OPG過表達(dá)的ADSC對(duì)大鼠牙槽后槽骨缺損的修復(fù)作用

尹鵬 季于琪

[摘要]目的：探究骨保護(hù)素（Osteoprotegerin，OPG）過表達(dá)的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（Adipose-derived stem cell，ADSC）對(duì)大鼠牙槽后槽骨缺損修復(fù)的影響。方法：選擇SD雄性大鼠38只，其中6只用于獲得ADSC及ADSC OPG過表達(dá)轉(zhuǎn)染，鑒定轉(zhuǎn)染情況并觀察不同ADSC的形態(tài)、成骨分化、成脂分化及增殖能力；其中8只作為對(duì)照組，另外24只建立牙槽后槽骨缺損大鼠模型，隨機(jī)分為模型組、正常ADSC組和OPG過表達(dá)的ADSC組。6周后，Micro-CT掃描觀察骨缺損愈合情況；蘇木素-伊紅（Hematoxylin-eosin，HE）染色觀察骨缺損組織病理改變；免疫組化分析組織中堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）、骨鈣素（Osteocalcin，OCN）的表達(dá)；Western blot分析組織中OPG/核因子-κB受體活化因子配體（Receptor activator of nuclear factor-κB ligand，RANKL）/核因子-κB受體活化因子（Receptor activator of nuclear factor-κB，RANK）通路蛋白表達(dá)。結(jié)果：攜帶空載體與OPG過表達(dá)慢病毒的轉(zhuǎn)染效率分別為75.23%和79.08%；兩種ADSC均為長(zhǎng)梭形；OPG過表達(dá)ADSC中的OPG蛋白表達(dá)水平、增殖能力、成骨能力明顯高于正常ADSC，成脂能力明顯低于正常ADSC（P＜0.05）；與對(duì)照組相比，模型組的牙槽后槽骨缺損體積、RANKL、RANK蛋白表達(dá)水平明顯升高，Lane-Sandhu組織學(xué)評(píng)分、ALP、OCN陽性表達(dá)率、OPG蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05）；與模型組相比，正常ADSC組獲得與上述相反的結(jié)果；OPG過表達(dá)的ADSC組上述指標(biāo)的變化幅度較正常ADSC組更顯著。結(jié)論：OPG過表達(dá)的ADSC能夠促進(jìn)大鼠牙槽后槽骨缺損的修復(fù)。

[關(guān)鍵詞]脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞；骨保護(hù)素；牙槽后槽骨缺損；大鼠；成脂分化能力；成骨分化能力

[中圖分類號(hào)]R781.42? ? [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A? ? [文章編號(hào)]1008-6455（2024）03-0017-05

The Osteogenesis of ADSC with OPG Overexpression Has A Great Effect on the Posterior Alveolar Bone Defect

YIN Peng，JI Yuqi

（Department of Stomatology，Leshan People's Hospital，Leshan 614000，Sichuan，China）

Abstract： Objective? To investigate the effect of adipose-derived stem cell （ADSC） overexpressed with osteoprotegerin （OPG） on the repair of posterior alveolar bone defects in rats. Methods? Thirty-eight male SD rats were selected， of which 6 were used to obtain the overexpression of ADSC and ADSC OPG. The transfection was identified and the morphology，osteogenic differentiation，adipogenic differentiation and proliferation of different ADSC were observed. Among them， 8 rats were used as control group， and 24 rats with alveolar bone defect were randomly divided into model group， normal ADSC group and OPG overexpression ADSC group. Six weeks later， Micro-CT scan was used to observe the healing of bone defect in rats. The histopathological changes of bone defects were observed by hematoxylin-eosin （HE） staining. The expression of alkaline phosphatase （ALP） and osteocalcin （OCN） in the tissue was analyzed by immunohistochemistry. The expression of OPG/ receptor activator of nuclear factor-κB ligand （RANKL） / Receptor activator of nuclear factor-κB （RANK） pathway was analyzed by Western blot. Results? The transfection efficiency of empty vector and OPG overexpression lentivirus was 75.23% and 79.08%， respectively. Both kinds of ADSC were fusiform. The expression level of OPG protein， proliferation ability and osteogenic ability in OPG overexpressed ADSC were significantly higher than those in normal ADSC， while the adipogenic ability was significantly lower than that in normal ADSC （P＜0.05）. Compared with the control group， the volume of posterior alveolar bone defect， the expression of RANKL and RANK protein in the model group increased significantly， while the histological score of Lane-Sandhu， the positive expression rate of ALP and OCN and the expression level of OPG protein decreased significantly in the model group （P＜0.05）. Compared with the model group， the normal ADSC group achieved the opposite results. The changes of the above indexes in the ADSC group with overexpression of OPG were more significant than those in the normal ADSC group. Conclusion? ADSC overexpressed by OPG can promote the repair of alveolar bone defect in rats.

Key words： adipose-derived stem cell; osteoprotegerin; posterior alveolar bone defect; rats; adipogenic differentiation ability; osteogenic differentiation ability

口腔科骨代謝性疾病可導(dǎo)致大面積牙槽骨缺損，自體骨移植是目前治療無法自我修復(fù)骨缺損的首選方案，但存在供區(qū)骨量受限、增加患者機(jī)體損傷等問題[1]。組織工程學(xué)的興起和應(yīng)用解決了上述不足，其中，干細(xì)胞是研究的重點(diǎn)[2-3]。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSC）和ADSC是目前應(yīng)用于口腔骨再生醫(yī)學(xué)中的主要非牙源性干細(xì)胞，且ADSC是良好的種子細(xì)胞[4]。但單純ADSC還不能達(dá)到理想的骨缺損修復(fù)目的。研究表明[5]，通過基因工程技術(shù)對(duì)干細(xì)胞進(jìn)行修飾，能夠提高對(duì)骨缺損的修復(fù)效果。OPG主要由骨髓基質(zhì)細(xì)胞和成骨細(xì)胞合成并分泌，屬于腫瘤壞死因子超家族成員。有研究證實(shí)[6]，OPG修飾的BMSC能夠抑制破骨細(xì)胞活性，提高骨質(zhì)疏松大鼠的骨密度。但目前鮮見關(guān)于通過OPG修飾的ADSC對(duì)骨缺損修復(fù)的影響的研究。本研究探討OPG過表達(dá)的ADSC對(duì)大鼠牙槽后槽骨缺損修復(fù)的影響，為下一步的臨床應(yīng)用提供研究基礎(chǔ)。

1? 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：體重為（220±20）g的4月齡雄性SD大鼠38只，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。喂養(yǎng)3 d，正常飲食、飲水。本研究經(jīng)樂山市人民醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審核、批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)：L1329-18）。

1.1.2 主要試劑及儀器：DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清（美國Gibco公司）；胰蛋白酶（美國Hyclone公司）；pmirGLO表達(dá)載體（美國Promega公司）；LipofectamineTM2000試劑盒（美國Thermo Fisher Scientific公司）；吉姆薩染液、油紅O染色試劑盒、BCA蛋白質(zhì)測(cè)定試劑盒（上海碧云天）；茜素紅染液（北京Solarbio公司）；堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）抗體、骨鈣素（Osteocalcin，OCN）抗體、OPG抗體、RANKL抗體、RANK抗體（美國Abcam公司）；3-異丁基-1-甲基黃嘌呤（3-isobutyl-1-methylxanthine，IBMX）（上海康郎生物科技有限公司）。SZ51型光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司）；IX73型倒置顯微鏡（日本Olympus公司）；Micro-CT掃描系統(tǒng)（比利時(shí)Bruker公司）。

1.2 方法

1.2.1 ADSC的提取、分離培養(yǎng)及傳代：頸椎脫臼處死6只大鼠，獲取2 g腹部脂肪組織，PBS清洗，剪刀剪碎并置于離心管中，加入其2倍體積的0.075%的Ⅰ型膠原蛋白酶，37℃水浴震蕩消化30 min，加入等體積的DMEM培養(yǎng)基（含10%胎牛血清），1 500 rpm離心15 min并棄去上清，用DMEM培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀并經(jīng)細(xì)胞篩過濾。調(diào)整細(xì)胞濃度至1×106個(gè)/毫升，接種至裝有DMEM培養(yǎng)基（含10%胎牛血清）的培養(yǎng)皿中，置于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24 h后觀察細(xì)胞形態(tài)，3 d換液1次，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)80%～85%融合時(shí)進(jìn)行消化傳代，取第3代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 OPG過表達(dá)ADSC的轉(zhuǎn)染、篩選及驗(yàn)證：取第3代ADSC，用DMEM培養(yǎng)基重懸，以1×104個(gè)/孔的細(xì)胞數(shù)量接種于96孔板中，參照文獻(xiàn)[7]并按照慢病毒轉(zhuǎn)染說明書，將帶有表達(dá)綠色熒光的空載體慢病毒液和OPG過表達(dá)載體慢病毒液加入96孔板中與ADSC混合，分別為正常ADSC和OPG過表達(dá)的ADSC。培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，熒光顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)及綠色熒光強(qiáng)度，當(dāng)轉(zhuǎn)染率＞70%時(shí)即為轉(zhuǎn)染成功。Western blot分析進(jìn)一步驗(yàn)證轉(zhuǎn)染情況。

1.2.3 ADSC形態(tài)觀察及增殖、分化能力的檢測(cè)

1.2.3.1 細(xì)胞的形態(tài)觀察：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，胰酶消化，細(xì)胞涂片，甲醛固定，吉姆薩染色，PBS浸泡30 s，去離子水洗滌，晾干后在顯微鏡下觀察（40×）并拍照。

1.2.3.2 細(xì)胞增殖能力的檢測(cè)：取第3代ADSC，接種于6孔板中，細(xì)胞密度為6×104個(gè)/毫升，設(shè)置3個(gè)副孔，分別于細(xì)胞培養(yǎng)的第1、2、3、4、5、6、7天取3個(gè)副孔中的細(xì)胞，PBS洗滌，胰酶消化，10%血清培養(yǎng)液終止消化，顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)，每孔重復(fù)觀察計(jì)數(shù)3次取平均值。

1.2.3.3 ADSC成骨分化能力的檢測(cè)：取第3代細(xì)胞接種于6孔板中，密度為1×105個(gè)/ml，加入DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，細(xì)胞融合至80%后，更換為成骨誘導(dǎo)液（胎牛血清10 ml+雙抗1 ml+DMEM培養(yǎng)基89 ml+抗壞血酸50μmol/L+地塞米松100 nmol/L+β-甘油磷酸鈉10 mmol/L）繼續(xù)培養(yǎng)21 d，期間每3 d換液一次，采用茜素紅染色法檢測(cè)鈣沉積情況。

1.2.3.4 ADSC成脂分化能力的檢測(cè)：按上述成骨分化能力檢測(cè)中的方法，將細(xì)胞培養(yǎng)至融合80%后，更換為成脂誘導(dǎo)液（胎牛血清10 ml+雙抗1 ml+DMEM培養(yǎng)基89 ml+吲哚美辛0.2 mmol/L+地塞米松1μmol/L+胰島素10μg/ml+IBMX 0.5 mmol/ml），每3 d換液一次，培養(yǎng)21 d后，采用油紅O染色法檢測(cè)脂肪囊泡的形成情況。

1.2.4 ADSC種植于明膠海綿：將大小為2 mm×2 mm×2 mm的無菌明膠海綿置于48孔板內(nèi)，分別將正常ADSC與OPG過表達(dá)的ADSC接種于明膠海綿上，每孔1×105個(gè)細(xì)胞，體外培養(yǎng)3 d后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.5 大鼠分組及牙槽后槽骨缺損大鼠模型的制備

1.2.5.1 分組：將32只雄性SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、正常ADSC組、OPG過表達(dá)的ADSC組，每組8只。每組中的2只大鼠用于Micro-CT掃描和病理學(xué)觀察，3只用于免疫組化實(shí)驗(yàn)，3只用于Western blot實(shí)驗(yàn)。

1.2.5.2 牙槽后槽骨缺損大鼠模型的制備：模型組、正常ADSC組、OPG過表達(dá)的ADSC組大鼠按40 mg/kg的劑量腹腔注射2%的異戊巴比妥進(jìn)行麻醉，術(shù)區(qū)消毒后，無菌條件下手術(shù)暴露大鼠牙槽后槽骨，使用牙科鉆于上頜兩側(cè)后槽牙位置各造一個(gè)直徑2 mm、深2 mm的圓柱形缺損[8]。模型組、正常ADSC組、OPG過表達(dá)的ADSC組大鼠雙側(cè)缺損內(nèi)分別植入明膠海綿、明膠海綿與正常ADSC的復(fù)合體、明膠海綿與OPG過表達(dá)的ADSC的復(fù)合體；對(duì)照組大鼠未進(jìn)行牙槽后槽骨缺損處理，不植入明膠海綿。

1.2.6 Micro-CT掃描觀察各組大鼠牙槽后槽骨缺損區(qū)的修復(fù)情況：各組大鼠牙槽后槽骨缺損區(qū)植入明膠海綿6周后，麻醉并固定大鼠，采用Micro-CT對(duì)各組大鼠缺損區(qū)進(jìn)行掃描，觀察骨缺損區(qū)的愈合情況。

1.2.7 大鼠牙槽后槽骨缺損區(qū)組織病理學(xué)觀察及評(píng)價(jià)：植入明膠海綿6周后，處死大鼠，分離獲得手術(shù)區(qū)牙槽后槽骨標(biāo)本，多聚甲醛固定，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片，脫蠟，水化，HE染色，脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片，顯微鏡下觀察。采用Lane-Sandhu組織學(xué)評(píng)分[9]評(píng)價(jià)各組大鼠牙槽后槽骨缺損修復(fù)情況，包括連接、松質(zhì)骨、皮質(zhì)骨3個(gè)評(píng)價(jià)項(xiàng)目，每個(gè)項(xiàng)目0～4分，總分0～12分，評(píng)分越高提示骨缺損愈合情況越好。

1.2.8 免疫組化分析大鼠牙槽后槽骨缺損組織中成骨相關(guān)蛋白的表達(dá)：大鼠手術(shù)區(qū)牙槽后槽骨組織標(biāo)本切片于65℃烘箱中烘烤過夜，二甲苯浸泡脫蠟，逆濃度梯度乙醇復(fù)水，去離子水洗滌，抗原高壓修復(fù)，滴加3%的H2O2溶液，PBS洗滌，分別加ALP、OCN一抗，4℃孵育過夜，PBS洗滌，滴加二抗，37℃條件下孵育10 min，PBS洗滌，滴加二氨基聯(lián)苯胺（Diaminobenzidine，DAB）溶液，顯微鏡下觀察并控制染色時(shí)間，PBS洗滌，蘇木素復(fù)染，0.5%氨水返藍(lán)，脫水，透明，封片，電子顯微鏡下觀察。

1.2.9 Western blot分析大鼠牙槽后槽骨缺損組織中OPG/RANKL/RANK通路蛋白的表達(dá)：RIPA緩沖液提取大鼠缺損牙槽后槽骨組織中的總蛋白，使用BCA蛋白質(zhì)測(cè)定試劑盒測(cè)量蛋白質(zhì)濃度。電泳，轉(zhuǎn)膜，5%脫脂牛奶封閉，分別添加抗OPG、RANKL、RANK一抗，4℃下孵育過夜，加入辣根過氧化物酶偶聯(lián)的二抗，37℃下孵育2 h，β-actin作內(nèi)參。使用Gel Pro Analyzer 4.0對(duì)圖像進(jìn)行灰度識(shí)別。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，作圖軟件采用GraphPad Prism 5.0。計(jì)量資料以x?±s表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P＜0.05表明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1 OPG過表達(dá)ADSC的轉(zhuǎn)染鑒定：熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，攜帶空載體與OPG過表達(dá)慢病毒的轉(zhuǎn)染效率分別為75.23%和79.08%，見圖1A。Western blot分析結(jié)果顯示，OPG過表達(dá)的ADSC中OPG蛋白表達(dá)水平明顯高于正常ADSC（P＜0.05），見圖1B。

2.2 正常ADSC與OPG過表達(dá)的ADSC形態(tài)及增殖、分化能力的比較：正常ADSC與OPG過表達(dá)的ADSC均為纖維細(xì)胞樣長(zhǎng)梭形，細(xì)胞核明顯，核質(zhì)清晰；與正常ADSC相比，OPG過表達(dá)的ADSC增殖能力、成骨分化能力明顯增強(qiáng)，成脂分化能力明顯減弱，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖2。

2.3 Micro-CT掃描觀察各組大鼠牙槽后槽骨缺損區(qū)的修復(fù)情況：與對(duì)照組相比，模型組牙槽后槽骨缺損體積明顯增加，與模型組相比，正常ADSC組的牙槽后槽骨缺損體積明顯減小，OPG過表達(dá)的ADSC組的牙槽后槽骨缺損體積較正常ADSC組明顯減小。見圖3。

2.4 各組大鼠牙槽后槽骨缺損區(qū)組織病理染色結(jié)果的觀察：HE染色結(jié)果顯示，對(duì)照組上頜骨組織中的新生骨、新生血管及成骨細(xì)胞較為多見；模型組新生骨數(shù)量較少，可見大量的纖維結(jié)締組織；與模型組相比，正常ADSC組可見明顯的新生骨生成，但結(jié)構(gòu)較為紊亂，且仍以編織骨為主，并附著大量的纖維組織，OPG過表達(dá)的ADSC組可見大量新生骨和部分新生血管，新生骨周圍存在大量的成骨細(xì)胞，但新生骨結(jié)構(gòu)仍較紊亂。與對(duì)照組相比，模型組的Lane-Sandhu組織學(xué)評(píng)分明顯降低，與模型組相比，正常ADSC組的Lane-Sandhu組織學(xué)評(píng)分明顯升高，OPG過表達(dá)的ADSC組的Lane-Sandhu組織學(xué)評(píng)分較正常ADSC組明顯升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖4。

2.5 各組大鼠牙槽后槽骨中成骨相關(guān)蛋白表達(dá)水平的比較：與對(duì)照組相比，模型組大鼠牙槽后槽骨中的ALP、OCN蛋白陽性表達(dá)率明顯降低，與模型組相比，正常ADSC組的ALP、OCN蛋白陽性表達(dá)率明顯升高，與正常ADSC組相比，OPG過表達(dá)ADSC組的ALP、OCN蛋白陽性表達(dá)率明顯升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖5。

2.6 各組大鼠牙槽后槽骨中OPG/RANKL/RANK通路蛋白表達(dá)水平的比較：與對(duì)照組相比，模型組的OPG蛋白表達(dá)水平明顯下降，RANKL、RANK蛋白表達(dá)水平明顯升高，與模型組相比，正常ADSC組的OPG蛋白表達(dá)水平明顯升高，RANKL、RANK蛋白表達(dá)水平明顯下降，與正常ADSC組相比，OPG過表達(dá)ADSC組的OPG蛋白表達(dá)水平明顯升高，RANKL、RANK蛋白表達(dá)水平明顯下降，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖6。

3? 討論

隨著組織工程學(xué)的發(fā)展，干細(xì)胞移植修復(fù)骨缺損已成為目前醫(yī)學(xué)界研究的熱點(diǎn)，避免了自體骨移植來源不足及異體骨移植和骨替代材料移植受到種間差異限制等問題[10-11]。ADSC作為理想的種子細(xì)胞，具有多向分化潛能，通過移植至骨缺損組織并分化為成骨細(xì)胞發(fā)揮骨缺損修復(fù)的作用，但修復(fù)效果有限[5]。OPG能夠抑制破骨細(xì)胞增殖活化，促進(jìn)破骨細(xì)胞凋亡[12]。有研究發(fā)現(xiàn)[13]，骨形態(tài)發(fā)生蛋白2過表達(dá)能夠提高ADSC的增殖和成骨分化能力，促進(jìn)顱骨大段骨缺損組織的愈合。還有研究證實(shí)[14]，OPG修飾的牙周膜干細(xì)胞有利于其成骨分化，促進(jìn)新西蘭兔牙槽骨組織的再生修復(fù)。但目前關(guān)于OPG是否會(huì)增強(qiáng)提高ADSC的增殖及成骨分化的能力尚未明確。

在本研究中，OPG過表達(dá)ADSC中的OPG蛋白表達(dá)水平明顯升高，表明ADSC中OPG過表達(dá)轉(zhuǎn)染成功。此外，OPG過表達(dá)ADSC的增殖能力及成骨分化能力明顯增強(qiáng)，成脂分化能力明顯減弱，表明OPG過表達(dá)能夠促進(jìn)ADSC的增殖和成骨分化。目前關(guān)于通過OPG修飾的ADSC對(duì)骨缺損愈合的影響也尚未闡明。Song J等[15]的研究表明，凝血酶抑制劑通過上調(diào)BMSC中Wnt的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)BMSC的成骨分化，抑制牙周病模型小鼠的牙槽骨丟失，促進(jìn)骨缺損的修復(fù)。在本研究中，牙槽后槽骨缺損模型大鼠骨缺損部位分別植入明膠海綿與正常ADSC的復(fù)合體、明膠海綿與OPG過表達(dá)ADSC的復(fù)合體6周后，骨缺損體積均明顯減小，組織病理染色結(jié)果顯示骨缺損區(qū)組織的成骨細(xì)胞數(shù)量及新生骨數(shù)量明顯增加，且應(yīng)用OPG過表達(dá)ADSC的改善效果更顯著，表明OPG過表達(dá)ADSC能夠促進(jìn)大鼠牙槽后槽骨缺損組織的愈合。

成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞平衡被打破是牙槽后槽骨缺損及骨缺損后難以自主愈合的重要原因[16]。ALP、OCN與骨鈣化相關(guān)，分別是成骨細(xì)胞分化成熟的早期標(biāo)志和晚期標(biāo)志物[17-18]。裘吉雨等[19]的研究結(jié)果顯示，骨形成蛋白9過表達(dá)的人牙周膜干細(xì)胞能夠明顯增強(qiáng)大鼠牙周缺損區(qū)ALP、OCN的活性，增強(qiáng)干細(xì)胞的成骨分化能力，促進(jìn)新骨形成，修復(fù)牙槽骨缺損。在本研究中，正常ADSC組與OPG過表達(dá)的ADSC組大鼠骨缺損區(qū)牙槽后槽骨組織中的ALP、OCN陽性表達(dá)率較模型組均明顯增加，表明ADSC能夠促進(jìn)大鼠牙槽后槽骨缺損區(qū)新骨的形成，OPG過表達(dá)的ADSC組大鼠骨缺損組織中的ALP、OCN陽性表達(dá)率更高，提示OPG過表達(dá)能夠促進(jìn)ADSC成骨細(xì)胞分化，有利于骨缺損愈合。OPG是RANK的假性受體，競(jìng)爭(zhēng)性阻斷RANKL與RANK的結(jié)合，從而抑制骨吸收和骨破壞。OPG/RANKL/RANK是調(diào)節(jié)成骨與破骨偶聯(lián)的信號(hào)通路[20]。在本研究中，正常ADSC組與OPG過表達(dá)的ADSC組大鼠骨缺損區(qū)牙槽后槽骨組織中的OPG蛋白表達(dá)水平較模型組明顯升高，RANKL、RANK蛋白表達(dá)水平較模型組明顯下降，且OPG過表達(dá)的ADSC組的改善作用更明顯，表明OPG過表達(dá)的ADSC可能通過調(diào)節(jié)OPG/RANKL/RANK信號(hào)通路對(duì)大鼠缺損組織起到促進(jìn)成骨和抑制破骨的作用。

綜上所述，OPG過表達(dá)能夠增強(qiáng)ADSC的增殖和成骨分化能力，抑制ADSC的成脂分化能力，OPG過表達(dá)的ADSC能夠促進(jìn)大鼠牙槽后槽骨缺損組織的愈合及新生骨形成，上調(diào)ALP、OCN成骨相關(guān)蛋白的表達(dá)，其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)OPG/RANKL/RANK信號(hào)通路有關(guān)。

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[收稿日期]2022-10-31

本文引用格式：尹鵬，季于琪.OPG過表達(dá)的ADSC對(duì)大鼠牙槽后槽骨缺損的修復(fù)作用[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2023，33（3）：17-21，25.