中藥復(fù)方健脾降脂顆粒的研制及成型工藝優(yōu)化研究

杜 君，鄭曉美，尹 柱，文琦琦，楊浩瀾，葉 剛*

（1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，四川 成都 611130；2.四川省蘆山縣蘆陽(yáng)街道辦事處，四川 蘆山 625600）

中醫(yī)認(rèn)為，肥胖與“先天稟賦、過(guò)食肥甘、疏于勞作、七情過(guò)度、脾胃虛衰、痰飲水濕”等因素有關(guān)，可以大體歸納為以胃熱、痰濁等為主的實(shí)證與脾虛、氣虛、脾腎陽(yáng)虛為主的虛證兩大證型［1-2］。治療上常采用補(bǔ)虛泄實(shí)的方法，主要運(yùn)用健脾、益氣、補(bǔ)腎、祛濕、化痰等療法，旨在清除病理性的痰濁、水濕、淤血、膏脂，從而達(dá)到治療肥胖的效果。

健脾降脂顆粒主要參考相關(guān)文獻(xiàn)及專(zhuān)利，收集了具有降血脂功效且尚未有人使用過(guò)的單味中藥，針對(duì)脾虛腎虛肝郁、濕熱內(nèi)停，以健脾補(bǔ)腎、疏肝解郁、清熱行濕、行氣化濕為主的治法［3］，自擬組方。前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已證實(shí)該方具備顯著的減脂效果。該復(fù)方由沙棘籽、茵陳、薤白、厚樸、甘草五味藥材配伍而成，主治由脾胃虛弱、氣血不足、情緒不穩(wěn)及肝郁脾虛等所致的肥胖癥。由于中藥湯劑的特點(diǎn)不適應(yīng)現(xiàn)代獸醫(yī)臨床用藥，用中藥顆粒劑代替中藥湯劑正在成為必然。本試驗(yàn)旨在探索出一種將健脾降脂中藥復(fù)方制備成顆粒劑的最佳生產(chǎn)工藝。

1 材料與方法

1.1 主要藥材及試劑 沙棘籽、茵陳、薤白、厚樸、甘草飲片均購(gòu)自成都荷花池中藥材市場(chǎng)，經(jīng)四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院李麗霞副教授鑒定均為正品。乙醇試劑為分析純。

1.2 方法

1.2.1 提取工藝評(píng)價(jià)方法的建立 測(cè)定提取液中主要成分“總黃酮”的量，主要根據(jù)《中華人民共和國(guó)獸藥典》（2020版）各項(xiàng)下所示的含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。

1.2.2 提取工藝單因素試驗(yàn) 按比例稱(chēng)取沙棘籽、茵陳、薤白、厚樸、甘草一定量，經(jīng)粉碎機(jī)粉碎得微粉。在保證其他條件不變的情況下，分別考察以下4 個(gè)因素對(duì)提取的影響，以總黃酮量的轉(zhuǎn)移率為考察指標(biāo)，篩選出中藥復(fù)方的最佳提取工藝。

（1）最佳料液比的選擇：按上述方法，固定乙醇濃度75%，60 ℃，提取2 次，考察不同料液比（1∶20、1∶25、1∶30、1∶35）下總黃酮量的轉(zhuǎn)移率。

（2）最佳提取溫度的選擇：按上述方法，固定料液比（1∶20），乙醇濃度75%，提取2 次，考察不同溫度（40 ℃、50 ℃、60 ℃、70 ℃）下總黃酮量的轉(zhuǎn)移率。

（3）最佳提取次數(shù)的選擇：按上述方法，固定料液比（1∶20），乙醇濃度75%，60 ℃，考察不同提取次數(shù)（1、2、3、4次）下總黃酮量的轉(zhuǎn)移率。

（4）最佳溶劑濃度的選擇：按上述方法，固定料液比（1∶20），60 ℃，提取2 次，考察不同乙醇濃度（65%、75%、85%、95%）下總黃酮量的轉(zhuǎn)移率。

1.2.3 正交試驗(yàn)測(cè)定 為優(yōu)化處方的提取工藝，對(duì)料液比（A）、提取溫度（B）、提取次數(shù)（C）、提取溶劑濃度（D）4個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)，摸索出參數(shù)優(yōu)化的范圍［4-5］。采用4因素3水平的L9（34）正交試驗(yàn)法，考察料液比、提取溫度、提取次數(shù)、乙醇濃度對(duì)提取效率的影響，以總黃酮量的轉(zhuǎn)移率為考察指標(biāo)。

1.2.4 提取工藝驗(yàn)證試驗(yàn) 根據(jù)所得最佳提取條件，做3次平行試驗(yàn)，考察提取效果。

1.2.5 顆粒劑成型工藝評(píng)價(jià)方法的建立

（1）成型率：準(zhǔn)確稱(chēng)量制備好的顆粒（M）后，依次放入10 目和80 目篩中過(guò)篩，對(duì)不能通過(guò)10目篩和能通過(guò)80目篩的顆粒稱(chēng)重（m），計(jì)算符合要求的顆粒占總顆粒劑的比例：

（2）水溶性測(cè)定：準(zhǔn)確稱(chēng)量適量顆粒劑，將200 mL 70 ℃熱水倒入裝有顆粒劑的燒杯中，快速攪拌，記錄顆粒劑完全溶化的時(shí)間。

（3）吸濕性測(cè)定：將制好的顆粒劑干燥48 h，平鋪置于已恒溫的稱(chēng)量瓶底部，準(zhǔn)確稱(chēng)量后，將其放在相對(duì)濕度約為75%的密閉干燥器內(nèi)，每隔12 h稱(chēng)重，按下式計(jì)算吸濕百分率：

（4）綜合評(píng)分：綜合評(píng)分/100%＝成型率×20%＋溶化率×35%＋吸濕率×45%

1.2.6 顆粒成型工藝探究 處方藥材按優(yōu)化的提取條件提取后，濾過(guò)，合并濾液。因?qū)嶒?yàn)室烘箱無(wú)法將稠膏烘干為干膏，因此將濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.15～1.20 g/mL（60 ℃），制得稠膏［6］。

（1）輔料的選擇：根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)資料［7-8］，影響顆粒劑成型工藝的最主要因素是輔料的用量和潤(rùn)濕劑的濃度。同時(shí)以王蘭等［9］關(guān)于顆粒劑抗?jié)裥缘难芯繛閰⒖?，將MCC 分別與甘露醇、乳糖、糊精、淀粉按1∶2 的比例兩兩混合作為制粒輔料，稠膏與輔料的比例為1∶3。加入輔料，干燥成塊，粉碎成細(xì)粉（50～60 目），用70%乙醇作粘合劑，以“手握成團(tuán)、輕壓即散”為原則制粒，以顆粒性狀、成型性、水溶性、吸濕性作為參考指標(biāo)。

（2）輔料比的選擇：按照《中華人民共和國(guó)獸藥典》2020版對(duì)顆粒劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)要求及查閱相關(guān)文獻(xiàn)，并依據(jù)1.2.6 項(xiàng)下（1）的試驗(yàn)結(jié)果選出最優(yōu)賦形劑后，分別按照1∶1.5、1∶2、1∶2.5、1∶3（藥物與輔料比）制粒，觀察制粒效果。以顆粒性狀、成型性、水溶性、吸濕性作為參考指標(biāo)，選擇合適的輔料進(jìn)行工藝制備。

（3）潤(rùn)濕劑濃度的選擇：因中藥浸膏具有一定的黏性，故本方以乙醇作潤(rùn)濕劑。為考察不同濃度的乙醇對(duì)成型性的影響，將藥物粉末與前述篩選出的輔料以1∶3 的比例混勻制粒，分別加入適量的50%、60%、70%、80%乙醇作為潤(rùn)濕劑，濕法制粒，觀察制粒效果。以顆粒性狀、成型性、水溶性、吸濕性作為參考指標(biāo)，選擇合適的輔料進(jìn)行工藝制備。

1.2.7 顆粒劑成型工藝驗(yàn)證 根據(jù)所得最佳制粒條件做3次平行試驗(yàn)，觀察制粒效果，其參考指標(biāo)見(jiàn)1.2.5。

2 結(jié)果與分析

2.1 中藥復(fù)方提取工藝

2.1.1 料液比考察 由圖1 可知，隨著提取溶劑的增加，復(fù)方總黃酮得率呈現(xiàn)增長(zhǎng)趨勢(shì)。在料液比為1∶30 時(shí)，復(fù)方總黃酮得率達(dá)到最高值，隨后得率逐漸下降。這可能是因?yàn)樵?∶30 的料液比條件下，黃酮的溶解達(dá)到了較高水平，之后再增加提取溶劑的使用量可能會(huì)削弱已溶出黃酮與未溶出黃酮的協(xié)同作用，反而對(duì)協(xié)同浸提產(chǎn)生不利影響，從而導(dǎo)致黃酮得率下降［10］。因此，選擇最佳料液比為1∶30。

圖1 料液比對(duì)復(fù)方總黃酮得率的影響

2.1.2 提取溫度考察 結(jié)果如圖2所示。

圖2 提取溫度對(duì)復(fù)方總黃酮得率的影響

由圖2 可知，復(fù)方總黃酮得率會(huì)隨著提取溫度的升高而增加，在提取溫度為80 ℃時(shí)得率最高。當(dāng)提取溫度超過(guò)80 ℃后得率降低，這可能與高溫引起黃酮類(lèi)物質(zhì)變性有一定的關(guān)系；此外，提取溶劑乙醇在提取溫度過(guò)高時(shí)會(huì)因?yàn)檫^(guò)度揮發(fā)而引起得率降低。因此，選擇最優(yōu)提取溫度為80 ℃。

2.1.3 提取劑濃度考察 結(jié)果如圖3所示。

圖3 提取劑濃度對(duì)復(fù)方總黃酮得率的影響

其他條件相同的時(shí)候，分別以不同濃度的乙醇溶液提取復(fù)方中藥，結(jié)果得出乙醇濃度為75%時(shí)提取效果更好。

2.1.4 提取次數(shù)考察 由圖4 可知，當(dāng)提取3～4次時(shí)，復(fù)方總黃酮得率接近0，考慮工藝及成本，優(yōu)化提取次數(shù)為2次。

圖4 提取次數(shù)對(duì)復(fù)方總黃酮得率的影響

2.2 黃酮提取正交試驗(yàn) 從表1可見(jiàn)，各因素影響程度依次為D＞B＞C＞A，即提取次數(shù)最大，提取溫度最小；最優(yōu)工藝為A2B1C3D3，即：料液比1∶30，乙醇濃度85%，提取溫度80 ℃，提取次數(shù)3 次。按這個(gè)優(yōu)選提取工藝進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果（表2）發(fā)現(xiàn)，3 批驗(yàn)證試驗(yàn)與正交試驗(yàn)優(yōu)選結(jié)果基本吻合，表明正交試驗(yàn)優(yōu)選提取工藝合理、穩(wěn)定可行。

表1 正交試驗(yàn)結(jié)果分析

表2 優(yōu)化工藝驗(yàn)證 mg·g-1

2.3 顆粒制劑成型工藝

2.3.1 輔料 當(dāng)輔料為甘露醇＋MCC時(shí)，顆粒成型性最好，吸濕作用最小。其他輔料條件均黏度大，顆粒成型性差，故輔料選擇甘露醇＋MCC 最佳。見(jiàn)表3。

表3 不同輔料對(duì)顆粒制劑的影響

2.3.2 輔料用量 當(dāng)提取物浸膏與輔料比例為1∶2 時(shí)，顆粒成型性最好，吸濕性低。其他比例條件下，顆粒成型性雖不如1∶2，但1∶3時(shí)顆?？?jié)裥宰詈?。綜合考慮，選擇輔料用量最佳比為1∶3。見(jiàn)表4。

表4 不同輔料用量對(duì)顆粒制劑的影響

2.3.3 潤(rùn)濕劑濃度 當(dāng)潤(rùn)濕劑為70%乙醇時(shí)，顆粒成型性較好，吸濕性低，故選定潤(rùn)濕劑最佳濃度為70%乙醇。見(jiàn)表5。

表5 不同潤(rùn)濕劑濃度對(duì)顆粒制劑的影響

2.3.4 工藝驗(yàn)證 將藥物粉末與優(yōu)選輔料（甘露醇∶MCC＝2∶1）以1∶3的比例混勻制粒，分別加入適量的70%乙醇作為潤(rùn)濕劑，用濕法制粒。結(jié)果得出：所制備的顆粒成型性良好，吸濕性低，表明優(yōu)選的顆粒制備工藝穩(wěn)定可行。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)基于傳統(tǒng)中醫(yī)藥制劑經(jīng)驗(yàn)，采用新時(shí)代制劑工藝創(chuàng)新成果，結(jié)合復(fù)方中藥特殊性質(zhì)，對(duì)自擬而成的健脾降脂中藥復(fù)方顆粒制劑的工藝進(jìn)行了優(yōu)化升級(jí)，經(jīng)過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，確定最佳提取工藝：乙醇濃度85%，料液比1∶30（g∶mL），80℃加熱回流提取2次，每次1 h，合并濾液。

由于各條件下制得顆粒的水溶性均極好，故本試驗(yàn)僅考察了顆粒制劑的成型性及吸濕性。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，最終確定顆粒成型最佳工藝：提取物浸膏與輔料比為1∶3（浸膏∶甘露醇∶MCC＝1∶2∶1），用70%乙醇作為潤(rùn)濕劑制粒。