自育小菊熱處理結(jié)合微莖尖培養(yǎng)脫毒技術研究

魏進莉

摘要 以自育小菊為材料，在獲取無菌組培苗的情況下，將組培苗進行30 d的變溫熱處理后，在生物解剖鏡下剝?nèi)∏o尖大小為0.1～0.3、0.3～0.5、0.5～0.8 mm 3種不同的規(guī)格，接種于未添加任何激素的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)。結(jié)果表明，自育小菊培養(yǎng)30 d后相應的成活率分別為16.7%、40.0%和63.3%。經(jīng)過病毒檢測，當剝?nèi)〉那o尖大小在0.1～0.3 mm時，可100%脫除病毒，并隨著剝?nèi)∏o尖的變大，脫毒效果也變差。

關鍵詞 自育小菊；熱處理；微莖尖培養(yǎng)；脫毒

中圖分類號 S682.1+1；S336 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）08-0140-02

目前，菊花生產(chǎn)過程中存在的主要問題是病毒感染造成的品種退化。我國常見的菊花病毒有8種，病毒的危害會造成產(chǎn)量降低、植株矮化，大大降低商品價值[1]，并進一步影響進出口貿(mào)易。病毒病害防治困難，一旦侵染，危害嚴重，給從事菊花生產(chǎn)的工作者帶來巨大損失[2]。為了提高菊花商品產(chǎn)出率和保持優(yōu)良品種的特性，快速有效的脫毒技術是根除病毒危害獲得菊花脫毒苗的有效方法。近年來，隨著業(yè)界對扦插繁殖種苗的品質(zhì)要求不斷提高，脫毒種苗已成為行業(yè)標準和發(fā)展趨勢及亮點。

為提高菊花種苗的品質(zhì)和產(chǎn)量，本文針對自育的盆栽小菊新優(yōu)品種，采用了“熱處理結(jié)合微莖尖培養(yǎng)脫毒法”對脫毒技術進行了研究，取得了良好的效果。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

自育盆栽小菊新品種，編號分別為34X-212、39W-146、39X-75、30X-67、33X-139。所用病毒種類為CVB、TMV、INSV。

1.2 試驗方法

1.2.1 植物材料。將待脫毒品種材料獲得的無菌組培瓶苗（圖1），置于光照培養(yǎng)箱中，溫度為38 ℃，光照處理14 h；再在溫度為30 ℃下，黑暗處理10 h，連續(xù)處理30 d。然后，將經(jīng)過熱處理的植株在40倍解剖鏡下，無菌操作剝?nèi)∥⑶o尖，莖尖大小為0.1～0.3、0.3～0.5、0.5～0.8 mm 3種不同的規(guī)格，每種規(guī)格60個莖尖，剝?nèi)『蠼臃N于未添加任何激素的MS培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為溫度（24.0±0.5）℃、光照強度1 000 lx，持續(xù)14 h，培養(yǎng)30 d統(tǒng)計成活情況。

1.2.2 病毒檢測。將培養(yǎng)成活的微莖尖培養(yǎng)到株高3 cm左右、有3個以上展開葉片時，取3種不同規(guī)格的微莖尖培養(yǎng)所得植株各30株，用ELISA酶聯(lián)免疫法進行病毒脫毒效果的檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 熱處理脫毒

待脫毒的無菌瓶苗經(jīng)過30 d的變溫熱處理，植株的葉片大多數(shù)已老化變黃（圖2），芽的生長受到抑制，基本處于停滯狀態(tài)，但仍具有活性。

2.2 莖尖剝離脫毒（微莖尖培養(yǎng)）

由表1、2可知，剝?nèi)〉那o尖越大，其培養(yǎng)成活率越高，越小則成活率越低。同時，莖尖成活率與品種特性也有一定關系，有的品種容易成活，有的品種則隨著莖尖變小，成活率明顯下降。

由表1可知，不同的品種莖尖成活情況不同，并且在培養(yǎng)過程中生長速度也有所不同。0.3～0.5 mm莖尖及苗的生長狀況見。

由表2可知，不同大小莖尖的成活情況不同，同一品種莖尖越小成活率越低。當莖尖小于0.3 mm時，成活率明顯下降；相反，莖尖越大，成活率越高。當莖尖大于0.5 mm時，莖尖成活率明顯增高。

2.3 病毒檢測（脫毒效果）

由表3可知，用ELISA酶聯(lián)免疫檢測法，對菊B病毒（CVB）、煙草花葉病毒（TMV）和鳳仙花壞死斑點病毒（INSV）3種菊花生產(chǎn)中最常見的病毒進行檢測，發(fā)現(xiàn)剝?nèi)〉那o尖越小，脫毒率越高，脫毒效果越好；反之，剝?nèi)〉那o尖越大，脫毒率約低，脫毒效果越差。

當剝?nèi)〉那o尖小于0.3 mm時，可100%脫除病毒；當莖尖大小為0.3～0.5 mm時脫毒率在83%以上；而當莖尖大于0.5 mm時，脫毒效果明顯變差，只有不到30%的莖尖能夠脫除病毒。

3 結(jié)論與討論

在生產(chǎn)應用中進行脫除病毒時，剝?nèi)〉那o尖越小，其脫毒效果越好[3]。但隨著剝離莖尖的縮小，成活率就會相應降低[4]，剝?nèi)〉牟僮麟y度也增大。另外，病毒的特點不同，脫除的難易程度也不同。要根據(jù)病毒的特性以及植物材料品種的特點，結(jié)合需求確定需要剝?nèi)〉那o尖大小以及數(shù)量，以保證兼顧成活率和脫毒效果[5-6]。

4 參考文獻

[1] 胡軍榮.菊花的脫毒與快繁技術[J].安徽農(nóng)學通報，2008，14（5）：142.

[2] 趙霜，李青，時頌.不同處理方法對菊花‘神馬脫除病毒的影響[J].東北林業(yè)大學報，2013，41（3）：103-106.

[3] 曹孜義，劉國民.實用植物組織培養(yǎng)技術教程[J].蘭州：甘肅科學出版社，1996.

[4] 丁文雅.植物組織培養(yǎng)脫毒技術與檢測方法[J].農(nóng)業(yè)科技通訊，2009（3）：75-77.

[5] 郭倩楠，張文芳，賈小玉，等.菊花病毒脫除及其檢測技術研究進展[J].浙江農(nóng)業(yè)科學，2016（12）：2035-2039.

[6] 畢偉，董慧慧，李順凱.植物組培脫毒技術及其在花卉上的應用[J].山東林業(yè)科技，2007（5）：102-104.