HBV相關(guān)原發(fā)肝細(xì)胞癌患者T淋巴細(xì)胞、殼酶蛋白和DR-70表達(dá)水平差異

陳錫蓮 楊勇衛(wèi) 王鵬雁 劉友德 潘偉

1煙臺(tái)市奇山醫(yī)院科教科，煙臺(tái) 246001；2煙臺(tái)市奇山醫(yī)院檢驗(yàn)科，煙臺(tái) 246001；3煙臺(tái)市奇山醫(yī)院肝病二科，煙臺(tái) 246001；4煙臺(tái)市奇山醫(yī)院醫(yī)務(wù)科，煙臺(tái) 246001

肝細(xì)胞癌一般起病隱匿，其早期診斷依然是亟待解決的一大難題。目前，乙型肝炎病毒（HBV）感染仍是我國(guó)肝細(xì)胞癌的首要起因［1］。血清纖維蛋白降解復(fù)合物（DR-70）具有抗炎、血管生成和趨化活性作用，有研究表明，DR-70水平在惡性腫瘤患者外周血中明顯升高［2-3］。殼酶蛋白隸屬殼多糖酶家族，有研究表明，肝纖維化程度越嚴(yán)重殼酶蛋白水平越高［4-5］。因此，血清殼酶蛋白水平對(duì)于患者肝纖維化進(jìn)展嚴(yán)重程度的評(píng)估和疾病預(yù)后的監(jiān)測(cè)具有重要價(jià)值。本研究通過探討不同臨床類型HBV感染患者DR-70和殼酶蛋白表達(dá)水平與免疫功能的相關(guān)性，為HBV相關(guān)原發(fā)肝細(xì)胞癌的早診早治提供幫助。

資料與方法

1.一般資料

回顧性選取2017年9月至2022年9月在煙臺(tái)市奇山醫(yī)院住院及門診收治的HBV感染患者，所有患者均未接受抗病毒和免疫調(diào)解治療，排除酒精性肝炎、自身免疫性肝炎、藥物性肝炎及其他各型病毒性肝炎。共173例，男114例，女59例，年齡（45.38±12.72）歲；診斷符合《慢性乙型肝炎診治指南（2015版）》［6］。再根據(jù)病情分為乙型肝炎病毒攜帶者59例、慢性乙型肝炎患者51例、肝硬化患者31例和肝細(xì)胞癌患者32例。同期收集40例健康查體者作為對(duì)照組［男22例，女18例，年齡（39.15±14.95）歲］，均為肝功能正常人群，排除其他疾?。ǜ餍透窝撞《靖腥炯靶姆渭膊〉龋?。

本研究獲得煙臺(tái)市奇山醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（煙臺(tái)市奇山醫(yī)院倫準(zhǔn)202108號(hào)）。

2.檢測(cè)方法

⑴T淋巴細(xì)胞采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分析，儀器和試劑均為美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司生產(chǎn)。⑵采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)雙抗體夾心法定量檢測(cè)血清DR-70水平，試劑購(gòu)自江蘇為真生物醫(yī)藥技術(shù)股份有限公司。⑶應(yīng)用CIA1200全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測(cè)定儀（江蘇澤成生物技術(shù)有限公司）檢測(cè)血清殼酶蛋白水平，試劑購(gòu)自杭州普望生物技術(shù)有限公司。所有試劑在有效期內(nèi)并按試劑說明書使用。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié)果

1.不同臨床分型患者T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平

慢性HBV感染者CD3+表達(dá)水平從乙型肝炎病毒攜帶者組到肝細(xì)胞癌組逐漸降低；CD3+CD4+表達(dá)水平在慢性HBV感染者呈現(xiàn)升高的趨勢(shì)，且在肝硬化患者達(dá)到峰值，但與對(duì)照組比較差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；CD3+CD8+表達(dá)水平在肝硬化患者中最低，與其他組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見表1。

表1 慢性HBV感染者及對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群占淋巴細(xì)胞百分比（%，）

表1 慢性HBV感染者及對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群占淋巴細(xì)胞百分比（%，）

注：HBV為乙型肝炎病毒，對(duì)照組為健康體檢人員。a與對(duì)照組相比，P＜0.05；b與肝硬化組相比，P＜0.05；c與肝硬化組相比，P＜0.01

組別肝細(xì)胞癌組肝硬化組慢性乙型肝炎組乙型肝炎病毒攜帶者組對(duì)照組F值P值CD3+CD8+23.44±10.37b 17.89±9.15 24.23±9.11b 24.68±8.45b 24.44±7.32b 2.417 0.049例數(shù)22 41 51 59 40 CD3+61.43±19.26a 61.77±17.01a 65.05±11.43 66.13±14.23 67.13±9.90 1.623 0.098 CD3+CD4+35.25±15.62 37.16±13.84 35.14±8.23 35.22±7.29 33.12±8.33 1.162 0.187

表2 慢性HBV感染者及對(duì)照組外周血DR-70、殼酶蛋白水平檢測(cè)結(jié)果（）

表2 慢性HBV感染者及對(duì)照組外周血DR-70、殼酶蛋白水平檢測(cè)結(jié)果（）

注：HBV為乙型肝炎病毒，對(duì)照組為健康體檢人員。a與對(duì)照組相比，P＜0.01；b與乙型肝炎病毒攜帶者組相比，P＜0.01；c與慢性乙型肝炎組相比，P＜0.01；d與肝硬化組相比，P＜0.01

殼酶蛋白213.11±39.76abcd 139.19±26.19abc 68.06±17.02a 59.72±18.14 30.69±14.68 64.651＜0.001組別肝細(xì)胞癌組肝硬化組慢性乙型肝炎組乙型肝炎病毒攜帶者組對(duì)照組F值P值例數(shù)32 31 51 59 40 DR-70 30.11±9.96abcd 17.14±8.33abc 8.89±4.34a 7.63±3.46 5.49±3.17 27.570＜0.001

2.不同臨床分型HBV感染者DR-70、殼酶蛋白表達(dá)水平

DR-70、殼酶蛋白表達(dá)水平隨患者病情惡化逐漸升高，且均在肝細(xì)胞癌組中表達(dá)水平達(dá)到峰值，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3.肝細(xì)胞癌組外周血T淋巴細(xì)胞與DR-70、殼酶蛋白水平的相關(guān)性分析

肝細(xì)胞癌患者外周血CD3+T淋巴細(xì)胞表達(dá)占比與DR-70水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.291；P＜0.05）；CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+與DR-70和殼酶蛋白表達(dá)水平均無相關(guān)性（均P＞0.05）。見表3。

表3 32例肝細(xì)胞癌患者外周血細(xì)胞因子與DR-70、殼酶蛋白水平的相關(guān)性分析

討論

有研究表明，HBV感染肝細(xì)胞后會(huì)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，導(dǎo)致肝臟炎性損傷，肝炎患者體內(nèi)都存在著不同程度的細(xì)胞免疫功能紊亂［7-8］；機(jī)體免疫反應(yīng)可主動(dòng)去除病毒，但機(jī)體免疫耐受或T細(xì)胞應(yīng)答不足時(shí)導(dǎo)致不能清除HBV，致使感染長(zhǎng)期存在，亦是造成乙型肝炎病毒攜帶者者眾多的原因之一［9-11］。本研究發(fā)現(xiàn)，慢性HBV感染者CD3+表達(dá)水平從乙型肝炎病毒攜帶者組到肝細(xì)胞癌組逐漸降低，CD4+/CD8+卻不同程度升高，提示機(jī)體被HBV持續(xù)感染時(shí)，感染者在各臨床周期存在不同程度的免疫功能異常。

腫瘤細(xì)胞能促進(jìn)纖維蛋白原及纖維蛋白的降解，導(dǎo)致血清中DR-70水平升高。殼酶蛋白參與炎癥反應(yīng)，在肝纖維化、肝硬化、肝細(xì)胞癌階段會(huì)出現(xiàn)不同程度的升高，在肝纖維化及肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展中有一定診斷價(jià)值。本研究發(fā)現(xiàn)：DR-70和殼酶蛋白表達(dá)水平隨患者病情惡化逐漸升高，且均在肝細(xì)胞癌患者中的表達(dá)達(dá)到峰值。由此表明，血清DR-70和殼酶蛋白可能是一個(gè)敏感的原發(fā)性肝癌的檢測(cè)指標(biāo)，對(duì)肝癌有較高診斷價(jià)值。與對(duì)照組相比，慢性乙型肝炎組、肝硬化組和肝細(xì)胞癌組外周血中的DR-70和殼酶蛋白水平均不同程度升高（均P＜0.01），提示二者可能都參與了HBV感染慢性化，二者聯(lián)合可以作為肝癌早期診斷的一種無創(chuàng)指標(biāo)，能夠提高肝癌的檢出率。機(jī)體免疫功能紊亂，尤其是調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)失調(diào)與慢性肝病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［12］。本研究亦發(fā)現(xiàn)，肝細(xì)胞癌患者外周血CD3+T淋巴細(xì)胞表達(dá)占比與DR-70水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.291；P＜0.05），表明DR-70參與了肝病的相關(guān)進(jìn)程及原發(fā)性肝癌的發(fā)生發(fā)展，可作為HBV相關(guān)肝癌的監(jiān)測(cè)因子，有助于及時(shí)發(fā)現(xiàn)病情惡化。

綜上，機(jī)體免疫耐受或T淋巴細(xì)胞應(yīng)答不足是造成乙肝病毒不能清除，致使感染長(zhǎng)期存在的主要原因之一，T淋巴細(xì)胞與DR-70、殼酶蛋白聯(lián)合檢測(cè)可動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)乙肝病毒感染后的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程，有助于慢性乙肝的臨床診療，特別是對(duì)肝臟腫瘤的早期診斷具有較大的應(yīng)用價(jià)值。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明陳錫蓮、楊勇衛(wèi)：論文撰寫，數(shù)據(jù)分析；王鵬雁、劉友德：文獻(xiàn)查閱，數(shù)據(jù)收集；潘偉：論文指導(dǎo)