟器系數(shù)的影響,并對(duì)免疫器官胸腺和脾臟的病理切片進(jìn)行分析;利用RNA-Seq在基因轉(zhuǎn)錄組水平上分析大米源免疫活性肽GBP1對(duì)小鼠機(jī)體基因表達(dá)水平的影響,以期為大米源免疫活性肽在臨床上的應(yīng)用提供理論及研究基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑

1.1.1 材料

合成大米肽GBP1:肽序NSVFRALPVDVVANAYR,合肥賽曼諾生物科技有限公司;

免疫低下型SPF級(jí)雄性Balb/c小鼠:20只,體重18.6～22.2 g,湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。

1.1.2 試劑

0.9%氯化鈉注射液:湖南康源制藥有限公司;

胎牛血清(FBS):浙江天杭生物科技有限公司;

刀豆蛋白A(Con A):分析純,德國默克公司;

噻唑藍(lán)(MTT)細(xì)胞活力及毒性測(cè)試試劑盒:上海碧云天生物技術(shù)有限公司;

二甲亞砜:99.8%,北京蘭杰柯科技有限公司;

白細(xì)胞介素-2(IL-2)、γ干擾素(IFN-γ)、α腫瘤壞死因子(TNF-α)、免疫球蛋白G(IgG)酶聯(lián)免疫試劑盒:江蘇酶免生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

電子天平:ME2002E/02型,梅特勒—托利多儀器有限公司;

生物顯微鏡:B203LED型,重慶奧特光學(xué)儀器有限公司;

石蠟切片機(jī):RM2235型,德國Leica公司;

全自動(dòng)脫水機(jī):TP1020型,德國Leica公司;

攤片機(jī):HI1210型,德國Leica公司;

組織包埋機(jī):EG1150H+C型,德國Leica公司;

病理成像系統(tǒng):DFC 420C型,德國Leica公司;

壓力蒸汽滅菌器:BKQ-B75L型,山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司;

生物安全柜:BSCIIB2-1101型,山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司;

高速冷凍離心機(jī):Centrifuge 5418R型,德國Eppendorf公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選取免疫低下型SPF級(jí)Balb/c小鼠20只,雌雄各半,體重18.6～22.2 g,根據(jù)性別、體重隨機(jī)分為4組,分別為GBP1肽灌胃低、中、高劑量組(25,50,100 mg/kg)和對(duì)照組,每組5只,對(duì)照組灌胃純水,給藥量為20 mL/kg,每天給藥1次,連續(xù)給藥21 d。觀察給藥期間是否出現(xiàn)動(dòng)物死亡,按式(1)計(jì)算各組死亡率。解剖取血、脾臟、腸系膜淋巴結(jié)、胸腺、肝臟、腎臟,稱重相應(yīng)臟器并按式(2)計(jì)算免疫器官指數(shù)。

(1)

(2)

式中:

D——死亡率,%;

C1——每組動(dòng)物死亡數(shù)量,只;

C2——每組動(dòng)物數(shù)量,只;

R1——免疫器官指數(shù),mg/kg;

m1——器官質(zhì)量,mg;

m2——體重,kg。

1.3.2 GBP1肽對(duì)小鼠脾細(xì)胞的增殖作用 采用MTT法檢測(cè)脾細(xì)胞增殖。使用RPMI-1640磨碎脾組織,過200目細(xì)胞篩網(wǎng)。使用紅細(xì)胞裂解緩沖液清除紅細(xì)胞,離心,加入10% FBS至RPMI-1640中,重懸細(xì)胞濃度為1×107個(gè)/mL。將脾細(xì)胞(106個(gè)/孔)接種于96孔板上,每孔加入含ConA(12.5 μg/mL)或不含Con A(作為對(duì)照)的培養(yǎng)基培養(yǎng)72 h,每孔加入20 μL MTT(5 mg/mL)再培養(yǎng)4 h,棄培養(yǎng)液,每孔加入二甲亞砜,用分光光度計(jì)測(cè)定570 nm處吸光值,并按式(3)計(jì)算刺激增殖指數(shù)。

(3)

式中:

R2——脾細(xì)胞增殖指數(shù),%;

A1——加入ConA培養(yǎng)后的吸光值;

A0——不含ConA培養(yǎng)后的吸光值。

1.3.3 GBP1肽對(duì)小鼠細(xì)胞因子釋放及免疫球蛋白分泌情況的影響 末次給藥24 h后取眼球采血,4 ℃、3 000 r/min離心10 min取血清,對(duì)血清樣本進(jìn)行細(xì)胞因子分析。在相同稀釋液中制備細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋液,將對(duì)照品、標(biāo)準(zhǔn)品和血清樣品添加至ELISA試劑盒孔中,并根據(jù)ELISA試劑盒說明書測(cè)定IL-2、IFN-γ、TNF-α及免疫球蛋白IgG水平。

1.3.4 GBP1肽對(duì)小鼠組織病理的影響 末次給藥2 h后,在深度麻醉下處死每個(gè)治療組的一只小鼠。取小鼠的胸腺、脾臟組織,用4%福爾馬林固定24 h,石蠟包埋,采用蘇木精—伊紅對(duì)組織切片進(jìn)行染色,并使用生物顯微鏡觀察。

1.3.5 轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析 采用酚/氯仿法,分別從對(duì)照組和GBP1肽處理組小鼠的脾臟中提取RNA,在濃度與完整性檢測(cè)前對(duì)提取的Total RNA按一定比例進(jìn)行稀釋。利用微量分光光度計(jì)檢測(cè)RNA純度,Agilent 2100 Bioanalyzer和Agilent RNA 6000 Nano Kit檢測(cè)RNA濃度與完整性;基于UHPLC-MS/MS和聯(lián)合測(cè)序平臺(tái),進(jìn)行全面轉(zhuǎn)錄組分析;并委托武漢希望組生物科技有限公司進(jìn)行測(cè)定。

1.3.6 差異表達(dá)基因功能富集分析

(1) GO富集:GO的基本單位是term(詞條、節(jié)點(diǎn)),富集性分析首先需把所有差異表達(dá)基因映射到Gene Ontology數(shù)據(jù)庫(http://www.geneontology.org/)的各個(gè)term上,篩選出與參考基因組相比樣本差異表達(dá)基因中顯著富集的GO條目。將閾值Qvalue≤0.05的GO term定義為在差異表達(dá)基因中顯著富集的GO term,通過GO功能的顯著富集分析確定差異表達(dá)基因所執(zhí)行的主要生物學(xué)功能。

(2) KEGG富集:通過KEGG數(shù)據(jù)庫可以在基因水平上對(duì)生物學(xué)上的復(fù)雜行為進(jìn)行深入研究,經(jīng)多重校驗(yàn)后,篩選出滿足Qvalue≤0.05條件的Pathway即為在差異表達(dá)轉(zhuǎn)錄本中顯著富集的Pathway。

(3) 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析:使用SPSS 22.0軟件進(jìn)行差異顯著性分析和相關(guān)性分析,其中*表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≤0.05),**表示非常顯著性意義(P≤0.01),結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。采用IBM SPSS Statistics 22、Origin 9.0、Cytoscape軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析及繪圖。

2 結(jié)果與討論

2.1 GBP1肽對(duì)小鼠的影響

2.1.1 對(duì)小鼠機(jī)體的影響 體重變化是反映機(jī)體健康狀態(tài)的一個(gè)重要指標(biāo),通常免疫力低下都會(huì)伴隨著體重下降[9]。由圖1(a)可知,肽處理前,各組小鼠體重隨時(shí)間延長不斷增加。經(jīng)灌胃遞送GBP1肽后,各組小鼠相對(duì)體重均上漲。灌胃第7天,肽處理組小鼠體重顯著上升,對(duì)小鼠機(jī)體有良性影響,因此GBP1肽處理組符合對(duì)照組體重增長趨勢(shì),尤其是50 mg/kg肽處理組的體重值出現(xiàn)極顯著增加。

圖1 GBP1肽對(duì)小鼠機(jī)體的影響

體外培養(yǎng)T細(xì)胞時(shí),受到植物血凝素或特異性抗原刺激后,可出現(xiàn)細(xì)胞體積增大,代謝旺盛,蛋白和核酸合成增加并能進(jìn)行分裂,成為淋巴母細(xì)胞,因此淋巴細(xì)胞增殖率的高低可以反映機(jī)體細(xì)胞免疫水平,可作為測(cè)定機(jī)體免疫功能的指標(biāo)之一,正常脾淋巴細(xì)胞增殖區(qū)間為3%～5%[10]。由圖1(b)可知,經(jīng)25,50 mg/kg的GBP1肽處理后,小鼠脾細(xì)胞增殖數(shù)趨于正常值水平。

免疫器官臟器系數(shù)的變化能直接反映機(jī)體免疫功能的改變[11],其中脾臟和胸腺是機(jī)體內(nèi)重要的免疫器官,其臟器系數(shù)的變化能夠有效反映機(jī)體免疫狀態(tài)。由圖1(c)可知,與對(duì)照組比較,25 mg/kg的GBP1肽處理組小鼠胸腺臟器系數(shù)和25,50 mg/kg的GBP1肽處理組的肝臟器系數(shù)顯著升高,說明GBP1肽未對(duì)脾臟、腎臟組織產(chǎn)生不良影響。

由圖1(d)可知,經(jīng)肽處理后,小鼠血清中IgG含量穩(wěn)定,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;說明肽處理后機(jī)體的體液免疫功能狀態(tài)良好,未產(chǎn)生不良影響。

2.1.2 對(duì)血清中細(xì)胞因子表達(dá)量的影響 由圖2可知,25 mg/kg的GBP1肽處理對(duì)小鼠機(jī)體產(chǎn)生的促炎因子IL-2、IFN-γ和TNF-α均有抑制作用;50 mg/kg的GBP1肽處理組中小鼠機(jī)體產(chǎn)生的促炎因子IL-2、IFN-γ和TNF-α有上升趨勢(shì),說明低濃度肽對(duì)促炎因子分泌具有良好的抑制作用。

圖2 GBP1肽對(duì)小鼠細(xì)胞因子分泌的影響

2.1.3 對(duì)小鼠胸腺和脾臟組織的影響 小鼠的脾臟、胸腺代表適應(yīng)性免疫器官,在其中維持了免疫穩(wěn)態(tài)的平衡[12]。由圖3可知,與對(duì)照組相比,GBP1肽處理組小鼠的脾臟和胸腺組織切片顯示正常結(jié)構(gòu),形態(tài)清晰,無組織學(xué)改變,表明GBP1肽可以提高正常小鼠的免疫力,不會(huì)對(duì)脾臟、胸腺形態(tài)造成損害,且未對(duì)胸腺、脾臟組織產(chǎn)生病理影響。

從上至下依次為胸腺、脾臟切片;從左至右依次為對(duì)照組、25,50,100 mg/kg GBP1肽處理組

綜上,經(jīng)25 mg/kg的GBP1肽處理后,可以顯著影響小鼠的臟器指數(shù)變化、脾臟細(xì)胞增殖及炎癥因子的分泌,且對(duì)臟器無損害。因此,進(jìn)一步對(duì)25 mg/kg的GBP1肽處理的小鼠脾臟組織進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析。

2.2 小鼠脾臟組織轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析

2.2.1 過濾后的Reads質(zhì)量統(tǒng)計(jì) 由表1可知,經(jīng)過濾和比對(duì)后,共獲得299 632 082 Raw Reads,293 293 182 Clean Reads。Clean Reads達(dá)到了Raw Reads的98%,比對(duì)到基因組上的比例均>97%。二代測(cè)序要求Q20的堿基比例>95%,Q30的堿基比例>85%;該測(cè)序中6個(gè)樣品的Q20值均>97%以上,Q30值均>92%,表明每個(gè)樣品的堿基正確識(shí)別率均>90%。

表1 過濾后的 Reads 質(zhì)量統(tǒng)計(jì)

2.2.2 基因表達(dá)水平分析 Reads計(jì)數(shù)除了與基因的真實(shí)表達(dá)水平成正比外,還與基因的長度和測(cè)序深度呈正相關(guān)[13]。每百萬映射讀片段的每千堿基讀數(shù)(FPKM)值可以反映出一個(gè)基因在RNA樣本中的相對(duì)表達(dá)水平大小,FPKM在0.10～3.75 可以認(rèn)為是低豐度表達(dá)水平的基因;FPKM 在3.75～15.00為中等豐富度表達(dá)水平基因;FPKM>15為高豐富度表達(dá)水平基因。利用StringTie[14]軟件對(duì)所有基因表達(dá)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì),結(jié)果見表2。

表2 表達(dá)量統(tǒng)計(jì)表

依據(jù)各樣品的基因表達(dá)量繪制主成分分析圖,樣本的表達(dá)分布及相關(guān)性分析結(jié)果如圖4所示。由圖4可知,對(duì)照組與GBP1處理組分開,各樣本轉(zhuǎn)錄組間差異較大,說明GBP1處理改變了脾臟組織的基因表達(dá)豐度。

圖4 主成分分析圖

2.2.3 差異表達(dá)基因分析 有生物學(xué)重復(fù)的差異表達(dá)基因定義為FoldChange≥2且fdr≤0.05,無生物學(xué)重復(fù)的差異表達(dá)基因定義為FoldChange≥2且fdr≤0.005。由此可得差異基因共780個(gè),其中顯著上調(diào)的差異基因741個(gè),顯著下調(diào)的差異基因39個(gè)。通過兩組轉(zhuǎn)錄本對(duì)比,對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行層次聚類分析,結(jié)果如圖5所示。由圖5可知,經(jīng)GBP1肽處理后的小鼠脾臟組織中上調(diào)基因數(shù)高于下調(diào)基因數(shù)。通過兩組樣本中差異表達(dá)基因分析,GBP1肽可明顯促進(jìn)小鼠脾臟組織中基因的轉(zhuǎn)錄水平。

圖5 差異基因分析圖

2.3 GO和KEGG富集分析

GO富集包括生物過程(BP)、細(xì)胞組分(CC)和分子功能(MF)3部分。由圖6可知,GO分析共富集了219個(gè)條目,其中70個(gè)與生物過程相關(guān),24個(gè)與細(xì)胞成分相關(guān),125個(gè)與分子功能相關(guān)。根據(jù)P值<0.01,選取生物過程、細(xì)胞成分、分子功能富集結(jié)果排名靠前的條目進(jìn)行可視化處理。GBP1處理脾臟組織的差異基因主要參與微管運(yùn)動(dòng)和跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)等生物過程,存在于血紅蛋白的復(fù)合物和質(zhì)膜等細(xì)胞成分,行使微管結(jié)合、調(diào)節(jié)絲氨酸型內(nèi)肽酶活性和微管運(yùn)動(dòng)等分子功能。

a.. 氧氣運(yùn)輸 a2. 基于微管的運(yùn)動(dòng) a3. 跨膜轉(zhuǎn)運(yùn) a4. DNA復(fù)制 a5. DNA修復(fù) a6. 脂蛋白代謝過程 a7. 趨化性 b1. 血紅蛋白復(fù)合物 b2. 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子復(fù)合物 b3. 微管 b4. 質(zhì)膜的組成部分 c1. 氧結(jié)合 c2. 微管結(jié)合 c3. 微管運(yùn)動(dòng)活動(dòng) c4. 蛋白質(zhì)同源二聚化活性 c5. 細(xì)胞骨架的結(jié)構(gòu)成分 c6. 絲氨酸型內(nèi)肽酶活性 BP. 生物過程 CC. 細(xì)胞組分 MF. 分子功能

KEGG分析共富集了217個(gè)信號(hào)通路。根據(jù)P值<0.01,選取前16條通路進(jìn)行可視化處理,主要涉及細(xì)胞周期、鐵死亡、ECM-受體相互作用、p53信號(hào)通路、次生代謝物的生物合成等途徑。這些通路均與免疫、癌癥、細(xì)胞凋亡等息息相關(guān)。其中p53信號(hào)通路是一個(gè)重要的細(xì)胞生存和死亡調(diào)控通路,p53是所有癌癥中最常見的突變蛋白。研究[15]認(rèn)為,活性p53在腫瘤抑制方面具有重要作用。p53信號(hào)通路中所富集到的10個(gè)基因均上調(diào),其中表達(dá)量最高的基因?yàn)镽rm2,該基因編碼核糖核苷酸還原酶,參與核苷酸代謝并催化核苷酸轉(zhuǎn)化為脫氧核苷酸,且該基因與耐藥性、調(diào)節(jié)細(xì)胞死亡和腫瘤免疫有關(guān)[16];另一個(gè)表達(dá)量較高的基因?yàn)榧?xì)胞周期蛋白B2(Ccnb2),該基因是細(xì)胞周期蛋白通路的重要組成部分,在癌癥的發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用[17];鐵死亡通路是一種細(xì)胞死亡形式,具有直接殺死癌細(xì)胞的能力,并具有潛在的抗腫瘤作用,隨著免疫細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境(TME)中的作用不斷增強(qiáng),鐵死亡可能對(duì)免疫細(xì)胞產(chǎn)生額外的影響[18]。鐵死亡信號(hào)通路中所富集到的8個(gè)基因均上調(diào),其中表達(dá)量最高的基因?yàn)門frc,該基因編碼轉(zhuǎn)鐵蛋白受體,該受體表達(dá)廣泛分布于免疫系統(tǒng)、造血系統(tǒng)(如骨髓干細(xì)胞、紅細(xì)胞和白細(xì)胞)、神經(jīng)系統(tǒng)(如神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞)等[19]。補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)是由具有相似結(jié)構(gòu)特征的絲氨酸蛋白酶組成的共同祖先途徑衍生的兩個(gè)進(jìn)化級(jí)聯(lián)反應(yīng),具有綜合和高度復(fù)雜的功能,它們將彼此交織在機(jī)體的全過程中,從而達(dá)到機(jī)體的止血作用和免疫防御作用[20]。補(bǔ)血和凝體級(jí)聯(lián)通路中所富集到的11個(gè)基因均上調(diào),其中表達(dá)量最高的為Itgam,該基因編碼整合素αM鏈,整合素 ITGAM/ITGB2 與單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和粒細(xì)胞的各種黏附相互作用以及介導(dǎo)補(bǔ)體包被顆粒和病原體的攝取有關(guān)[21]。

2.4 GBP1肽對(duì)脾臟組織轉(zhuǎn)錄組信號(hào)通路及差異基因表達(dá)分析

選擇KEGG富集分析中免疫調(diào)節(jié)相關(guān)通路前8條進(jìn)行分析。由表3可知,細(xì)胞周期通路相關(guān)的差異基因?yàn)?0個(gè),與鐵死亡通路相關(guān)的差異基因?yàn)?個(gè),ECM-受體相互作用通路相關(guān)的差異基因?yàn)?1個(gè),次生代謝物的生物合成通路相關(guān)的差異基因?yàn)?2個(gè),p53信號(hào)通路相關(guān)的差異基因?yàn)?0個(gè),補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)通路相關(guān)的差異基因?yàn)?1個(gè),谷胱甘肽代謝通路相關(guān)的差異基因?yàn)?個(gè),細(xì)胞衰老通路相關(guān)的差異基因?yàn)?5個(gè)。

表3 差異基因與免疫調(diào)節(jié)相關(guān)的KEGG途徑

結(jié)合GO和KEGG富集結(jié)果,與免疫調(diào)節(jié)密切相關(guān)的有鐵死亡通路、p53信號(hào)通路、補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)3條通路,包含相關(guān)的差異基因有28個(gè)(表4),且均為上調(diào)基因。

表4 脾臟組織的差異基因及差異表達(dá)水平分析

2.5 差異基因互作網(wǎng)絡(luò)分析

利用String網(wǎng)站分析得到總的差異基因的互作網(wǎng)絡(luò),如圖7所示。為明確與免疫調(diào)節(jié)相關(guān)通路的關(guān)鍵基因,選擇KEGG富集分析中免疫調(diào)節(jié)相關(guān)通路前8條及其相關(guān)基因?qū)隒ytoscape軟件,分析得到關(guān)鍵基因互作網(wǎng)絡(luò)圖。

圖7 免疫相關(guān)關(guān)鍵基因互作網(wǎng)絡(luò)圖

通過比較介數(shù)中心度(betweenness centrality),篩選出與免疫調(diào)節(jié)相關(guān)的基因包括Rrm2、Thbs1、Tfrc、Itgam、Ccnb1、Cdk1等。Thbs1基因編碼血小板凝血酶蛋白-1,其是近年來腫瘤領(lǐng)域研究的熱門靶點(diǎn)基因[22];Ccnb1基因編碼細(xì)胞周期蛋白B1,該基因編碼周期蛋白依賴性激酶1,且Ccnb1、Cdk1和Ccnb2與肝癌細(xì)胞的免疫浸潤相關(guān)[21]。這些關(guān)鍵基因,均與腫瘤、癌癥、炎癥等免疫調(diào)節(jié)有關(guān)。

3 結(jié)論

研究考察了大米源免疫活性肽GBP1肽小鼠機(jī)體發(fā)揮的免疫調(diào)節(jié)作用,并從轉(zhuǎn)錄組水平分析了免疫活性肽對(duì)小鼠發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的機(jī)制。結(jié)果表明,大米源免疫活性肽GBP1肽處理后的小鼠體重整體呈上升趨勢(shì),25 mg/kg的GBP1肽處理組小鼠肝臟器系數(shù)升高,50 mg/kg的GBP1肽處理組小鼠胸腺、肝臟器系數(shù)升高,低濃度肽組對(duì)促炎因子分泌具有良好的抑制作用,肽處理組脾淋巴細(xì)胞體外增殖能力無明顯變化,免疫球蛋白IgG水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。經(jīng)GO功能富集和KEGG通路富集,發(fā)現(xiàn)GBP1肽與p53信號(hào)通路、鐵死亡、補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)等免疫調(diào)節(jié)通路相關(guān);通過分析免疫相關(guān)通路的基因表達(dá)量以及構(gòu)建關(guān)鍵基因互作網(wǎng)絡(luò),預(yù)測(cè)與腫瘤、癌癥、免疫調(diào)節(jié)等相關(guān)的關(guān)鍵基因包括Rrm2、Ccnb2、Thbs1、Tfrc、Itgam、Ccnb1和Cdk1等。研究主要考察了免疫活性肽GBP1肽小鼠機(jī)體發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用,從轉(zhuǎn)錄組水平出發(fā)分析了免疫活性肽對(duì)在小鼠發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的機(jī)制,這為未來更進(jìn)一步研究GBP1肽的免疫活性及作用機(jī)制提供了相關(guān)的研究路線。后續(xù)可對(duì)GBP1肽進(jìn)行人群試驗(yàn)以探討其在人體內(nèi)的作用機(jī)制。