牛巴氏桿菌病的實(shí)驗(yàn)室診斷與防控措施有效總結(jié)

陳秀娟

牛巴氏桿菌病又稱牛出血性敗血病，是由多殺性巴氏桿菌引起的一種急性、熱性、敗血性傳染病。當(dāng)前基層地區(qū)的很多養(yǎng)殖戶對巴氏桿菌病所造成的危害認(rèn)知不足，并沒有掌握該種疾病的發(fā)生流行特點(diǎn)，疾病診斷不合理，藥物使用不規(guī)范，錯過了最佳的防治時機(jī)，針對這一現(xiàn)狀就需要不斷加強(qiáng)防治工作經(jīng)驗(yàn)的有效總結(jié)，明確巴氏桿菌病的防治要點(diǎn)，確保早發(fā)現(xiàn)早處理，在短時間內(nèi)控制病情，避免造成更為嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

一、流行病學(xué)

1、病原特征

牛巴氏桿菌在顯微鏡下呈桿狀，大小約為0.5～1.0μm×2～3μm。菌體革蘭氏染色陰性，菌體兩端鈍圓。在普通培養(yǎng)基上，菌落呈灰色、濕潤、邊緣不整。巴氏桿菌具有較強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)性，能夠在多種環(huán)境中生存和繁殖。該菌對溫度、濕度、光照等條件具有較強(qiáng)的耐受性。在自然環(huán)境中，巴氏桿菌可以在牛的呼吸道、消化道、泌尿生殖道等部位生存。此外，該菌對干燥、低溫、高鹽等惡劣環(huán)境的抵抗力較強(qiáng)。該種病原對理化因素具有一定的抵抗力。例如，在60℃加熱30分鐘內(nèi)，對該菌有殺滅作用；但在60℃加熱1小時以上，可有效滅活。巴氏桿菌對酸堿敏感，pH值4.5～6.5時生長最適宜。此外，該菌對許多抗生素敏感，如青霉素、鏈霉素、慶大霉素等。

2、致病機(jī)理

巴氏桿菌首先通過消化道黏膜或皮膚傷口進(jìn)入牛體內(nèi)。在消化道黏膜感染中，巴氏桿菌通過粘附和侵入黏膜表面的細(xì)胞，進(jìn)入淋巴和血液系統(tǒng)。在皮膚感染中，巴氏桿菌侵入傷口或毛囊，通過淋巴道或血液傳播到其他部位。巴氏桿菌產(chǎn)生多種毒力因子。毒素由三個組分組成：保護(hù)性抗原、致溶素和水腫因子。毒素通過PA與細(xì)胞表面的受體結(jié)合，形成毒素復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，LF和EF則發(fā)揮其毒性作用。LF破壞細(xì)胞信號傳導(dǎo)，導(dǎo)致細(xì)胞死亡，EF則增加細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷酸腺苷水平，引起水腫和組織損傷。巴氏桿菌特別喜歡富含氧氣的環(huán)境，它在體內(nèi)定居于脾臟。一旦巴氏桿菌感染，它會產(chǎn)生大量毒素，破壞脾臟的結(jié)構(gòu)和功能。這導(dǎo)致脾臟腫大、出血和壞死，進(jìn)而影響免疫功能。另外，巴氏桿菌感染引發(fā)免疫反應(yīng)，包括炎癥反應(yīng)和免疫細(xì)胞的活化。炎癥反應(yīng)導(dǎo)致局部組織炎癥、水腫和壞死。免疫細(xì)胞的活化會釋放多種細(xì)胞因子，增強(qiáng)炎癥反應(yīng)，但也可能導(dǎo)致組織損傷。

3、流行特點(diǎn)

牛巴氏桿菌病的傳染源主要是患病牛和帶菌牛。病牛在發(fā)病期間，其分泌物、排泄物、血液等均含有大量病原體，可通過直接或間接接觸傳播給易感牛。帶菌牛在無明顯癥狀的情況下，仍可傳播病原體。病原的傳播途徑主要有直接接觸傳播、飛沫傳播和間接接觸傳播。直接接觸傳播是指病牛與易感牛直接接觸，導(dǎo)致病原體傳播。飛沫傳播是指病牛在咳嗽、打噴嚏、流涕等過程中，將病原體傳播給易感牛。間接接觸傳播是指病原體通過環(huán)境、用具、飼料等媒介傳播給易感牛。巴氏桿菌主要侵害牛，尤其是幼牛和抵抗力較低的牛。此外，水牛對該病的易感性較高。人工接種可導(dǎo)致其他動物感染，如貓、狗等。該種疾病一年四季均可發(fā)生，但以春、夏、秋三季較為多見。牛巴氏桿菌病的發(fā)病原因主要包括易感牛接觸到傳染源，感染病原體。牛只因營養(yǎng)不良、疾病、應(yīng)激等因素導(dǎo)致免疫力下降，容易感染病原體。如飼養(yǎng)密度過大、衛(wèi)生條件差、氣候惡劣等，也可能導(dǎo)致牛巴氏桿菌病的流行。

二、臨床癥狀

牛巴氏桿菌病的潛伏期通常為2～5天，但也有短至1天或長達(dá)7天的情況。潛伏期內(nèi)，病?？赡軣o明顯癥狀，但已具有傳染性。牛巴氏桿菌病的發(fā)病癥狀可分為敗血型、浮腫型和肺炎型三種類型。敗血型病牛體溫升高至41～42℃，精神萎頓、食欲不振、心跳加快。病程較短，常在24小時內(nèi)死亡。肺炎型最常見。病牛的脖子、胸部發(fā)生浮腫，造成呼吸困難，皮膚發(fā)紫，舌頭外翻，流淚，流涎，有痛性干咳，鼻流出無色或帶血泡沫。除呈現(xiàn)上述全身癥狀外，在咽喉、頸部皮下出現(xiàn)迅速擴(kuò)展的水腫，最初發(fā)熱，疼痛，堅硬，之后逐漸變冷，疼痛減輕，患畜呼吸高度困難，皮膚黏膜發(fā)紺。有的病牛在發(fā)病過程中，還可能出現(xiàn)眼結(jié)膜充血、出血，黃疸，水腫等癥狀。

三、病理學(xué)變化

敗血型病理組織學(xué)變化主要表現(xiàn)為廣泛性的出血。內(nèi)臟器官如心、肝、脾、肺、腎等出現(xiàn)明顯出血，尤以肺部和淋巴結(jié)出血嚴(yán)重。肺泡壁變薄，充滿血液，肺間質(zhì)水腫。心臟擴(kuò)張，心內(nèi)膜出血。淋巴結(jié)水腫、出血。浮腫型病理組織學(xué)變化主要表現(xiàn)為皮下組織和淋巴結(jié)水腫。皮下組織水腫，內(nèi)有大量炎性細(xì)胞浸潤。淋巴結(jié)水腫，濾泡破裂，細(xì)胞浸潤。此外，咽喉和肺部的病理變化與敗血型相似。肺炎型病理組織學(xué)變化主要表現(xiàn)為肺部炎癥。肺泡壁增厚，內(nèi)有炎癥細(xì)胞浸潤。肺泡腔內(nèi)有纖維蛋白血栓形成。支氣管和細(xì)支氣管內(nèi)有大量炎癥細(xì)胞和膿性分泌物。胸膜黏連，胸腔內(nèi)有纖維素性滲出物。

四、實(shí)驗(yàn)室診斷

1、涂片染色

從病牛的病變部位（如肺部、淋巴結(jié)、心血等）采集病料。采集時，應(yīng)盡量確保樣品的純凈，避免雜菌污染。將采集的病料放入無菌容器中，盡快送檢。將病料涂抹在載玻片上，涂抹均勻，厚度適中。隨后，將涂片放入酒精燈火焰中，進(jìn)行固定。固定后的涂片應(yīng)避免干燥，以免影響后續(xù)染色效果。將固定好的涂片放入革蘭氏染色液中。首先，將涂片放入稀碘液中，浸泡約30秒，然后用無菌水沖洗，以便去除多余的碘液。然后將涂片放入醇溶液中，浸泡約15秒，然后用無菌水沖洗，以固定菌體。涂片放入革蘭氏碘液中，浸泡約30秒，用無菌水沖洗。將涂片放入95%乙醇溶液中，浸泡約10秒，用無菌水沖洗，去除多余的乙醇。將染色后的涂片放入顯微鏡下，觀察細(xì)菌的形態(tài)和染色特征。多殺性巴氏桿菌為革蘭氏陰性桿菌，形態(tài)多為桿狀，兩端鈍圓。在染色鏡檢中，注意觀察菌體形態(tài)、排列和染色深度等特點(diǎn)，以判斷細(xì)菌的純度和活力。在革蘭氏染色鏡檢中，若觀察到大量呈藍(lán)紫色的革蘭氏陰性桿菌，可以初步判斷為牛巴氏桿菌病。為進(jìn)一步確認(rèn)，可以進(jìn)行純培養(yǎng)和生化試驗(yàn)等檢測。

2、病原分離培養(yǎng)

將從病牛病變部位（如肺部、淋巴結(jié)、心血等）采集的病料放入無菌容器中，盡快送檢。在實(shí)驗(yàn)室中，將病料進(jìn)行梯度稀釋，以便進(jìn)行后續(xù)的接種培養(yǎng)。將稀釋后的病料接種到適宜的培養(yǎng)基上，如血平板培養(yǎng)基、麥康凱平板培養(yǎng)基等。接種時，應(yīng)盡量確保菌液均勻分布，避免產(chǎn)生接種環(huán)。將接種好的培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中，37℃恒溫培養(yǎng)18～24小時。在培養(yǎng)過程中，注意觀察培養(yǎng)基上菌落的生長情況。培養(yǎng)結(jié)束后，觀察菌落形態(tài)特征，如顏色、形狀、邊緣、光澤等。多殺性巴氏桿菌在血平板培養(yǎng)基上形成的菌落呈灰色或白色，表面光滑，邊緣整齊。在麥康凱平板培養(yǎng)基上，菌落呈紅色，表面光滑。將具有典型菌落形態(tài)的菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)，進(jìn)一步觀察其生長特性。純化后的菌落應(yīng)具有相同的形態(tài)特征，以保證菌種的純度。對純化培養(yǎng)得到的菌落進(jìn)行生化試驗(yàn)，如氧化酶試驗(yàn)、氣泡試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)等。多殺性巴氏桿菌生化試驗(yàn)結(jié)果為：氧化酶陽性、氣泡陽性、硫化氫陰性。根據(jù)菌落形態(tài)、生化試驗(yàn)結(jié)果等特征，對分離得到的菌株進(jìn)行鑒定。多殺性巴氏桿菌的菌落呈灰色或白色，表面光滑，邊緣整齊；生化試驗(yàn)結(jié)果為氧化酶陽性、氣泡陽性、硫化氫陰性。

五、治療措施

牛巴氏桿菌病治療中，磺胺類藥物作為一種抗菌藥物，具有一定的療效。推薦使用磺胺間甲氧嘧啶，使用劑量為70～100mg/體重kg，每天2次，肌肉注射。或者使用磺胺嘧啶，使用劑量為50～70mg/體重kg，每天3次，口服?；蛘呤褂没前范籽踵奏ぃ褂脛┝繛?0～70mg/體重kg，每天2～3次，肌肉注射?；前奉愃幬锶菀滓鸾Y(jié)晶尿和腎損害，因此需密切觀察病牛的尿量和腎功能。為預(yù)防尿酸鹽沉積，在應(yīng)用磺胺類藥物進(jìn)行治療的同時，搭配使用5%的碳酸氫鈉注射液，每頭牛使用200～300mL，每天使用1次，連續(xù)使用2～3天。

六、預(yù)防措施

1、加強(qiáng)疫苗免疫接種

目前我國使用的牛巴氏桿菌病疫苗主要有牛巴氏桿菌病氫氧化鋁膠疫苗和牛巴氏桿菌病滅活疫苗?？筛鶕?jù)當(dāng)?shù)匾卟×餍星闆r和疫苗供應(yīng)情況選擇合適的疫苗。對于未接種過牛巴氏桿菌病疫苗的牛只，首次免疫應(yīng)在6～8周齡進(jìn)行，使用劑量為每頭牛4mL（體重100kg以下）或6mL（體重100kg以上），皮下或肌內(nèi)注射。在首次免疫的基礎(chǔ)上，每隔6個月進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫，使用劑量與首次免疫相同。對于妊娠后期的母牛，應(yīng)在產(chǎn)前2～3個月進(jìn)行一次免疫，以提高母牛的免疫力和減少犢牛感染的風(fēng)險。在免疫接種過程中要注意疫苗應(yīng)在有效期內(nèi)使用，并嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。免疫接種前后10天內(nèi)，避免使用抗生素、抗病毒藥物等可能影響免疫效果的藥物。對于已感染牛巴氏桿菌病的牛只，應(yīng)在治愈后進(jìn)行免疫接種，以提高其免疫力。在長途運(yùn)輸前，應(yīng)隨時加強(qiáng)免疫1次，以降低運(yùn)輸過程中的感染風(fēng)險。在免疫接種后21天，對牛只進(jìn)行血清學(xué)檢測，觀察抗體水平是否達(dá)到保護(hù)水平。如抗體水平不足，應(yīng)考慮進(jìn)行補(bǔ)免。

2、加強(qiáng)引種管理和飼養(yǎng)隔離

①引種檢疫

牛引種檢疫是指對從外地引入的牛只進(jìn)行疫病檢查和監(jiān)測，以確保引入的牛只不會傳播疫病，保障養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。在我國，牛引種檢疫需執(zhí)行《動物防疫法》、《動物檢疫管理辦法》、《畜禽遺傳資源進(jìn)出境檢疫管理辦法》。引入牛只的養(yǎng)殖場（戶）應(yīng)在引進(jìn)前向所在地縣級動物衛(wèi)生監(jiān)督所申報，并提供以下資料：養(yǎng)殖場（戶）資質(zhì)證明、引進(jìn)牛只來源地動物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)出具的檢疫合格證明、動物疫病檢測報告等?？h級動物衛(wèi)生監(jiān)督所收到申報資料后，對申報材料進(jìn)行審核。審核合格后，發(fā)放《動物檢疫合格證明》。檢疫人員對引進(jìn)的牛只進(jìn)行現(xiàn)場檢疫，檢查牛只的健康狀況、標(biāo)識是否符合要求、相關(guān)疫病檢測結(jié)果等。檢疫合格的牛只，檢疫人員會在《動物檢疫合格證明》上簽字蓋章。對于檢疫不合格的牛只，檢疫人員會依法進(jìn)行處理，如隔離、撲殺、無害化處理等。同時，對引進(jìn)牛只的養(yǎng)殖場（戶）進(jìn)行監(jiān)管，確保疫病不擴(kuò)散。檢疫人員應(yīng)對檢疫過程進(jìn)行記錄，建立檢疫檔案，包括檢疫申報資料、檢疫記錄、檢疫結(jié)果等。

②強(qiáng)優(yōu)到場隔離觀察

引種牛群到場隔離觀察制度是為了確保引入的牛只健康無病，防止疫病傳播，保障養(yǎng)殖場的安全。選擇距離養(yǎng)殖場主產(chǎn)區(qū)較遠(yuǎn)、地勢較高、排水良好、交通便利的場地作為隔離場地。隔離場地應(yīng)具備一定的規(guī)模，能夠滿足引入牛只的飼養(yǎng)需求。提前對隔離場地進(jìn)行消毒處理，確保環(huán)境衛(wèi)生。引種牛群到場后，應(yīng)進(jìn)行至少1個月的隔離觀察。在隔離觀察期間，密切監(jiān)測牛只的健康狀況，包括體溫、食欲、精神狀況、排泄情況等。在隔離觀察期間，對牛只進(jìn)行疫病檢疫，包括巴氏桿菌病等。如有必要，可進(jìn)行血清學(xué)檢測或PCR檢測，確保牛只健康。根據(jù)當(dāng)?shù)匾卟×餍星闆r和牛只健康狀況，制定疫苗接種計劃。在疫苗接種后，觀察牛只的免疫反應(yīng)，確保疫苗接種安全有效。在隔離期間，確保牛只飼養(yǎng)管理到位。提供充足的飼料和飲水，保持圈舍清潔衛(wèi)生，防止疫病發(fā)生。同時，觀察牛只的采食、排泄等行為，確保其適應(yīng)新環(huán)境。對牛只進(jìn)行定期消毒，密切監(jiān)測牛只健康狀況，發(fā)現(xiàn)異常情況及時報告并采取相應(yīng)措施。在隔離觀察期滿后，如牛只健康狀況良好，無疫病癥狀，可進(jìn)行轉(zhuǎn)群。在轉(zhuǎn)群前，對養(yǎng)殖場進(jìn)行消毒處理。轉(zhuǎn)群后，繼續(xù)觀察牛只健康狀況，確保其適應(yīng)新環(huán)境。在合群前，可進(jìn)行一次全面疫病檢測，確保合群安全。對隔離觀察期間的牛只信息、檢疫檢測結(jié)果、疫苗接種情況等數(shù)據(jù)進(jìn)行記錄，建立檔案。以便于日后查詢和管理。

3、加強(qiáng)環(huán)境調(diào)控

①牛舍環(huán)境溫度、濕度調(diào)控

牛巴氏桿菌病防控期間，保持牛舍內(nèi)適宜的溫度和濕度對于牛只的健康和疫病防控至關(guān)重要。根據(jù)不同年齡和品種的牛只需求，牛舍內(nèi)的溫度應(yīng)保持在合理范圍。一般犢牛15～25℃；成牛10～20℃。的濕度應(yīng)保持在50%～70%之間。過低或過高的濕度都可能對牛只的健康產(chǎn)生不良影響。在冬季或寒冷地區(qū)，應(yīng)采取保溫措施，如搭建保溫棚、使用草墊等。夏季或炎熱地區(qū)則需采取散熱措施，如設(shè)置遮陽網(wǎng)、安裝風(fēng)扇等。保持牛舍內(nèi)良好的通風(fēng)換氣，有利于降低濕度、排除有毒有害氣體，提高空氣質(zhì)量?？稍谂Ｉ醿蓚?cè)設(shè)置窗戶或采用機(jī)械通風(fēng)系統(tǒng)。保持牛舍地面清潔、干燥，避免污水積聚?？刹捎盟?、沙子等材料鋪設(shè)地面，并每周進(jìn)行1～2次消毒處理。提供充足的清潔飲水，避免牛只飲用污染的水源。合理搭配飼料，保證牛只營養(yǎng)需求，增強(qiáng)免疫力。每天監(jiān)測牛舍內(nèi)的溫度和濕度，根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。在氣候變化較大的季節(jié)，應(yīng)特別注意監(jiān)測和調(diào)控牛舍環(huán)境。

②嚴(yán)格衛(wèi)生消毒

每天清理牛舍糞便和垃圾，保持舍內(nèi)衛(wèi)生；每周對牛舍進(jìn)行徹底清掃，清理舍內(nèi)墻壁、地面、料槽等處的雜物；每周清洗飲水器、料槽等設(shè)備，確保清潔無污垢。常用消毒藥劑包括了2%的氫氧化鈉、5%的硫酸銅、0.1%的過氧乙酸、碘伏。氫氧化鈉（NaOH）具有廣譜殺菌作用，對細(xì)菌、病毒均有較強(qiáng)的殺滅效果。硫酸銅（CuSO4）對細(xì)菌、病毒、真菌等有較好的殺滅效果。過氧乙酸高效消毒劑，對細(xì)菌、病毒、真菌等均有較好的殺滅效果。碘伏廣譜殺菌劑，對細(xì)菌、病毒等有較強(qiáng)的殺滅效果。在消毒處理過程中可以將消毒藥劑溶于水后，均勻噴灑在牛舍的墻壁、地面、料槽等處；或者使用消毒藥劑浸泡的毛巾或拖把，對牛舍內(nèi)的設(shè)備、墻壁等進(jìn)行擦拭。常規(guī)消毒每周進(jìn)行至少1次全面消毒；疫病防控期間每周進(jìn)行2～3次全面消毒，發(fā)病牛只所在區(qū)域每天進(jìn)行1次消毒。

綜上所述，牛巴氏桿菌病對牛只健康和養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重危害，病原具有多種傳播渠道，再加上當(dāng)前的病原耐藥性逐漸增強(qiáng)，很多藥物的防控效果逐漸變差。新時期為更好地推動牛養(yǎng)殖業(yè)的高質(zhì)量發(fā)展，就需要將關(guān)注重點(diǎn)放置在巴氏桿菌病的針對性診斷與防治方面，持續(xù)加強(qiáng)流行病學(xué)調(diào)查，明確該種疾病的發(fā)生流行特點(diǎn)和流行趨勢，總結(jié)防治工作經(jīng)驗(yàn)，將巴氏桿菌病的發(fā)生流行率降低到最小程度。