甲狀腺癌組織中CD147及survivin表達及其與術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性

李治洛 辛雅萍

甲狀腺癌為臨床常見惡性腫瘤,起源于甲狀腺濾泡上皮組織,早期癥狀不明顯,待瘤體增大后可壓迫臨近器官,誘發(fā)吞咽困難、呼吸困難、聲音嘶啞等癥狀,若未得到及時診治,可經(jīng)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,增加臨床治療難度[1-2]。手術(shù)為該病當前主要治療方式,通過手術(shù)切除腫瘤組織,能夠終止腫瘤進展,以避免其擴散或轉(zhuǎn)移[3-4]。目前,多數(shù)患者經(jīng)手術(shù)治療后可獲得良好預(yù)后,但仍有少數(shù)患者術(shù)后出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,增加患者痛苦及經(jīng)濟負擔。超聲為當前診斷甲狀腺癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要手段,雖具有較高診斷價值,但其難以預(yù)測術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風險,還需尋找可對術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移造成影響的高危指標,以便于臨床早期開展針對性預(yù)防工作。白細胞分化抗原147(CD147)屬于跨膜糖蛋白,在腫瘤細胞膜上分布廣泛,可刺激血管內(nèi)皮生長因子生成,與腫瘤惡性程度存在密切關(guān)系[5]。survivin屬于蛋白水解酶,與細胞凋亡存在密切關(guān)系,在多種惡性腫瘤中均存在較高表達。但關(guān)于兩者與甲狀腺癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是否存在關(guān)系尚未明確[6]。鑒于此,本研究旨在分析甲狀腺癌組織中CD147及survivin表達與術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年5月至2021年5月我院收治的82例甲狀腺癌患者作為研究對象,其中男性39例,女性43例;年齡37～68歲,平均年齡(52.49±5.12)歲;體質(zhì)量指數(shù)19～28 kg/m2,平均體質(zhì)量指數(shù)(24.36±1.52)kg/m2。經(jīng)醫(yī)學倫理委員會批準。納入標準:均經(jīng)病理檢查確診為甲狀腺癌;均開展手術(shù)治療;臨床資料完整;精神狀態(tài)正常;患者及家屬知情同意。排除標準:心肺功能欠佳;肝腎衰竭;凝血功能障礙;合并其他惡性腫瘤。

1.2 方法

所有患者均行手術(shù)治療,術(shù)中需采集腫瘤標本及癌旁正常組織標本送檢。采用免疫組織化學法檢測腫瘤標本及癌旁正常組織標本內(nèi)CD147、survivin表達:先以10%甲醛固定,石蠟包埋后進行連續(xù)切片,切片厚度為5 μm;切片行脫蠟處理,梯度乙醇脫水處理,再以3%過氧化氫封閉,室溫下孵育10 min;將切片浸泡在EDTA溶液內(nèi),微波抗原修復(fù)10 min;待冷卻后以PBS溶液沖洗3次,每次3 min;滴加山羊血清封閉液抗原,室溫孵育20 min,甩去多余液體后,加入過氧化物酶阻斷,加入CD147(1∶100)、survivin單抗(1∶100),置于4 ℃環(huán)境內(nèi)過夜;復(fù)溫30 min,再以PBS溶液沖洗3次,每次3 min;滴加兔抗羊二抗工作液覆蓋于標本上,置于恒溫箱內(nèi)以37 ℃孵育15 min;再以PBS溶液沖洗3次,每次3 min;之后進行DBA溶液配置,室溫下開展DBA顯色處理,蘇木精復(fù)染3 min,以鹽酸乙醇分化10 s,碳酸鋰返藍10 s,玻片風干處理后加入中性樹膠封固,并以PBS代替一抗作為陰性對照。兩者陽性表達均定位于細胞質(zhì)內(nèi),以半定量積分法判斷,于高倍鏡下隨機選取10個視野,每個視野計數(shù)100個腫瘤細胞,之后以染色強度及陽性細胞百分比計算陽性情況。染色強度分為0、1、2、3分,對應(yīng)未著色、淺黃、棕黃及棕褐色;陽性細胞百分比為0、1、2、3、4分,對應(yīng)<10%、10%～25%、>25%～50%、>50%～75%、>75%;得分0分為陰性,≥1分為陽性。

1.3 觀察指標

(1)CD147、survivin陽性表達情況:比較腫瘤標本及癌旁正常組織內(nèi)CD147、survivin陽性表達情況。(2)影響甲狀腺癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的因素分析:隨訪1年,記錄82例甲狀腺癌患者術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況,依據(jù)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況分為兩組,收集兩組年齡、性別、腫瘤分期、體質(zhì)量指數(shù)、CD147表達、survivin表達、腫瘤直徑等多方面資料,分別行單因素、Logistic回歸分析,獲得影響甲狀腺癌患者術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的高危因素。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 CD147、survivin陽性表達情況

腫瘤組織CD147陽性率、survivin陽性率高于癌旁正常組織,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表1。

表1 兩組CD147、survivin陽性表達情況對比(例,%)

2.2 影響甲狀腺癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的單因素分析

82例患者術(shù)后隨訪1年,其中30例出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,52例未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與未轉(zhuǎn)移者腫瘤分期、CD147表達、survivin表達相比,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 影響甲狀腺癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的單因素分析(例,%)

2.3 影響甲狀腺癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的多因素分析

多因素顯示,腫瘤分期Ⅲ期、CD147陽性表達、survivin陽性表達為影響甲狀腺癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的高危因素(P<0.05且OR>1),見表3。

表3 影響甲狀腺癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的多因素分析

3 討論

甲狀腺癌發(fā)病復(fù)雜,臨床認為該病的發(fā)生及發(fā)展受多種癌基因及生長因子影響,一旦原癌基因過度表達、突變等,可引起癌基因與抑癌基因失衡,增加細胞癌變風險,且生長因子持續(xù)作用下可促使甲狀腺濾泡正常細胞生長分化,協(xié)同癌基因誘發(fā)細胞增殖失控,增加惡性腫瘤形成風險[7-8]。同時,甲狀腺癌還可涉及碘攝入、電離輻射等多個方面,均可一定程度上刺激甲狀腺濾泡正常細胞,使其發(fā)生惡性變化[9-10]。甲狀腺癌的首選治療方式為手術(shù),多數(shù)患者經(jīng)手術(shù)切除病灶后可取得理想預(yù)后,但受多種因素影響,部分患者術(shù)后仍伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移現(xiàn)象。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)不僅增加臨床治療難度,還增加患者死亡風險,故早期若能識別術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風險,則有助于開展針對性治療方案,避免淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生。

CD147是在人腫瘤細胞培養(yǎng)上清液內(nèi)發(fā)現(xiàn)的跨膜糖蛋白,其能夠?qū)毎饣|(zhì)內(nèi)成纖維細胞、內(nèi)皮細胞等產(chǎn)生刺激,促使基質(zhì)金屬蛋白酶生成,加快細胞外基質(zhì)降解,從而為腫瘤的生長、浸潤及轉(zhuǎn)移提供一定便利[11]。臨床發(fā)現(xiàn),CD147在正常組織內(nèi)表達較低,高表達廣泛存在于多種惡性腫瘤細胞內(nèi),且參與腫瘤細胞的新生血管生成、能量代謝等方面[12-13]。Survivin屬于抗凋亡蛋白,其相對分子質(zhì)量小,能夠?qū)毎芷谄鸬秸{(diào)控作用,從而影響細胞的增殖及凋亡,且該物質(zhì)具有腫瘤特異性,在乳腺癌、直腸癌等多種惡性腫瘤內(nèi)也存在較高表達,腫瘤分期越晚則表達水平越高[14-15]。本研究結(jié)果顯示,腫瘤標本內(nèi)CD147陽性率、survivin陽性率高于癌旁正常組織;兩組腫瘤分期、CD147表達、survivin表達相比,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);多因素顯示,腫瘤分期Ⅲ期、CD147陽性表達、survivin陽性表達為影響甲狀腺癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的高危因素(P<0.05且OR>1);提示CD147、survivin在甲狀腺癌中存在較高陽性表達,且與術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切,可作為指導(dǎo)臨床治療的重要指標。分析原因為,當CD147處于高陽性表達狀態(tài)時,能夠加快細胞外基質(zhì)降解、促進腫瘤新生血管形成,以提高腫瘤細胞增殖速度,使得腫瘤細胞可迅速擴散、轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致手術(shù)難以徹底清除腫瘤細胞,術(shù)后易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。而survivin高表達亦是如此,可對腫瘤細胞凋亡起到調(diào)控作用,阻止腫瘤細胞凋亡,提高腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移能力,故該類患者術(shù)后更易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

綜上所述,CD147及survivin在甲狀腺癌中呈高表達,且兩者陽性表達為術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的高危因素,早期監(jiān)測該類指標有助于完善治療方案,降低術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風險。