急性時(shí)相蛋白與細(xì)胞因子檢測在2型糖尿病患者中的作用及臨床意義

董勃 丁甜

徐州市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，徐州 221000

2型糖尿病屬于非胰島素依賴型糖尿病，患者體內(nèi)胰島素處于一種相對缺乏狀態(tài)，甚至有些患者胰島素分泌過多，細(xì)胞功能出現(xiàn)障礙，胰島素治療效果受到影響，增加治療難度。2型糖尿病對身體危害較大，可引發(fā)心腦血管、腎臟等相關(guān)并發(fā)癥，一旦患病需終身治療，長時(shí)間的治療也增加了經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)［1-2］。對于2型糖尿病需要及時(shí)對血糖進(jìn)行控制，靶器官損傷也是需要關(guān)注的方面，特別是腎臟，其中血清α1-酸性糖蛋白（α1-AG）、銅藍(lán)蛋白（CP）均屬于急性時(shí)相蛋白，在糖尿病的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用。白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）則屬于炎性指標(biāo)，機(jī)體長期處于高血糖狀態(tài)下會(huì)對固有的免疫系統(tǒng)造成損傷，大量非特異性免疫系統(tǒng)被激活，單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等產(chǎn)生大量細(xì)胞因子，使胰島β細(xì)胞分泌功能受到損傷，發(fā)生胰島素抵抗［3-4］。本研究對急性時(shí)相蛋白及細(xì)胞因子在2型糖尿病中的作用進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

資料與方法

1.一般資料

回顧性分析2021年3月至2023年3月在徐州市第一人民醫(yī)院接受治療的2型糖尿病患者180例作為研究對象，其中尿蛋白排泄率＜20 μg/min設(shè)為正常組（90例），尿蛋白排泄率在20～200 μg/min設(shè)為異常組（90例），另選擇同時(shí)期體檢健康者180例。正常組男47例、43例，年齡63～82（72.78±13.44）歲；異常組男48例、女42例，年齡62～82（72.21±14.14）歲；體檢健康者男90例、女90例，年齡61～82（71.98±13.44）歲?；颊呒{入標(biāo)準(zhǔn)：⑴符合世界衛(wèi)生組織對于糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］；⑵未接受規(guī)范性藥物干預(yù)；⑶患者均知情同意并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴惡性腫瘤；⑵自身免疫系統(tǒng)疾??；⑶精神類疾病。3組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），具有可比性。

本研究經(jīng)徐州市第一人民醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過（2021020008）。

2.方法

對受檢者進(jìn)行急性時(shí)相蛋白（α1-AG、CP）及細(xì)胞因子（IL-6、TNF-α）檢測，采集空腹（8～12 h）靜脈血6 ml，α1-AG、CP均使用免疫比濁法進(jìn)行測定，在采集樣本中抽取3 ml，待血液凝固后以4 000 r/min離心，離心半徑13.5 cm，10 min后取血清，將50 μl血清加入1 000 μl的基質(zhì)液中充分混合，37 ℃保溫1 min，再次加入150 μl顯色液，反應(yīng)混合液吸入式分析儀中，分析波長377 nm，延遲時(shí)間15 s，測定時(shí)間30 s，以50 μl蒸餾水代替血清進(jìn)行空白校正；IL-6采用電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行測定，試劑盒由武漢華美生物工程有限公司提供，檢測時(shí)嚴(yán)格參照操作手冊和說明書進(jìn)行，測試樣本可通過儀器自動(dòng)繪制曲線進(jìn)行計(jì)算，獲取濃度指標(biāo)，如低于1.5 ng/L則表示IL-6＜1.5 ng/L，如高于5 000 ng/L則使用儀器進(jìn)行1∶10的稀釋，結(jié)果為稀釋倍數(shù)的乘積，如稀釋后仍存在指標(biāo)高于5 000 ng/L情況，則表示IL-6＞5 000 ng/L；TNF-α采用酶聯(lián)免疫吸附法，在檢測時(shí)將50 μl標(biāo)準(zhǔn)品配置成不同濃度，加入到不同標(biāo)準(zhǔn)品孔，除空白孔外，在每孔加入100 μl辣根過氧化物酶，封孔，放于37 ℃溫度內(nèi)等待60 min，然后將液體去除，晾干加入350 μl洗滌劑，等待1 min后操作同上，然后再加入50 μl辣根過氧化物酶，繼續(xù)37 ℃溫度下等待15 min，完成后各個(gè)孔進(jìn)行測試，比較差異。上述操作流程需在同一檢驗(yàn)團(tuán)隊(duì)下完成，各項(xiàng)操作流程做好質(zhì)控，檢查前對儀器設(shè)備運(yùn)行情況進(jìn)行判斷，確?？梢哉＿\(yùn)作，并且注意對試驗(yàn)臺(tái)進(jìn)行清理，以保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3.觀察指標(biāo)

⑴對比體檢健康者與2型糖尿病患者急性時(shí)相蛋白（α1-AG、CP）及細(xì)胞因子（IL-6、TNF-α）；⑵對比2型糖尿病患者不同尿蛋白排泄率下檢測結(jié)果及不同尿蛋白排泄率下治療結(jié)果，指標(biāo)包括血清α1-AG、CP、IL-6、TNF-α，以后期隨訪、追蹤及治療為依據(jù)。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用例（%）表示，行χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1.體檢健康者與2型糖尿病患者指標(biāo)檢測結(jié)果比較（表1）

表1 體檢健康者與2型糖尿病患者急性時(shí)相蛋白及細(xì)胞因子檢測結(jié)果比較（）

表1 體檢健康者與2型糖尿病患者急性時(shí)相蛋白及細(xì)胞因子檢測結(jié)果比較（）

注：α1-AG為α1-酸性糖蛋白，CP為銅藍(lán)蛋白，IL-6為白細(xì)胞介素-6，TNF-α為腫瘤壞死因子-α

TNF-α（ng/L）9.78±3.44 20.23±4.76 23.873＜0.001組別體檢健康者2型糖尿病t值P值例數(shù)180 180 α1-AG（mg/L）468.38±67.37 1 114.36±223.32 37.155＜0.001 CP（mg/L）2.46±1.12 17.21±1.64 99.946＜0.001 IL-6（ng/L）4.38±1.35 13.41±1.28 65.122＜0.001

2型糖尿病患者血清α1-AG、CP、IL-6、TNF-α指標(biāo)均高于體檢健康者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

2.兩組2型糖尿病患者不同尿蛋白排泄率下檢測結(jié)果比較（表2）

表2 2型糖尿病患者不同尿蛋白排泄率下檢測結(jié)果比較（）

表2 2型糖尿病患者不同尿蛋白排泄率下檢測結(jié)果比較（）

注：尿蛋白排泄率＜20 μg/min為正常組，尿蛋白排泄率在20～200 μg/min為異常組；α1-AG為α1-酸性糖蛋白，CP為銅藍(lán)蛋白，IL-6為白細(xì)胞介素-6，TNF-α為腫瘤壞死因子-α

TNF-α（ng/L）9.78±3.44 15.23±4.76 8.804＜0.001組別正常組異常組t值P值例數(shù)90 90 α1-AG（mg/L）623.45±87.33 1 232.22±344.32 16.258＜0.001 CP（mg/L）2.46±0.74 6.21±1.64 19.773＜0.001 IL-6（ng/L）4.38±1.35 9.41±1.28 25.650＜0.001

異常組患者血清α1-AG、CP、IL-6及TNF-α指標(biāo)均高于正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

3.兩組2型糖尿病患者不同尿蛋白排泄率下治療結(jié)果比較（表3）

表3 2型糖尿病患者不同尿蛋白排泄率下治療結(jié)果比較（）

表3 2型糖尿病患者不同尿蛋白排泄率下治療結(jié)果比較（）

注：尿蛋白排泄率＜20 μg/min為正常組，尿蛋白排泄率在20～200 μg/min為異常組；α1-AG為α1-酸性糖蛋白，CP為銅藍(lán)蛋白，IL-6為白細(xì)胞介素-6，TNF-α為腫瘤壞死因子-α

TNF-α（ng/L）4.33±1.11 9.67±1.21 30.852＜0.001組別正常組異常組t值P值例數(shù)90 90 α1-AG（mg/L）345.87±76.43 766.87±67.21 39.242＜0.001 CP（mg/L）1.34±0.23 3.67±0.34 53.849＜0.001 IL-6（ng/L）2.12±0.87 5.34±1.21 20.498＜0.001

異常組患者治療后血清α1-AG、CP、IL-6及TNF-α指標(biāo)均高于正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

討論

2型糖尿病的發(fā)病主要是由遺傳、環(huán)境以及生活習(xí)慣共同作用的結(jié)果，屬于胰島素依賴型糖尿病，患者自身胰島功能并未完全消失，臨床出現(xiàn)胰島素抵抗、胰島素分泌異常，血糖超出正常水平，如任其發(fā)展不進(jìn)行控制，可導(dǎo)致腎臟功能異常，引發(fā)各種并發(fā)癥，對疾病的有效控制和科學(xué)干預(yù)非常關(guān)鍵［6］。2型糖尿病按照病程可分為糖尿病前期、臨床期以及并發(fā)癥發(fā)病期，治療中需嚴(yán)格控制血糖［7-8］。目前，對于糖尿病的病因尚未完全闡明，但研究發(fā)現(xiàn)可能與機(jī)體炎癥反應(yīng)有關(guān)，機(jī)體內(nèi)免疫系統(tǒng)誘導(dǎo)、細(xì)胞因子介導(dǎo)的急性時(shí)相反應(yīng)，急性時(shí)相蛋白作為重要炎癥因子，由脂肪細(xì)胞分泌出IL-6、TNF-α?xí)Ω闻K的合成進(jìn)行刺激，導(dǎo)致CP指標(biāo)提升，引發(fā)血糖升高［9-10］。本研究顯示，2型糖尿病患者血清α1-AG、CP、IL-6及TNF-α指標(biāo)均高于體檢健康者（均P＜0.05）。分析原因：血清α1-AG是肝臟合成分泌的一種蛋白質(zhì)，為血清黏蛋白的主要成分，含糖量為40%［5，11-12］。α1-AG水平改變可用于鑒別急性時(shí)相反應(yīng)或雌激素引起的急性時(shí)相蛋白（如CP、α1-抗胰球蛋白等）水平升高，若為后者則α1-AG濃度正?；蚪档停罢呖沙霈F(xiàn)血清水平升高［13］；CP是一種急性期反應(yīng)蛋白，主要負(fù)責(zé)將銅從肝臟輸送至各個(gè)組織中，銅經(jīng)小腸吸收后在肝細(xì)胞微粒體上與CP結(jié)合，通過血液輸送至腎臟進(jìn)行存儲(chǔ)［14］；IL-6則會(huì)對胰島β細(xì)胞產(chǎn)生影響，對活性和功能造成損傷，正常狀態(tài)下胰島分泌的IL-6可維持胰島功能正常需求，對于胰島分泌胰島素具有調(diào)節(jié)或控制效應(yīng)，而胰島功能出現(xiàn)問題后胰島周圍局部釋放不同的細(xì)胞因子，導(dǎo)致B淋巴細(xì)胞分化，過量的免疫球蛋白G基因和促進(jìn)殺傷性的T淋巴細(xì)胞克隆過度激活，對自身破壞加重，細(xì)胞因子和效應(yīng)因子毒性結(jié)合，引發(fā)胰島β細(xì)胞死亡，加重2型糖尿病進(jìn)程［15-17］；TNF-α是具有多種生物學(xué)效應(yīng)的炎癥性細(xì)胞因子，在機(jī)體多個(gè)炎癥病變方面發(fā)生重要作用，可促進(jìn)胰島β細(xì)胞中一氧化氮生成，誘發(fā)胰島素抵抗，同時(shí)還可抑制胰島素信號(hào)傳遞，在2型糖尿病的發(fā)展中發(fā)揮重要作用［18-19］。

本研究結(jié)果顯示，尿蛋白排泄率異?；颊哐濡?-AG、CP、IL-6及TNF-α指標(biāo)均高于正常組患者（均P＜0.05）。分析原因：2型糖尿病引發(fā)的靶器官損傷也是需要關(guān)注的問題，其中對腎臟損傷屬于關(guān)注焦點(diǎn)，有數(shù)據(jù)顯示超過1/3的患者合并糖尿病腎病，該疾病屬于常見的難治性并發(fā)癥，早期癥狀表現(xiàn)為微量白蛋白尿，隨之出現(xiàn)臨床蛋白尿，發(fā)展成慢性腎功能不全，最終進(jìn)展成為終末期腎損傷，需要借助血液透析完成治療，對機(jī)體損傷嚴(yán)重［20-23］。因此，早期診斷和干預(yù)非常重要。α1-AG、CP均屬于急性時(shí)相蛋白，反映人體處于慢性炎癥反應(yīng)狀態(tài)，而炎癥可通過多種途徑導(dǎo)致腎臟損傷，可引發(fā)機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)，使低密度脂蛋白氧化成氧化低密度脂蛋白，直接損傷腎小球內(nèi)皮細(xì)胞，修飾血管壁蛋白，使管壁增厚，彈性下降，對腎小球血管造成嚴(yán)重?fù)p傷［11］；IL-6釋放繼發(fā)性細(xì)胞因子，刺激系膜細(xì)胞增殖，誘發(fā)腎小球的病理性改變，引發(fā)腎臟結(jié)構(gòu)和功能異常［24］；TNF-α刺激腎小球細(xì)胞釋放更多膠原酶，蛋白大量降解，而細(xì)胞合成增加，引發(fā)系膜細(xì)胞結(jié)構(gòu)和形態(tài)變化，對腎臟的微血管造成損傷［25］。TNF-α還可提升單核細(xì)胞趨化蛋白分泌，誘導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)增加，使腎臟出現(xiàn)慢性炎癥和纖維化，引發(fā)腎臟方面疾病。因此，上述指標(biāo)對于糖尿病腎病的診斷也具有一定的促進(jìn)作用，可及時(shí)發(fā)現(xiàn)腎臟損傷，并對疾病進(jìn)行干預(yù)［26］。而對于尿蛋白排泄率異常人群，治療難度增加，治療后各項(xiàng)指標(biāo)較高，需要更加關(guān)注腎臟功能的恢復(fù)［27-28］。

綜上分析，2型糖尿病進(jìn)行急性時(shí)相蛋白與細(xì)胞因子檢測可對腎臟功能進(jìn)行判斷，確定是否存在腎病，而細(xì)胞因子與腎臟損傷的嚴(yán)重程度存在聯(lián)系。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明董勃、丁甜：醞釀和設(shè)計(jì)試驗(yàn)，實(shí)施研究，采集、分析/解釋數(shù)據(jù)，起草文章，對文章的知識(shí)性內(nèi)容作批評性審閱，統(tǒng)計(jì)分析，獲取研究經(jīng)費(fèi)，行政、技術(shù)或材料支持，指導(dǎo)，支持性貢獻(xiàn)